基于ERK介导C-Myc/PD-L1协同作用探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤机制

目的:探讨参芪抑瘤方联合顺铂经ERK介导C-Myc/PD-L1相协途径对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制。方法:60只SPF级雄性昆明小鼠,采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组,其余50只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组[2.5×10^(-3) g/(kg·3 d)]、参芪抑瘤方低[13.515 g/(kg·d)]、中[27.030 g/(kg·d)]、高剂量[54.060 g/(kg·d)]联合顺铂[2.5×10^(-3) g/(kg·3 d)]组,每组10只,治疗13 d,末次给药24 h后,麻醉处死小鼠,测定小鼠肿瘤抑制率和脾指数、胸腺指数;HE染色观察小鼠肿瘤组织病理学变化;ELISA试剂盒检测肿瘤组织匀浆液中EGF、IFN-γ含量;IHC法和Western blot法检测肿瘤组织中p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达;RT-PCR法检测肿瘤组织中ERK、C-Myc、PD-L1mRNA表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠平均体质量和脾脏指数均降低(P<0.05);与模型组相比,各治疗组肿瘤抑制效果明显,且参芪抑瘤方联合顺铂组以剂量依赖性方式抑制肝癌小鼠肿瘤生长,提高小鼠平均体质量和脾指数、胸腺指数,促进肿瘤细胞坏死,增加坏死面积,降低肿瘤组织中EGF和IFN-γ含量以及p-ERK1/2、C-Myc、PD-L1蛋白表达和ERK、C-Myc、PD-L1 mRNA表达(P<0.05);与顺铂组相比,参芪抑瘤方中、高剂量联合顺铂组治疗效果显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,显著下调肿瘤组织中C-Myc与PD-L1蛋白表达,该机制可能通过调控ERK信号通路相关蛋白表达发挥抑瘤作用。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能的影响

目的基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及相关免疫指标的影响。方法50只SPF级雄性KM小鼠,采用随机数字表法取10只小鼠作为空白组,其40只小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,模型复制成功后将模型小鼠随机分为模型组、顺铂组(2.5×10^(-3)g·kg^(-1))、参芪抑瘤方中药组(27.03 g·kg^(-1))、参芪抑瘤方(27.03 g·kg^(-1))联合顺铂组(2.5×10^(-3)g·kg^(-1)),每组10只,治疗13天,测定抑瘤率、脾指数和胸腺指数;苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)观察肿瘤病理学变化;流式细胞术检测脾组织中CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞水平;实时荧光定量PCR(Realtime PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein,HMGB1)/TOLL样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路相关的基因与蛋白表达。结果①与空白组相比,模型组小鼠平均体质量及小鼠脾指数、胸腺指数、CD4^(+)T细胞水平以及CD4^(+)T/CD8^(+)T值均显著降低、CD8^(+)T细胞水平升高(P<0.05);②与模型组相比,各治疗组小鼠平均瘤质量降低(P<0.05),瘤体积减小(P<0.05),体质量升高(P<0.05),中药组和联合组小鼠脾指数、胸腺指数、CD4^(+)T细胞水平以及CD4^(+)T/CD8^(+)T比值均升高,CD8^(+)T细胞水平降低,且中药组治疗效果显著(P<0.05),小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低,且联合组效果显著(P<0.05);③与顺铂组相比,联合组小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05);④与中药组相比,联合组小鼠肿瘤组织中HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05)。结论参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长,提高相关免疫指标,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路活化有关。

参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45细胞周期阻滞及抗侵袭转移的影响

目的 探讨不同浓度参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45 细胞周期阻滞及抗侵袭转移作用的相关机制.方法 60 只SPF 级Wistar 大鼠,随机分为对照组和参芪抑瘤方低、中、高剂量组,每组15 只.参芪抑瘤方低、中、高剂量组分别给予0.25、0.50、1.00 g 原药材/mL 药液灌胃,空白组给予等量饮用水灌胃,每日2 次,连续7 d,末次灌胃2 h 后取血,分离血清.MKN-45 细胞经不同浓度药物血清处理后,流式细胞术检测细胞周期,免疫组化检测COX-2、PTEN 蛋白表达.结果 药物血清干预后细胞G0～G1 期比例增加,S 期比例减少;药物血清可降低MKN-45 细胞COX-2 蛋白阳性表达率,升高PTEN 蛋白阳性表达率（P〈0.05）.结论 参芪抑瘤方药物血清阻滞细胞周期及抗侵袭转移作用可能与影响COX-2、PTEN 蛋白表达有关.

参芪抑瘤方联合幽门螺杆菌根治方案对幽门螺杆菌阳性胃癌前病变患者疗效及血清GAS、TRX-1、C-myc蛋白表达影响

目的研究参芪抑瘤方联合幽门螺杆菌(Hp)根治方案对Hp阳性胃癌前病变(PLGC)患者的治疗效果,以及对血清胃泌素(GAS)、硫氧还蛋白-1(TRX-1)水平和胃黏膜C-myc蛋白表达的影响。方法选择2016年8月-2018年7月期间收治的180例Hp阳性PLGC患者,按照随机数字表法将患者分为对照组和观察组,每组90例。对照组患者接受Hp根治方案治疗:克拉霉素与阿莫西林连续治疗2周,奥美拉唑与枸橼酸铋钾连续治疗12周。观察组在对照组的基础上联合参芪抑瘤方,连续治疗12周。比较两组治疗前后血清中GAS、TRX-1水平、胃黏膜中C-myc蛋白表达、病理组织学评分、中医症候评分、临床功能(PRO)评分和疗效。结果观察组总有效率和Hp消除率为90.00%(81/90)、94.44%(85/90)高于对照组总有效率的76.67%(69/90)、84.44%(76/90),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组血清GAS、TRX-1水平、胃黏膜C-myc蛋白表达均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组各项中医症候评分、各项PRO量表评分以及病理组织学评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用参芪抑瘤方联合Hp根治方案治疗Hp阳性PLGC患者,能够显著提高疗效和Hp清除率,并可抑制血清中GAS、TRX-1和胃黏膜中C-myc蛋白的表达,改善患者临床表现和胃黏膜病变情况,值得推广应用。

参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的观察参芪抑瘤方药物血清对胃癌MGC-803细胞增殖的影响,探讨其相关机制。方法以参芪抑瘤方不同浓度药物血清干预胃癌MGC-803细胞后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,q RT-PCR检测CDKN1B、CDKN1C基因表达,Western blot检测p27、p57蛋白表达。结果 3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24、48、72 h,细胞增殖水平显著降低(P<0.01),且与时间和剂量呈依赖关系;3%、5%、10%药物血清作用于MGC-803细胞24 h后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少;q RT-PCR检测结果显示,与对照组和空白血清组比较,药物血清各剂量组MGC-803细胞CDKN1B、CDKN1C m RNA表达显著上调(P<0.01);Western blot检测结果显示,与对照组比较,药物血清各剂量组MGC-803细胞p27、p57蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论参芪抑瘤方药物血清可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,其机制可能是通过调节CDKN1B、CDKN1C m RNA和蛋白表达,进而干预细胞周期。

参芪抑瘤方联合新辅助化疗治疗中晚期宫颈癌临床疗效分析

目的:观察参芪抑瘤方联合新辅助化疗治疗中晚期宫颈癌的临床疗效。方法:将60例Ⅱb~Ⅲb期宫颈癌患者随机分为观察组、对照组各30例。2组均给予新辅助化疗方案,观察组同时服用参芪抑瘤方,治疗达到手术指征。观察2组患者肿瘤直径改善状况、肿瘤转移情况、治疗前后血清免疫学细胞前后变化、对化疗的耐受情况、副反应、3年生存率及临床疗效。结果:总有效率观察组为66.7%,对照组为40.0%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05);化疗时间观察组短于对照组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径治疗后2组均明显缩小,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗后组间比较差异也有统计学意义(P<0.05)。CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+、NK细胞治疗后观察组均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组无明显变化(P>0.05);治疗后2组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。3年生存率、局部复发率、远处转移率2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗耐受率观察组为93.3%,对照组为83.3%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。血小板减少情况及白细胞减少情况,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:参芪抑瘤方有助于提高新辅助化疗疗效,减少化疗周期,提升患者免疫水平,提高治疗耐受性及依从性。

参芪抑瘤方联合顺铂对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用及其对小鼠免疫功能的影响

观察参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌小鼠的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制。建立小鼠皮下H22移植癌模型。成瘤后将实验动物随机分为正常组,模型组,参芪抑瘤方低、高剂量组,顺铂组,参芪抑瘤方低、高剂量分别联合顺铂组。给药14d后剥离瘤块,计算肿瘤抑制率;剥取小鼠脾脏,计算脾指数;股动脉取血,并分离血清,ELISA法检测血清中CD3^+、CD4^+和ICD8^+的含量。(1)与模型组相比,参芪抑瘤方高、低剂量组和顺铂组抑瘤率分别为36%、23%和52%,参芪抑瘤方高、低剂量联合顺铂组分别为63%、44%,各组间有统计学差异(P<0.05)。(2)与模型组相比,顺铂组、参芪抑瘤方高剂量组及参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组CD3+的浓度分别升高;顺铂组、参芪抑瘤方高剂量组及参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组CD4^+的浓度分别降低了;顺铂组、参芪抑瘤方高剂量组及参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组CD8^+的浓度分别升高,各组间有统计学差异(P<0.05)。参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌小鼠实体瘤的生长,其机制可能与增强H22荷瘤T细胞的活性、有效纠正荷瘤导致的Th 1/Th 2失衡以及增强机体的抗肿瘤免疫功能等有关。

参芪抑瘤方联合顺铂对MFC荷瘤小鼠瘤组织 XIAP、PTEN表达的影响

目的:研究参芪抑瘤方联合顺铂对MFC荷瘤小鼠瘤组织连锁凋亡抑制蛋(XIAP)及磷酸酶和张力蛋白同源缺失性基因(PTEN)表达的影响。方法:建立MFC荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将50只荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、参芪抑瘤方低剂量组(中药低组)、参芪抑瘤方高剂量组(中药高组)、参芪抑瘤方低剂量联合顺铂组(联合低组)、参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组(联合高组),连续灌胃给药15 d,观察肿瘤生长情况以及小鼠一般情况,15 d后处死小鼠,剥取瘤组织称重,计算抑瘤率;实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和免疫组织化学技术(IHC)分别检测肿瘤组织中XIAP、PTEN mRNA和蛋白的表达情况。结果:不同剂量组抑瘤率依次为顺铂组55.25%,参芪抑瘤方低、高剂量组分别为27.7%和30.58%,芪抑瘤方低、高剂参量联合顺铂组分别为66.3%和67.78%。联合用药组优于单纯用药组,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,顺铂组、中药组、联合组中XIAP mRNA及蛋白的表达均降低,PTEN mRNA及蛋白的表达升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与顺铂组、中药低组和中药高组相比,联合低组和联合高组中XIAP mRNA及蛋白的表达均降低,PTEN mRNA及蛋白的表达升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:参芪抑瘤方具有一定的抗MFC胃癌移植瘤作用,并与顺铂联用具有减毒增效作用。其作用可能是通过下调瘤组织中XIAP的表达,上调PTEN的表达有关。

参芪抑瘤方联合腹腔热化疗对胃癌性腹水大鼠一般状态的观察

目的探讨参芪抑瘤方联合腹腔热化疗对胃癌性腹水大鼠一般状况的影响。方法将42只成功造模的胃癌性腹水大鼠随机分为对照组和观察组,每组21只,两组大鼠均进行多西紫杉醇腹腔热化疗并同时给予胸腺五肽,观察组大鼠在此基础上给予参芪抑瘤方,连续治疗4周。比较两组大鼠造模前后与治疗后的腹围、体重、腹水量、肿瘤重量、转氨酶、血常规及血清铁蛋白变化情况。结果治疗后观察组肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、体重、腹围、腹水量和肿瘤重量均低于对照组(P<0.05,P<0.01),白细胞和血小板高于对照组(P<0.05)。两组大鼠造模后和治疗后CK、AST、LDH、体重、腹围和铁蛋白均高于造模前(P<0.05),白细胞和血小板均低于造模前(P<0.05)。两组大鼠治疗后CK、AST、LDH、体重、腹围和铁蛋白均高于造模后(P<0.05),且白细胞和血小板均低于造模后(P<0.05)。结论行腹腔热化疗的胃癌性腹水大鼠给予参芪抑瘤方,有助于改善一般状态,且能缓解不良反应,为临床实践提供理论依据。

参芪抑瘤方联合新辅助化疗对中晚期宫颈癌患者免疫功能及预后的影响

目的探讨参芪抑瘤方联合新辅助化疗对中晚期宫颈癌患者免疫功能及预后的影响。方法回顾性分析2015年1月至2016年1月于本院接受治疗的94例中晚期宫颈癌患者的临床资料,采用随机数表法分为两组,每组47例。对照组行新辅助化疗治疗,观察组在对照组基础上联合参芪抑瘤方治疗,比较两组免疫功能指标、临床疗效及远期疗效、不良反应发生率。结果治疗后,观察组治疗总有效率、NK细胞、CD3^(+)、CD4^(+)水平、3年存活率均高于对照组,肿瘤转移总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中晚期宫颈癌患者采用参芪抑瘤方联合新辅助化疗治疗效果确切,可改善患者免疫功能,降低肿瘤转移发生率,提高患者存活率,值得临床推广应用。

参芪抑瘤方联合放疗对中晚期宫颈癌患者免疫功能及预后的影响

目的探讨参芪抑瘤方联合放疗对中晚期宫颈癌患者免疫功能及预后的影响。方法选取2015年4月至2018年10月赣州市肿瘤医院收治的84例中晚期宫颈癌患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组(42例)与观察组(42例)。对照组采用放疗治疗,观察组采用参芪抑瘤方联合放疗治疗。比较两组的疾病控制率、客观缓解率、免疫功能及预后情况。结果观察组患者的客观缓解率为71.43%,高于对照组的47.62%,观察组的疾病控制率为90.48%,高于对照组的69.05%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后CD3^(+)、CD4^(+)、自然杀伤(NK)细胞水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的3年生存率高于对照组,肿瘤转移总发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪抑瘤方联合放疗治疗中晚期宫颈癌患者,疗效可靠,可改善机体免疫功能,降低肿瘤转移总发生率,提高3年生存率。

参芪抑瘤方联合化疗对骨肉瘤患者免疫功能、免疫球蛋白和生活质量的影响

目的 探讨参芪抑瘤方联合化疗对骨肉瘤患者免疫功能、免疫球蛋白和生活质量的影响。方法 依据治疗方法的不同将120例骨肉瘤患者分为观察组和对照组,每组60例,对照组患者给予阿奇霉素;顺铂化疗,观察组患者在此基础上给予参芪抑瘤方辅助治疗。比较两组患者免疫功能指标[CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、自然杀伤(NK)细胞,计算CD4^(+)/CD8^(+)]、免疫球蛋白(IgM、IgA、IgG)水平、生活质量[欧洲癌症研究与治疗组织生命质量测定量表(EORTC QLQ-C30)]和不良反应发生情况。结果 治疗后,两组患者CD3^(+)、CD4^(+)、NK细胞水平和CD4^(+)/CD8^(+)均低于本组治疗前(P﹤0.05),CD8^(+)水平均高于本组治疗前(P﹤0.05),观察组患者CD3^(+)、CD4^(+)、NK细胞水平和CD4^(+)/CD8^(+)均高于对照组(P﹤0.05),CD8^(+)水平低于对照组(P﹤0.05)。治疗后,两组患者IgM、IgA、IgG水平均低于本组治疗前(P﹤0.05),但观察组IgM、IgA、IgG水平均高于对照组(P﹤0.05)。治疗后,两组患者EORTC QLQ-C30量表各维度评分均高于本组治疗前(P﹤0.05),且观察组患者EORTC QLQ-C30量表各维度评分均高于对照组(P﹤0.05)。两组患者白细胞减少、血小板减少、恶心呕吐、转氨酶升高、周围神经毒性发生率均无明显差异(P﹥0.05)。结论 骨肉瘤患者在化疗基础上予以参芪抑瘤方辅助治疗,可进一步稳定免疫球蛋白水平及免疫功能,改善生活质量,且安全性较高。

基于PTEN/PI3K/Akt信号通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的:探讨参芪抑瘤方联合顺铂在磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路中对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组、参芪抑瘤方高、中、低剂量联合顺铂组,10只/组,另随机筛选10只健康小鼠作为正常组;干预组小鼠灌胃给予参芪抑瘤方高、中、低剂量(54.06、27.03、13.515 g·kg^(-1)·d^(-1)),腹腔注射用顺铂(2.5 mg·kg^(-1)),1周2次,正常组、模型组给予生理盐水,连续治疗13 d后处死小鼠计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠瘤体病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫荧光法检测小鼠瘤组织中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21),细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(p27)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测瘤组织中PTEN、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白含量。结果:与模型组比较,顺铂组和参芪抑瘤方高、中、低剂量联合顺铂组移植瘤瘤质量明显降低(P<0.05),参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组抑瘤作用更明显;各组肿瘤组织中出现不同程度的坏死,参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组最为明显。与模型组比较,顺铂联合参芪抑瘤方高、中、低剂量及顺铂组p21、p27、PTEN表达均明显升高(P<0.05);PI3K、p-Akt蛋白相对表达量降低(P<0.05),其中参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组最为明显。结论:参芪抑瘤方可能通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路中关键分子表达,从而上调下游抑增殖蛋白p21、p27蛋白表达,进而发挥对H22肝癌小鼠的显著抑瘤作用,并且增强化疗效果。

参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤作用的研究

目的探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制。方法用雄性昆明小鼠复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,另取10只正常小鼠作为空白组。将模型鼠随机分为模型组(0.9%NaCl)、顺铂组(2.5×10^(-3)g·kg^(-1)·3 d^(-1)顺铂)及低、中、高剂量(13.52、27.03和54.06 g·kg^(-1)·d^(-1)参芪抑瘤方)联合顺铂(顺铂2.5×10^(-3)g·kg^(-1)·3 d^(-1))组,干预治疗13 d。用苏木精-伊红(HE)染色和细胞凋亡染色(TUNEL)法观察肿瘤病理变化及凋亡情况;用实时荧光定量聚合酶链反应法和蛋白质印迹法检测肿瘤组织中磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA及蛋白的表达水平。结果模型组、顺铂组、参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组肿瘤组织细胞凋亡率分别为(6.99±0.34)%、(33.18±3.50)%和(64.32±2.21)%,p-JNK蛋白相对表达水平分别为0.21±0.02、0.43±0.05和1.04±0.05,Bcl-2蛋白相对表达水平分别为1.60±0.01、1.36±0.05和0.47±0.01,Bax蛋白相对表达水平分别为0.31±0.03、0.45±0.03和0.99±0.02,Bad蛋白相对表达水平分别为0.34±0.02、0.66±0.03和1.10±0.03,Caspase-9蛋白相对表达水平分别为0.39±0.04、0.50±0.03和0.85±0.06;模型组的上述指标与顺铂组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);模型组和顺铂组的上述指标与参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论参芪抑瘤方联合顺铂能有效抑制H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,该作用机制可能与调控JNK信号通路及相关凋亡蛋白的表达有关。

基于糖原合成酶激酶3β/核因子-κB通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的基于糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/核因子-κB(NF-κB)通路探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法皮下接种H22瘤株建立小鼠H22实体移植瘤模型,待造模成功后随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组10只;另取10只正常小鼠作为空白组。空白组和模型组均给予0.9%NaCl;对照组腹腔注射2.5 mg·kg^(-1)顺铂,每周2次;低、中、高剂量实验组灌胃给予13.52、27.03和54.06 g·kg^(-1)·d^(-1)参芪抑瘤方煎液+腹腔注射2.5 mg·kg^(-1)顺铂,每周2次。6组小鼠均连续治疗13 d,处死小鼠,计算肿瘤体积;用蛋白质印迹法检测瘤组织中GSK3β/NF-κB通路相关蛋白的表达水平;用反转录酶-聚合酶链反应检测GSK3β/NF-κB通路相关基因和细胞增殖抗原标记物(Ki67)和细胞增殖核抗原(PCNA)mRNA相对表达量。结果中、高剂量实验组和对照组、模型组的第13天肿瘤体积分别为(2014.80±885.60)、(1324.75±873.69)、(2459.45±663.30)和(3355.50±631.72)mm3,p-GSK3β蛋白相对表达水平分别为1.05±0.16、0.86±0.14、1.20±0.21和1.66±0.12,p-NF-κB(p65)蛋白相对表达水平分别为0.45±0.11、0.38±0.10、0.55±0.11和0.74±0.05,GSK3βmRNA相对表达量分别为0.22±0.13、0.08±0.03、0.50±0.07和1.00±0.00,NF-κB mRNA相对表达量分别为0.22±0.04、0.10±0.09、0.45±0.06和1.00±0.00,Ki67 mRNA相对表达量分别为0.48±0.08、0.10±0.03、0.68±0.11和1.00±0.00,PCNA mRNA相对表达量分别为0.46±0.08、0.20±0.02、0.61±0.16和1.00±0.00。对照组和中、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论参芪抑瘤方对H22肝癌小鼠有显著的抑瘤作用,能显著降低Ki67和PCNA的表达,其机制可能是通过抑制GSK-3β/NF-κB信号通路响应。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD炎性焦亡途径探讨参芪抑瘤方联合顺铂对H22肝癌荷瘤小鼠的作用机制

目的:探讨参芪抑瘤方干预细胞焦亡在抗肿瘤效应中的作用机制。方法:随机抽取10只BALB/c小鼠(雄性)作为正常组,余40只建立肝癌小鼠异位移植瘤模型,建模5 d后随机分为模型组、顺铂组[2.5×10^(-3)g·kg^(-1)·(3 d)^(-1)]、参芪抑瘤方组(27 g·kg^(-1)·d^(-1))、联合组(参芪抑瘤方+顺铂)。正常组与模型组以等量生理盐水灌胃,连续干预10 d,观察各组小鼠一般情况,干预结束后,称量小鼠瘤体质量,计算抑瘤率,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理变化;检测小鼠肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;原位末端标记法(TUNEL)检测小鼠肿瘤组织细胞DNA损伤情况;免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测瘤组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测瘤组织中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量。结果:与正常组比较,模型组小鼠精神状态差,倦卧懒动,毛色暗淡;肝功能检测血清ALT、AST水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠精神状态明显好转,且各给药组均可不同程度抑制瘤体生长,肿瘤质量均下降,其中联合组抑瘤率最强(P<0.01);HE染色示,模型组小鼠肿瘤组织病理形态学病变显著,各给药组均有一定程度改善,以参芪抑瘤方组及联合组细胞核,溶解破裂更为明显;肝功能检测中,参芪抑瘤方组及联合组小鼠血清ALT、AST水平均下降显著(P<0.01);各给药组炎症因子IL-1β和IL-18均下降(P<0.05,P<0.01);TUNEL染色示各给药组干预后TUNEL染色阳性降低(P<0.05,P<0.01),以顺铂组和参芪抑瘤方组降低显著(P<0.01);Western blot、免疫组化、免疫荧光在肿瘤组织中检测发现,各给药组NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平均下降(P<0.05,P<0.01)。与顺铂组比较,参芪抑瘤方组和联合组小鼠精神状态佳,瘤体形态规则,联合组小鼠肿瘤质量下降(P<0.05);参芪抑瘤方组ALT和AST水平下降(P<0.05);参芪抑瘤方组和联合组IL-1β和IL-18均下降(P<0.05,P<0.01),以联合组最为明显(P<0.01);免疫组化结果显示,联合组小鼠肿瘤组织中GSDMD蛋白表达显著降低(P<0.01);免疫荧光检测发现参芪抑瘤方组NLRP3在肿瘤组织中表达显著降低(P<0.01);Western blot结果显示参芪抑瘤方组及联合组NLRP3蛋白表达水平下降显著(P<0.01),联合组Caspase-1蛋白表达水平下降显著(P<0.01);GSDMD蛋白表达下降不明显,差异无统计学意义。结论:参芪抑瘤方联合顺铂具有明显抑瘤作用,其抗肿瘤作用可能是通过下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD炎性焦亡途径抑制细胞焦亡,缓解肝癌小鼠的炎症反应,达到抗肿瘤的作用。

参芪抑瘤方抑制胃癌细胞MKN-45增殖和侵袭转移作用机制

目的:观察参芪抑瘤方(抑瘤方)血清抑制MKN-45增殖和侵袭转移作用,并探讨其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Trans-well和划痕实验观察细胞侵袭与迁移能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测环氧合酶-2(COX-2)和人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)mRNA表达;免疫组化检测细胞COX-2,PTEN蛋白表达。结果:参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预24,48,72 h后,抑制率为31.25%,33.09%,34.50%;参芪抑瘤方含药血清(2.8 g·m L-1)干预48 h后,细胞侵袭能力、转移能力和迁移能力分别下降了36.18%,49.46%,36.46%;COX-2 mRNA表达量下降90%,PTEN升高89.72%;与空白血清组比较,参芪抑瘤方组COX-2蛋白表达减弱;PTEN蛋白表达增强(P<0.05)。结论:参芪抑瘤方药物血清通过影响COX-2,PTEN mRNA和蛋白表达,抑制MKN-45细胞的增殖,减弱其侵袭转移能力。

参芪抑瘤方对H22荷瘤小鼠瘤组织VEGF及TGF基因表达的影响

目的研究参芪抑瘤方对H22荷瘤小鼠瘤组织VEGF及TGF基因表达的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将60只荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂阳性对照组、参芪抑瘤方低剂量组、参芪抑瘤方高剂量组、参芪抑瘤方低剂量联合顺铂组、参芪抑瘤方高剂量联合顺铂组,连续灌胃给药14天,观察肿瘤生长情况以及小鼠一般情况,l4天后处死小鼠,剥取瘤组织称重,计算抑瘤率;qRT-PCR技术检测肿瘤血管生成相关基因VEGF、TGF-β基因表达;免疫组织化学技术检测肿瘤组织中肿瘤血管生成相关蛋白VEGF、TGF-β的表达情况。结果不同剂量的参芪抑瘤方组的抑制率分别为:高剂量联合组达到53%,低剂量联合组为33%,高剂量中药组为35%,低剂量中药组为21%,阳性对照组为39%,差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR结果显示:与模型组相比,各用药组中VEGF、TGF-βmRNA的表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学染色显示:VEGF、TGF-β在联合组中蛋白着色变浅,呈弱阳性表达,联合组较顺铂阳性组、纯中药组蛋白表达量低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪抑瘤方在mRNA和蛋白水平,可以下调肿瘤组织中VEGF、TGF-β的表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成,从而发挥抑瘤效应。

参芪抑瘤方含药血清对BGC-823胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：探讨参芪抑瘤方含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和周期的影响,并探讨其作用机制。方法：以参芪抑瘤方3%,5%,10%含药血清干预BGC-823细胞后,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclindependent kinase inhibitor,CDKN）1B,CDKN1C mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p27,p57蛋白表达情况。结果：不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24,48,72 h后,细胞存活率显著降低（P〈0.01）,且与时间和浓度呈依赖关系;不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24 h后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少;Real-time PCR结果表明,与溶剂组和空白血清组比较,参芪抑瘤方各组CDKN1B,CDKN1C mRNA表达上调（P〈0.05,P〈0.01）;Western blot结果显示,与溶剂组比较,参芪抑瘤方各组p27,p57蛋白表达上调（P〈0.05,P〈0.01）。结论：参芪抑瘤方含药血清可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,其机制可能通过调节CDKN1B,CDKN1C mRNA及p27,p57蛋白表达,进而干预细胞周期有关。

基于网络药理学-分子对接及体内实验探讨参芪抑瘤方治疗肝癌的作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接技术探究参芪抑瘤方治疗肝癌的潜在机制,并以H22肝癌小鼠模型对核心靶点进行验证。方法:在中药系统药理数据等数据库检索参芪抑瘤方有效成分及作用靶点,通过GeneCards、OMIM、TTD、PharmGKB和DrugBank数据库获得药物及疾病相关靶点,取其交集靶点导入String数据库进行蛋白质相互作用分析,通过Bioconductor在线软件进行基因组数据的高通量分析,进行基因本体GO功能富集分析和京都基因与基因组百科全书KEGG通路富集分析。运用AutoDock vina对活性成分与核心靶点进行分子对接和结合能力预测。构建H22肝癌小鼠模型,进行肿瘤组织形态学观察并验证参芪抑瘤方对肿瘤组织中核心靶点的影响。结果:网络药理学分析结果得到参芪抑瘤方中包括槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇等核心成分;GO富集分析发现靶蛋白分子功能主要集中于核受体活性、配体活化、类固醇激素受体的活性等方面,细胞组成涉及膜筏、膜微域、膜区域的组成成分等方面,生物过程涉及对药物的反应、细胞对化学应激的反应、氧化应激反应等方面;KEGG富集结果分析得知,参芪抑瘤方是通过人巨细胞病毒感染、PI3K-AKT信号通路、乙肝、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染、MAPK等信号通路治疗肝癌;关键靶点涉及蛋白激酶B(protein kinase B,AKT1)、促分裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等。分子对接结果表明3个核心成分与靶蛋白AKT1、MAPK3、TNF均有强烈的结合能力。为验证网络药理学与分子对接结果,应用H22肝癌荷瘤小鼠模型验证参芪抑瘤方对肝癌的干预作用。动物实验结果表明,与模型对照组比较,顺铂2.5×10g/kg组和参芪抑瘤方54 g/kg组瘤质量明显降低(P<0.05),其抑瘤作用明显;HE染色示各组肿瘤组织出现不同程度的坏死,参芪抑瘤方54 g/kg组最为明显;参芪抑瘤方能明显降低小鼠肝癌组织AKT1、MAPK3的蛋白表达,上调TNF-α蛋白的表达(P<0.05)。结论:参芪抑瘤方可能通过抑制AKT1、MAPK3蛋白的表达,上调TNF-α蛋白的表达,通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)及其他信号通路来调节肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和血管生成等生物学过程,从而在肝癌治疗中发挥作用。