参附方对颅脑损伤大鼠亚低温期冷诱导RNA结合蛋白表达的影响

目的：从冷诱导RNA结合蛋白（CIRP）表达推测参附方辅助亚低温治疗颅脑损伤的作用机制。方法将SD大鼠按随机数字表法分为非转染对照组、腺病毒介导免疫荧光逆转录病毒组（AD5-GFP转染组）及腺病毒介导携CIRP静默表达基因免疫荧光逆转录病毒组（AD5-GFP-CIRP-SiRNA转染组），每组30只；再将3组分为颅脑损伤和亚低温治疗模型组、中药低、高剂量组，每组10只。中药组于亚低温治疗48 h后经尾静脉注射参附注射液1 mL/kg（低剂量组）和5 mL/kg（高剂量组），模型组注射1 mL/kg生理盐水，均每日1次，连用2 d。两个转染组先采取病毒载体大鼠鞘内给药复制病毒转染模型〔分别一次性鞘内注射0.1 mL空白AD5-GFP和0.1 mL（1×1010 pfu/mL）AD5-GFP-CIRP-SiRNA，非转染对照组给予0.1 mL生理盐水〕。取大鼠脑皮质、海马区、下丘脑部位脑组织，用原位末端缺刻标记试验（TUNEL）测定脑细胞凋亡情况，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定CIRP mRNA表达，蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）测定大鼠肉瘤蛋白（Ras）、 Ras活化相关因子（Raf）、细胞外信号调节激酶（ERK）、磷酸化ERK（p-ERK）、丝裂原活化蛋白激酶 ERK（MEK）、磷酸化MEK（p-MEK）的蛋白表达量。结果非转染对照组、AD5-GFP转染组中药低、高剂量组脑皮质、海马区、下丘脑AI均较模型组降低，CIRP mRNA表达均较模型组升高；AD5-GFP-CIRP-SiRNA转染组中模型组和中药低、高剂量组脑皮质、海马区、下丘脑AI及CIRP mRNA表达差异均无统计学意义，但AI均明显高于非转染对照组和AD5-GFP转染组相应组，CIRP mRNA明显低于非转染对照组和AD5-GFP转染组相应组。各组各部位Raf/Ras、p-MEK/MEK 蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），非转染对照组、AD5-GFP转染组中药低、高剂量组脑皮质、海马区、下丘脑p-ERK/ERK均较模型组降低，且以中药高剂量组降低更显著〔脑皮质：非转染对照组为7.2±1.0比15.3±1.8，AD5-GFP转染组为8.1±0.7比16.2±1.5；海马区：非转染对照组为6.6±0.8比14.7±2.0，AD5-GFP转染组为6.8±1.0比14.9±1.3；下丘脑：非转染对照组为9.4±1.1比12.7±1.7，AD5-GFP转染组为10.6±1.3比9.4±1.1，均P＜0.05〕；AD5-GFP-CIRP-SiRNA转染组各亚组各部位p-ERK/ERK比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论参附注射液可能通过促进CIRP过表达，降低ERK表达，抑制继发的转录因子磷酸化的启动信号转导，从而减少神经细胞凋亡，发挥其辅助亚低温治疗的抗凋亡作用。

参附强心方加减治疗心肾阳虚证慢性心力衰竭的效果分析

参附强心方加减治疗心肾阳虚证慢性心力衰竭的效果分析。方法 对收入的肾阳虚证慢性心力衰竭患者予以护理研究,对照组接受常规治疗,观察组联合参附强心方加减治疗,对比患者治疗结果。结果 较对照组,观察组综合治疗有效率较高且患者的并发症发生率较低,患者的中医症候积分显著降低,心功能显著改善,结果更好。结论 参附强心方加减可有效治疗心肾阳虚证慢性心力衰竭患者病症,可推广。

参附强心方加减治疗心肾阳虚证慢性心力衰竭的临床效果

目的观察参附强心方对心肾阳虚证慢性心力衰竭(简称心衰)的临床疗效。方法长春中医药大学附属医院心病科门诊或住院的心肾阳虚证心衰患者62例随机分为治疗组和对照组各31例。对照组给予西医规范化治疗,治疗组在对照组基础上加用参附强心方口服,治疗12 w后观察对比B型钠尿肽(BNP)、左室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVDD)、6 min步行距离及中医症状积分改善情况。结果与治疗前比,治疗后两组BNP、LVEF、LVDD、6 min步行距离、中医症状均有明显改善,且治疗组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论参附强心方联合西医规范化药物治疗心肾阳虚证慢性心衰较单纯西药治疗疗效更佳。

参附五苓散加味治疗脾肾阳虚型乙型肝炎肝硬化失代偿患者的临床观察

失代偿期乙型肝炎肝硬化属于终末期肝病,临床治疗十分棘手,但中医药治疗显示其明显的优势[1]。为了观察参附五苓散加味对失代偿肝硬化的治疗效果,我们在既往实验研究的基础上[2],临床应用参附五苓散加味治疗脾肾阳虚型乙型肝炎肝硬化患者,取得较好的临床疗效,现报道如下。

参附方对颅脑损伤大鼠亚低温治疗期并发肺水肿的影响

目的:研究参附方对颅脑损伤(TBI)大鼠亚低温(MH)治疗期肺水肿的发生率、严重程度及相应炎性因子的影响。方法:将120只大鼠进行颅脑损伤造模后,按随机数字表法将其分为模型组、亚低温组、中药组、亚低温加中药组,每组30只。模型组大鼠尾静脉注射生理盐水,亚低温组大鼠尾静脉注射生理盐水并给予亚低温治疗,中药组大鼠尾静脉注射参附注射液,亚低温加中药组大鼠尾静脉注射参附注射液并给予亚低温治疗,每天1次,连用3天。观察4组大鼠出现肺水肿的数量、肺水肿的严重程度,并测定肺水肿大鼠的肺组织湿干比,检测肺组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TFN-α)的含量。结果:与模型组比较,亚低温组大鼠肺水肿发生率、肺湿重、肺湿干重比、肺组织中IL-6、TFN-ɑ含量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与亚低温组比较,中药组和亚低温加中药组大鼠肺水肿发生率、肺湿重、肺湿干重比、肺组织中IL-6、TFN-ɑ含量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:参附方可降低TBI大鼠MH治疗期肺水肿的发生率及其严重程度,其作用机制可能是参附方通过自身温阳益气作用拮抗了MH治疗时的阴寒凝滞,提高机体的免疫力,从而减轻肺水肿。

参附芎泽方对心肌梗死后心力衰竭模型大鼠心肌能量代谢的影响

目的研究参附芎泽方对心肌梗死(心梗)后心力衰竭(心衰)模型大鼠的心肌能量代谢的影响。方法 SD大鼠分为假手术组、模型组、参附芎泽方药组、曲美他嗪组。采用结扎大鼠冠状动脉前降支建立心梗后心力衰竭模型,假手术组和模型组给予纯净水,参附芎泽方药组和曲美他嗪组分别给予参附芎泽方(含生药量为8.4 g/kg)和曲美他嗪(含药量6.3 g/kg)相应的等体积药液。以20 m L/kg的容积灌胃,1次/d,连续28 d。在末次给药后1 h,腹主动脉采血,离心,取血清,采用ELISA法检测血清CK、CK-MB、FFA含量,Western blot检测心肌组织AMPK、GLUT4蛋白的表达,HE染色观察心肌组织病理学改变。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清CK、CK-MB含量降低,FFA含量升高,心肌组织AMPK、GLUT4蛋白表达均下降(P<0.05)。与模型组比较,参附芎泽方组和曲美他嗪组大鼠血清CK、CK-MB含量升高,FFA含量降低,心肌组织AMPK、GLUT4蛋白表达均增高(P<0.05)。与曲美他嗪组比较,参附芎泽方组大鼠血清CK-MB含量升高,FFA含量降低,心肌组织AMPK蛋白表达下降(P<0.05)。HE染色结果 ,心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌组织发生明显形态学改变,心肌灶状坏死,坏死灶内肌纤维溶解,心肌纤维肥大,局部可见断裂、萎缩变性的肌纤维,心肌间质水肿,并见大量炎细胞浸润。曲美他嗪和参附芎泽方给药组可不同程度减轻心肌组织形态学改变。结论参附芎泽方可增加血清CK、CK-MB含量,降低血清FFA含量,通过调控心肌组织AMPK、GLUT4蛋白的表达,减轻心肌组织病理损伤,改善心衰。

经典名方参附方活性成分的药理作用及临床应用研究进展

参附方中的人参来源于五加科草本植物人参的根茎,盛产于东北,被誉为“百草之王”,性温,味甘、微苦,入脾、肺二经[1]。附子为毛茛科植物乌头的子根的加工品,味辛、甘,性大热,归心、肾、脾经[2]。人参附子二者联用,具有益气、温阳、固脱之功,主治厥脱及阳虚诸证[3]。参附方的主要活性成分为人参皂苷Rg1等皂苷类成分和乌头碱等生物碱类成分,研究表明这类成分均具有较好的药理活性[4]。参附方在临床上使用的制剂主要为参附汤和参附注射液,而参附注射液是依据“参附汤”通过剂型改良而成。

参附芎泽方对心衰大鼠血流动力学及心肌纤维化的作用

目的:观察参附芎泽方对冠脉结扎所致心衰大鼠血流动力学及心肌纤维化的干预作用并探讨其相关机制。方法:SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、方药组。模型组、方药组结扎冠状动脉左前降支,假手术组只穿线不结扎。方药组每次经口灌服参附芎泽浓缩液;假手术组、模型组灌服等剂量生理盐水。各组干预8周后采用血流动力学检测评价心功能,Masson染色观察心肌纤维化程度,Western blotting检测心肌TGF-β1表达的变化。结果:与模型组相比,方药组左室舒张末压(LVEDP)显著降低,左室收缩压(LVSP)、左室内压上升和下降的最大速率(±dp/dtmax)明显升高;同时,方药组可使心衰大鼠心肌胶原纤维的沉积减少,心肌TGF-β1的表达降低。结论:参附芎泽方可改善冠脉结扎所致心衰大鼠的心功能,抑制心肌纤维化,其机制可能与降低心肌TGF-β1表达有关。

参附养心方联合西药治疗慢性心力衰竭临床观察

目的探讨参附养心方联合西药治疗慢性心力衰竭(CHF)患者的效果。方法选择2017年4月—2020年8月于宜春市中医院就诊的78例CHF患者,采用随机数字表法分为2组,每组39例。对照组给予西药(呋塞米片+盐酸贝那普利片+螺内酯+酒石酸美托洛尔片+缬沙坦胶囊)治疗,观察组在对照组的基础上加用参附养心方治疗。对比2组血管内皮功能[降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET)和一氧化氮(NO)]、心功能[左心室收缩末期容积(LVESV)、舒张末期容积(LVEDV)和射血分数(LVER)]及不良反应。结果治疗后,观察组CGRP、NO、LVEF水平高于对照组;ET、LVEDD、LVESD低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组不良反应比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CHF患者联合应用参附养心方与西药治疗有利于心功能和血管内皮功能的改善,且安全性较高,利于预后。

参附黄配方对脓毒症小鼠大脑皮质氧化损伤的影响

目的 探讨参附黄配方对脓毒症神经元损伤的影响及作用机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脓毒症组和参附黄组,每组26只。假手术组小鼠麻醉后仅游离盲肠,不结扎及穿刺。脓毒症组和参附黄组采取盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。参附黄组造模后4 h予参附黄组方2.5 g/kg灌胃,每隔12 h进行下一次灌胃,每日灌胃2次,每次0.5 ml;脓毒症组和假手术组每次灌服纯净水0.5 ml,灌胃时间同参附黄组,各组均灌胃3 d。造模72 h后采用尼氏染色观察大脑前额叶皮层神经元数量的变化,采用二氢乙啶染色检测大脑皮质组织中活性氧含量,采用8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)免疫荧光染色评价大脑皮质氧化DNA损伤的情况。结果 与假手术组比较,脓毒症组小鼠前额叶皮层神经元数量显著减少,活性氧含量增加,8-OHdG表达增多(P<0.05);与脓毒症组相比较,参附黄组神经元数量增多,活性氧含量降低,8-OHdG表达减少(P<0.05)。结论 参附黄配方对CLP小鼠前额叶皮质神经元损伤具有一定保护作用,其机制可能降低氧化应激和氧化DNA损伤有关。

参附黄方对斑马鱼炎症、巨噬细胞吞噬功能的影响

目的探讨参附黄方对斑马鱼炎症、巨噬细胞吞噬功能的作用及其机制。方法以转基因中性粒细胞荧光斑马鱼、野生型AB品系斑马鱼为实验对象,分别建立斑马鱼炎症模型和巨噬细胞吞噬模型。采用死亡率和心血管毒性评价筛选参附黄方的药用浓度;采用中性粒细胞计数评价参附黄方对斑马鱼炎症模型的作用,并以吲哚美辛为对照;检测斑马鱼白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、重组人精氨酸酶1(ARG1)、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达评价参附黄方对斑马鱼吞噬细胞吞噬功能的影响。结果参附黄方对斑马鱼的最大安全浓度为10 mg/ml,本研究选择参附黄低、中和高剂量浓度分别为1.1、3.3和10 mg/ml。在炎症模型中,模型对照组斑马鱼炎症部位中性粒细胞个数高于正常对照组(P<0.01);与模型对照组比较,吲哚美辛组和参附黄中、高剂量组斑马鱼炎症部位中性粒细胞个数降低(P<0.01);参附黄中剂量组炎症消退作用最强为44.1%。在巨噬细胞吞噬模型中,与正常对照组比较,参附黄中、高剂量组TNF-α、IL-10 mRNA表达升高,参附黄高剂量组IL-1βmRNA表达升高、ARG1 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论参附黄方具有很好的免疫激活作用,其机制可能与降低中性粒细胞数量和调节巨噬细胞分型有关。

参附芎泽方对压力超负荷大鼠心肌TGF-β1、CTGF表达的影响

目的探讨参附芎泽方对压力超负荷大鼠心肌纤维化的干预作用。方法 SD大鼠随机分成假手术组、模型组、方药组,每组10只。采用腹主动脉缩窄术建立压力超负荷大鼠心肌纤维化模型。假手术组和模型组给予纯净水,方药组给予参附芎泽方(含生药量6.4g/kg)相应的等体积药液。以20ml/kg的容积灌胃,一日1次,连续8周。ELISA法检测血清TNF-α、AngⅡ含量;Western blot检测转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达;HE染色观察心肌组织的病理变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清TNF-α、AngⅡ含量增高,心肌组织中TGF-β1与CTGF表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,参附芎泽方药组血清TNF-α、AngⅡ含量降低,心肌组织TGF-β1与CTGF表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色模型组心肌纤维可见明显断裂、部分溶解,排列紊乱,大量结缔组织增生。而方药组心肌纤维排列较为整齐,心肌细胞轻度肿大。结论参附芎泽方可通过降低血清TNF-α、AngⅡ含量,抑制心肌组织TGF-β1和CTGF的表达等途径干预心肌纤维化进程。

参附益心方对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞凋亡及线粒体含量、膜电位的影响

目的探讨参附益心方对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2心肌细胞损伤的干预作用及相关机制。方法采用CCK-8法筛选参附益心方、辅酶Q10、氯沙坦钾实验药物浓度,MTT法筛选AngⅡ实验药物浓度。以H9c2心肌细胞为研究对象,以AngⅡ诱导H9c2心肌细胞损伤为模型,将细胞分为正常对照组、模型组、辅酶Q10组、氯沙坦组和参附益心方低、高剂量组。正常对照组正常培养24 h;模型组用含筛选浓度的AngⅡ的培养基培养24 h;参附益心方低、高剂量组及氯沙坦组、辅酶Q10组用含筛选出相应药物浓度及AngⅡ的培养基培养24 h。检测各组H9c2心肌细胞活性、线粒体含量及膜电位、活性氧簇(ROS)含量、细胞凋亡率,凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2基因表达,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性。结果最终选择参附益心方低、高浓度为0.25、0.5 mg/ml,辅酶Q10研究浓度为1×10^-4mol/L,氯沙坦钾研究浓度为1×10^-4mol/L,AngⅡ建立实验模型浓度为1×10^-5mol/L。与正常对照组比较,模型组大鼠心肌细胞活性、线粒体数量及膜电位、Bcl-2基因表达降低,ROS含量、细胞凋亡率及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax基因表达升高,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白活性亦升高(P<0.05);与模型组比较,参附益心方高剂量组和氯沙坦组、辅酶Q10组细胞活性、线粒体数量及膜电位升高,ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、Bax基因表达降低,Caspase-3、Caspase-9蛋白活性亦降低(P<0.05)。结论参附益心方可能通过改善心肌细胞线粒体功能,降低ROS含量,从而减少AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞发生凋亡。

有毒中药的毒效关系研究

中药物质基础和体内过程的复杂性,使中药药理和毒性效应及其两者的关系转换研究成为中医药研究的关键科学问题,也是制约中医药学科发展的瓶颈。中药毒-效关系研究的难点主要来自中药的多成分、多途径、多靶点复合作用的整体性特点,中药的活性或毒性物质各种成分之间角色转换,相互制约,与人体之间存在着非线性关系的复杂作用系统,决定着中药“毒-效”整合分析研究必须牢牢把握其作用的调整转换特征,这种特征本质上体现为中药复方进入机体后会发生治疗效应和毒性效应的关系转换,这就要求我们去寻找最佳的切入点,让中药“毒-效”整合分析研究不能仅限于复方本身,而要在中医药理论指导下,运用现代科学技术,阐释中药“毒-效”关系的科学内涵。目前在中药“毒-效”整合分析方法学研究方面,主要包括中药炮制减毒增效、中药配伍减毒增效、中药毒性物质基础辨析、中药毒性成分体内过程探寻,中药毒性机制揭示等。多采用中药化学物质组学、网络药理学和系统生物学方法开展相关研究。研究团队针对中药长期使用毒性发生的隐匿性、难以预测性,“毒-效”物质的难以确定性,安全用药剂量的模糊性,毒性机制的复杂性和个体体质差异的特殊性等关键科学问题,在中医理论指导下,以参附方为研究对象,综合采用常规毒理学和系统生物学方法,从核受体-药物代谢酶(PXR-CYP3A)等角度,将参附方的“毒-效”关系分别与药物煎煮方式、药物剂量和给药时间进行“量-毒-时-效”整合分析,通过探讨该方物质基础、体内过程、生物效应和毒性机制的变化,阐明参附方配伍禁忌的科学内涵,揭示PXR-CYP3A在参附方“毒-效”关系转换中的作用和地位,为中药“毒-效”整合分析研究提供新靶点,为安全合理用药提供科学依据。

李庆海教授以益气温阳、化瘀利水法治疗难治性心力衰竭的临床经验

难治性心力衰竭是各种心血管疾病的终末期,其临床表现复杂,有着高发病率与高病死率的特点,现代医学治疗过程中存在应用利尿剂后离子紊乱、利尿剂抵抗、生活质量下降、心力衰竭病情反复等现象,一直是现代医学难治性心力衰竭治疗及研究的难点和焦点。李庆海教授从医40余年,长期工作于临床一线,积累了丰富的临床经验,形成了自己的学术思想。李庆海教授认为,本病的发生主要是由于素体虚弱或久病体虚,致心气不足,无力运化血液,血积成瘀,血瘀日久,化而为水,水为阴邪,泛滥而伤肾阳,阳虚耗气,如此恶性循环。对此李庆海教授提出“益气温阳、化瘀利水”治法,拟方“参附强心方”,以此方为基础,加减化裁,用于临床疗效满意。