沙门氏菌类活疫苗活菌计数参考疫苗的研究

为研制沙门氏菌类活疫苗活菌计数的参考疫苗,以期更科学地评价活菌计数结果的有效性,研究制备了一批仔猪副伤寒活疫苗作为参考疫苗候选物,对其性状、纯粹检验、真空度、剩余水分进行检测,对其运输稳定性、均一性进行测定,组织协作标定对参考疫苗候选物进行赋值,用协作标定的方法统计参考疫苗候选物在18个月的保存期,将参考疫苗初步应用于仔猪副伤寒活疫苗活菌计数的检验。结果表明,参考疫苗的性状、纯粹检验、剩余水分和真空度测定均符合《中国兽药典》的规定,均一性试验结果显示10瓶参考疫苗候选物计数结果的变异系数小于10%,说明其均一性良好。协作标定统计出参考疫苗候选物的赋值范围为(3.0,4.0)×109CFU/头份,保存期试验结果显示参考疫苗候选物在-70℃以下保存18个月菌数稳定。参考疫苗的初步应用显示本参考疫苗不仅可以为沙门氏菌类活疫苗活菌计数提供参照物,而且还可用于控制普通琼脂培养基的质量。

仔猪副伤寒活菌计数参考疫苗保存期试验

为了解仔猪副伤寒活菌计数参考疫苗候选物在18个月内的稳定性,对其活菌数用协作标定的方法进行统计,结果表明,仔猪副伤寒参考疫苗候选物在2℃~10℃冷藏条件下运输48 h,活菌数无明显下降,说明运输稳定性良好,随机抽取10瓶参考疫苗候选物进行均一性检验,菌数的变异系数小于10%,说明参考疫苗的均一性良好,协作标定统计的活菌数中位数为3.5×10^9 CFU/头份。参考疫苗候选物在18个月的保存期内菌数中位数为3.4~3.75×10^9 CFU/头份,未随保存时间的延长而下降,证明在18个月保存期内稳定性良好。本研究为仔猪副伤寒活菌计数参考疫苗的研究提供依据。

河北省脊髓灰质炎实验室细胞系敏感性实验方法的建立

目的评价河北省疾病预防控制中心脊髓灰质炎(脊灰)实验室所用细胞系对脊灰病毒的敏感性,制备河北省脊灰实验室质量控制的标准毒株(QC)。方法96孔微量培养板滴定法。结果河北省脊灰实验QC3次独立的细胞敏感性实验结果的滴度波动±0·5log10CCID50,同时用中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室提供的已知滴度的中国sabin参考株(ChinaSabinTestReferenceStrain;CSTRS)作平行对照,CSTRS株3次滴度结果与其本身提供的参考值相比较,其滴度波动也均在±0·5log10CCID50。结论河北省脊灰实验室QC结果符合实验要求,脊灰实验室所用细胞系对脊灰病毒的敏感性未下降。

江苏省脊髓灰质炎实验室细胞系敏感性实验方法的建立和监测

目的评价江苏省疾病预防控制中心脊髓灰质炎(脊灰)实验室所用细胞系对脊灰病毒的敏感性,制备江苏省脊灰实验室的标准毒株(QC)。方法采用96孔微量培养板滴定法。结果江苏省脊灰实验QC 3次独立的细胞敏感性实验结果的滴度波动为±0.5㏒10CCID50,同时用中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室提供的已知滴度的Sabin参考株(China Sabin Test Reference Strain;CSTRS)做平行对照,CSTRS株3次滴度结果与其本身提供的参考值相比较,其滴度波动也均为±0.5㏒10CCID50。结论江苏省脊灰实验室QC结果符合实验要求,脊灰实验室所用细胞系对脊灰病毒的敏感性未下降,是敏感、有效的。

麻疹减毒活疫苗国家参考品长期稳定性评价

目的评价麻疹减毒活疫苗国家参考品的长期稳定性。方法对保存于-20℃的冻干麻疹减毒活疫苗国家参考品进行外观、水分含量、病毒滴度检测,并对2011—2021年的麻疹参考品滴度进行趋势分析。对2家企业的使用结果进行分析,与参考品的协作标定结果进行对比。结果经检测,参考品的外观检查符合规定,参考品中水分含量为1.48%;使用10余年的滴定结果显示,麻疹疫苗国家参考品的滴度在4.70~5.20 lgCCID_(50)/mL之间,均在质控范围内。年度均值在4.95~5.10 lgCCID_(50)/mL之间,年度检测的标准差在0.09~0.15 lgCCID_(50)/mL。趋势分析显示,参考品滴度稳定,以标示值为中心上、下波动,未出现明显下降趋势。2家疫苗企业的检测结果显示出相同趋势。结论麻疹减毒活疫苗国家参考品具有良好的长期稳定性,能够为国内相应疫苗的质控、签发提供保障。

不同储存条件对结核亚单位疫苗参考品免疫原性的影响

目的评价不同储存条件对结核亚单位疫苗参考品(简称参考品)免疫原性的影响。方法按以下抗原与佐剂比例配制1人份疫苗参考品:[10μg Ag85b蛋白+10μg EC蛋白+50μg Ploy IC+0.2 mg Al(OH)3]/0.2 ml。将疫苗参考品于-70及4℃分别保存1、6、9、12个月,并于每个时间点免疫BALB/c小鼠,实验分4组:PBS组、冷藏组(4℃保存参考品)、冻存组(-70℃保存参考品)及现配组,均经小鼠后肢内侧肌肉注射,0.2 ml/只,共免疫3次,每次间隔10 d,末次注射10 d后,收集小鼠脾淋巴细胞,并经眼球采血,分离血清。ELISPOT法检测抗原特异性的IL-2、IFNγ水平,CCK-8法检测细胞增殖水平,间接ELISA法检测血清Ig G抗体效价。结果经Ag85b和EC刺激,现配组各月间的斑点形成细胞数(spot forming cells,SFCs)及脾细胞增殖指数(stimulating indox,SI)差异无统计学意义(P>0.05),且均显著高于PBS组(P<0.05),表明免疫学检验模型成立且稳定,各试验组与现配组结果具有可比性。经4℃冷藏12个月,参考品的Ag85b及EC特异性IL-2、IFNγ相对水平及脾淋巴细胞相对增殖水平均显著低于冷藏1个月的参考品(P<0.01),经-70℃冻存12个月,参考品的Ag85b、EC特异性IL-2、IFNγ相对水平及脾淋巴细胞相对增殖水平与冻存1个月的参考品差异无统计学意义(P>0.05)。与现配组比较,冷藏组及冻存组Ag85b和EC特异性抗体水平相对平稳,各月间差异均无统计学意义(P>0.05),且两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 -70℃冻存12个月内的参考品的细胞及体液免疫水平均未明显降低,可作为该参考品的长期保存条件。不同保存条件对疫苗免疫保护力的影响需进一步考察。

脊髓灰质炎病毒细胞系敏感性实验方法的建立

目的评价中国疾病预防控制中心(CDC)病毒病预防控制所国家脊髓灰质炎(脊灰)实验室所用细胞系对脊灰病毒的敏感性,制备国家脊灰实验室质量控制株(China Sabin Master Reference,CSMR)和用于脊灰实验室网络的中国Sabin参考株(China Sabin Test Reference Strain;CSTRS),提供给省级CDC脊灰实验室用于其对所使用的RD-A、L20B细胞系的敏感性评价。方法96孔微量培养板滴定法。结果国家脊灰实验室CSMR 3次独立的细胞敏感性实验结果的滴度波动在±0.5log10,同时用英国国家生物标准品与控制样品研究所(NIBSC)提供的已知滴度Sabin脊灰病毒参考株(NIBSC原始株)作平行对照,NIBSC原始株3次滴度结果与其本身提供的参考值相比较,其滴度波动也均在±0.5log10。结论通过NIBSC原始株3次滴度结果作平行对照,证实中国CSMS结果符合实验要求,国家脊灰实验室的内部CSMR结果有效;从而制定了国家脊灰实验室质量控制参考株的滴度参考值,表明国家脊灰实验室所用细胞系的敏感性未下降,实验程序无误。CSTRS可作为标准株分发到省级CDC脊灰实验室用于进行细胞系敏感性实验。

黑龙江省2006-2013年脊髓灰质炎实验室细胞系敏感性实验监测结果分析

黑龙江省脊灰实验室2005年从国家脊灰实验室引进无支原体污染的RD（来源于人横纹肌肉瘤细胞）和L20B（来源于转基因小鼠肺细胞,表达了人类脊灰受体）的合格细胞系和国家脊灰实验室制备、鉴定,且已知滴度的中国Sabin参考株。制备了本实验室质量控制的标准毒株（QC）,建立了本实验室细胞敏性实验方法,开始对本实验室的RD和L20B细胞系敏感性实施评价。