血管外膜肥大细胞激活介导的不稳定斑块模型建立及参莲片的干预

观察参莲片对apoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(As)不稳定斑块模型的干预作用及其机制。大鼠腹腔肥大细胞体外培养,以参莲片各剂量组(100、50、25和12.5 mg·L^(-1))和色甘酸钠(200μg·L^(-1))预处置2 h后加入P物质刺激诱导肥大细胞脱颗粒,检测上清中组胺、类胰蛋白酶、IL-1β和NF-κB含量。采用apoE^(-/-)小鼠颈总动脉套管法合并高脂饮食诱导As斑块形成,在套管部位血管外膜处滴加P物质建立外膜肥大细胞活化介导的不稳定斑块模型,分设颈动脉套管假手术组(M1)、颈动脉套管+高脂饮食组(M2)、M2+套管部位滴加P物质(0.5μg/只)组(M3)、参莲片组(95、190和380 mg·kg^(-1)·d^(-1))、阿托伐他汀组(2.6 mg·kg^(-1)·d^(-1))和正常对照组(C)。实验结束后,取血检测总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL-C)、高敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinases 9,MMP-9)和组胺(histamin)含量。取动脉组织通过苏木素-伊红(hematoxylin and eosin staining,HE)染色观察病理变化,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞脱颗粒情况,免疫荧光法染色肥大细胞CD117抗原表达。采用Bio-Rad磷酸化检测试剂盒检测病变血管组织中8个炎症相关信号分子磷酸化。综合评价参莲片对不稳定斑块的保护作用。结果表明,参莲片可以稳定大鼠腹腔肥大细胞细胞膜,减少其活化释放组胺、类胰蛋白酶(均P<0.05)及IL-1β和NF-κB(P<0.05或P<0.01)。apoE^(-/-)小鼠M3模型组血管外膜处肥大细胞增殖和脱颗粒显著增多,释放出的活性物质显著升高,诱发病灶处外膜大量炎性细胞的浸润,内膜下及斑块内出血(红细胞沉积),中膜平滑肌变薄,同时血清斑块炎性活化相关指标hs-CRP、MMP-9等显著增高,提示As斑块呈不稳定状态;参莲片可减少肥大细胞增殖和脱颗粒,降低hs-CRP、MMP-9和组胺含量(P<0.05或P<0.01),减少病灶处炎症反应,减轻血管组织中IκB和p38 MAPK磷酸化程度(均P<0.05);减少斑块内出血及胶原降解,从而增加As斑块的稳定性。血管外膜肥大细胞激活介导的不稳定斑块模型建立成功。参莲片可以通过稳定肥大细胞,减少病灶处炎症反应,减缓As发生发展,增加As斑块的稳定性。