微小RNA-558靶向调控叉头框转录因子C1促进卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭力

目的探讨miR-558通过对叉头框转录因子C1(Forkhead box protein C1,FOXC1)的调控从而对人卵巢癌腺癌细胞(SKOV3)增殖和侵袭能力的影响。方法选择2014年1月至2017年12月郑州大学第三附属医院妇产科收治的上皮性卵巢癌病人25例、交界性卵巢上皮性肿瘤病人25例和良性卵巢上皮性肿瘤病人25例,三组病例均行手术治疗,取其部分经手术切除的卵巢组织标本,使用实时荧光定量PCR技术来分析微小RNA-558(miR-558)的表达水平。把卵巢癌SKOV3细胞分成三组,分别为miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组。通过靶基因预测网站来预测miR-558的靶基因(FOXC1基因),通过荧光素酶报告基因实验来验证miR-558对FOXC1基因表达的调控作用。通过实时荧光定量-PCR技术和蛋白印迹法来分析转染后各组细胞的miR-558和FOXC1的表达水平。通过细胞增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8法)检测三组细胞的增殖率。通过基质胶侵袭实验检测三组细胞的侵袭能力。结果实时荧光定量-PCR结果显示,在上皮性卵巢癌、交界性卵巢上皮性肿瘤和良性卵巢上皮性肿瘤病人的卵巢组织中,miR-558的相对表达水平分别为(3.43±0.42)、(2.47±0.35)、(1.37±0.31);在miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组中,SKOV3细胞miR-558的表达水平分别为(2.37±0.17)、(0.64±0.17)、(1.14±0.11)。在miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组中,SKOV3细胞的FOXC1基因转录出的信使RNA(mRNA)表达水平分别为(0.51±0.10)、(2.27±0.12)、(0.99±0.11)。荧光素酶报告基因实验结果显示,SKOV3细胞被含miR-558的质粒以及含FOXC1基因的重组质粒共同转染后,的荧光素酶活性下降了49.50%(P<0.05)。蛋白印迹结果显示,上述三组SKOV3细胞中,FOXC1蛋白的表达水平分别为(0.83±0.07)、(2.17±0.15)、(1.47±0.21)。CCK-8检测结果显示,不同时间miR-558模拟物组SKOV3细胞的增殖率明显高于阴性对照组(P<0.05),不同时间miR-558抑制物组SKOV3细胞的增殖率明显低于阴性对照组(P<0.05)。基质胶侵袭实验结果显示,上述三组SKOV3细胞穿透基底膜的细胞数分别为(158.33±9.45)、(67.01±10.58)、(117.67±16.86)(P<0.05)。结论miR-558能够通过靶向调控FOXC1的表达,促进SKOV3细胞的增殖能力和侵袭能力,从而参与卵巢癌的发生发展。

叉头转录因子A2、J2在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的检测肝细胞癌(HCC)组织中叉头(FOX)转录因子A2(FOXA2)与FOXJ2的表达水平,探讨FOXA2、FOXJ2与HCC的相关性。方法选取2014年1月—2019年7月于河南中医药大学第一附属医院病理学检查明确为HCC患者54例,收集临床资料和病理组织。采用免疫组化S-P法检测HCC组织中FOXA2与FOXJ2的蛋白水平表达,分析其与HCC相关临床病理特征及患者预后的关系。计数资料比较采用χ2检验与校正χ2检验,FOXJ2与FOXA2表达相关性采用Spearman相关分析法;采用Kaplan-Merier法进行生存期分析;采用Image-Pro Plus进行FOXA2、FOXJ2表达的半定量分析;采用Wilcoxon秩和检验比较组间差异。结果HCC组织中FOXA2和FOXJ2蛋白表达阳性率分别为70.37%(38/54)和75.92%(41/54);FOXA2和FOXJ2表达水平间呈显著正相关(rs=0.648,P<0.001)。FOXA2阴性组与阳性组相比,肿瘤直径、分化程度、肿瘤个数、AFP水平差异均有统计学意义(χ2值分别为5.440、4.113、4.352、3.865,P值分别为0.020、0.043、0.037、0.049);FOXJ2阴性组与阳性组比较,分化程度差异有统计学意义(χ2=9.267,P=0.002)。FOXA2、FOXJ2阳性表达组HCC患者的累积生存率均显著高于FOXA2、FOXJ2阴性表达组HCC患者(P值均<0.01)。结论FOXA2与FOXJ2的表达水平可能与HCC的发生发展及预后相关,二者在HCC的发生发展中起协同作用。

叉头转录因子家族在肝细胞癌中的作用机制及其作为治疗靶点的前景

肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性癌症之一,发病率和病死率一直居高不下,预后很差。叉头框(FOX)转录因子家族可调控细胞的生长、分化及组织发育,在肿瘤中具有重要的生物学作用。综述了FOX家族分子表达与HCC发生发展及预后的关系,分析了FOX在HCC进展中发挥作用的机制,提出FOX家族分子有望成为HCC治疗的新靶点。

叉头转录因子1/3在肝纤维化中的作用

肝纤维化是指各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生的病理过程。肝纤维化伴随于肝损伤修复愈合的全过程,慢性长期的损伤因素会诱导纤维化进展成肝硬化。流行病学数据显示,2017年我国共报告乙型肝炎新发病例118.05万、丙型肝炎24.3万。慢性病毒性肝炎带来了沉重的社会经济负担。叉头转录因子(FOXO)从属于叉头状家族,在细胞的各项生命活动中发挥着重要作用。研究发现,FOXO1/3可通过TGFβ通路调节肝星状细胞活力,在肝纤维化病变中扮演着重要角色。综述了肝纤维化病变机制、FOXO1/3对肝纤维化的调控机制,以及FOXO1/3(肝纤维化病变位点之一)的靶向治疗研究进展。

过表达微小RNA-877-5p通过靶向叉头框转录因子M1调控胃癌细胞活力和凋亡

目的探讨微小RNA-877-5p(miR-877-5p)对胃癌细胞活力、凋亡的影响及其分子机制。方法本研究时间为2020年1—7月。胃癌和正常胃黏膜上皮细胞株购自美国典型培养物保藏中心。实时定量基因扩增荧光检测(qPCR)检测胃癌细胞株HGC-27、SUN-1、AGS和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中miR-877-5p和叉头框转录因子M1(FOXM1)信使核糖核酸(mRNA)表达。建立miR-877-5p过表达或抑制FOXM1表达细胞株,观察其在HGC-27细胞的活力、凋亡中的作用。MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测FOXM1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase 3)蛋白表达。TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-877-5p和FOXM1的靶向关系。共转染miR877-5p模拟物和FOXM1过表达载体(pcDNA-FOXM1),研究FOXM1过表达对miR-877-5p过表达诱导的HGC-27细胞增殖和凋亡的影响。结果与正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,胃癌细胞HGC-27、SUN-1、AGS中的miR-877-5p表达下调(1.00±0.08比0.34±0.03,0.51±0.05,0.44±0.04,P<0.05),FOXM1 mRNA和蛋白表达上调(1.00±0.09比2.41±0.23,2.58±0.24,2.26±0.23,P<0.05)。miR-877-5p过表达显著降低HGC-27细胞48 h、72 h的细胞活力(P<0.05),明显提高细胞凋亡率、p21、p27、Bax、cleavedcaspase3蛋白的水平(P<0.05),显著减少cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)。抑制FOXM1表达显著降低48 h、72 h的细胞活力(P<0.05),提高细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平(P<0.05),减少cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)。miR-877-5p靶向调控FOXM1的表达。FOXM1过表达后,miR-877-5p过表达对HGC-27细胞增殖、cyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用被逆转,其对细胞凋亡、p21、Bax蛋白表达的促进作用也被逆转。结论过表达miR-877-5p通过靶向调控FOXM1表达抑制胃癌细胞的活力,并诱导细胞凋亡。

自然杀伤T细胞、转录因子RORγt及Foxp3在白癜风患者外周血中的表达水平及其意义

【目的】探讨自然杀伤T细胞(NK-T)、孤独核受体(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)在白癜风患者外周血中的表达水平及其意义。【方法】选取2019年4月至2021年5月本院诊治的89例白癜风患者(观察组),另外选取同期在本院体检的36例健康志愿者(对照组)。检测并比较两组研究对象外周血NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平;比较不同病期、病型、皮损面积的白癜风患者外周血NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平,分析皮损面积与NK-T及RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平相关性。【结果】观察组患者外周血RORγt mRNA水平显著高于对照组,NK-T、Foxp3 mRNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与稳定期相比,进展期患者RORγt mRNA水平较高,NK-T、Foxp3 mRNA水平较低,差异有统计学意义(P<0.05);不同病型的白癜风患者NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同皮损面积间NK-T、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);RORγt mRNA与皮损面积呈正相关(rs=0.509,P<0.05),NK-T、Foxp3 mRNA与皮损面积呈负相关(rs=-0.348、-0.307,P<0.05)。【结论】外周血NK-T及RORγt mRNA、Foxp3 mRNA水平异常与白癜风发病及病情发展密切相关,白癜风患者皮损面积与RORγt mRNA呈正相关,与NK-T、Foxp3 mRNA呈负相关。

转录因子FOXO1在多囊卵巢综合征中的作用研究进展

叉头框转录因子(FOX)家族O类亚群成员之一FOXO1在许多细胞类型中表达,参与了许多病理和生理过程,包括细胞增殖、凋亡、自噬、代谢、炎症反应、细胞因子的表达、免疫分化和氧化应激抵抗等。这些过程会引起许多临床现象,如致癌作用、糖尿病、心血管疾病、宿主反应等。多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女最常见的内分泌紊乱疾病,发生机制仍不明确。FOXO1可能参与了PCOS的胰岛素抵抗、低度炎症反应等病理生理。研究FOXO1在PCOS的发生及其并发症中的作用,有利于为PCOS的治疗策略提供新的思路。

Forkhead蛋白在信号转导途径中的研究进展

Fox基因家族是2000年统一命名的一大类功能各异的"翼螺旋"转录因子,具有DNA结合、转录活化和转录抑制等功能。目前已经克隆出17个亚类100多种Fox基因家族成员,这些家族成员主要通过转录调控和信号转导途径在动物的生长发育、细胞分化、代谢、凋亡以及免疫等方面起关键作用,并迅速成为医学细胞生物学、遗传学、免疫学以及肿瘤学领域的研究热点。现对Fox基因家族的命名原则、结构特征以及在信号转导途径的研究新进展进行综述。

牙龈卟啉单胞菌持留菌通过上调叉头盒转录因子1信号通路诱发巨噬细胞炎症反应

目的探索牙龈卟啉单胞菌(Pg)持留菌(Ps)对巨噬细胞免疫炎症反应的影响及其作用机制。方法将Pg(ATCC 33277)悬浮培养和生物膜培养至对数末期(72 h)后,不使用药物处理以及使用高浓度甲硝唑(100 mg/L)和(或)阿莫西林(100 mg/L)处理不同时间,分别为空白对照组、甲硝唑组、阿莫西林组、甲硝唑+阿莫西林组,采用血平板计数法检测持留菌生成数量,细菌活死染色检测Ps的生存状态;不使药物处理以及使用Pg和甲硝唑处理的PgPs(M-PgPs)刺激巨噬细胞,分别为空白对照组(不经任何处理)、Pg组、M-PgPs组;通过透射电镜观察细菌进入细胞内部的情况;使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测巨噬细胞内炎症相关指标的表达情况;通过RT-qPCR检测巨噬细胞叉头盒转录因子1(FOXO1)信号通路的激活情况;利用共聚焦免疫荧光显微镜检测FOXO1在巨噬细胞内的分布情况。使用FOXO1抑制剂(Fi)和激活剂(Fa)处理巨噬细胞后,用Pg和M-PgPs刺激巨噬细胞,分别为空白对照组(不经任何处理)、Pg组、M-PgPs组、Fi组、Fi+Pg组、Fi+M-PgPs组、Fa组、Fa+Pg组和Fa+M-PgPs组,通过RT-qPCR和ELISA法检测巨噬细胞内炎症相关指标的表达情况。结果悬浮培养和生物膜中的Pg经过高浓度的甲硝唑和(或)阿莫西林处理后,均无法被完全杀灭,且存活的Ps可重新生长形成菌落;Pg和M-PgPs均可进入巨噬细胞内部且巨噬细胞中的炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达量[Pg组分别为(2392±188)、(162±29)、(5558±661)、(789±155)μg/L;M-PgPs组分别为(2415±420)、(155±3)、(5732±782)、(821±176)μg/L]均显著高于空白对照组[分别为(485±140)、(21±9)、(2332±87)、(77±7)μg/L](均P<0.01)。同时,Pg和M-PgPs均可促进巨噬细胞内FOXO1入核,巨噬细胞内FOXO1信号通路相关基因FOXO1、BCL6和KLF2 mRNA的相对表达量均显著高于空白对照组(均P<0.05)。另外,Fi+Pg组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达量[分别为(1081±168)、(70±8)、(1976±544)、(420±47)μg/L]均显著低于Pg组[分别为(4411±137)、(179±6)、(5161±929)、(934±24)μg/L](均P<0.05);Fi+M-PgPs组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达量[分别为(1032±237)、(74±10)、(1861±614)、(405±32)μg/L]均显著低于M-PgPs组[分别为(4342±314)、(164±17)、(4438±1374)、(957±25)μg/L](均P<0.05)。相反,Fa+Pg组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α蛋白表达量[分别为(8198±1825)、(431±28)、(8919±650)、(2186±301)μg/L]以及Fa+M-PgPs组蛋白表达量[分别为(8159±2627)、(475±26)、(8995±653)、(2255±387)μg/L]均显著高于Pg组和M-PgPs组(均P<0.05)。结论PgPs对甲硝唑和阿莫西林表现出高度耐药性;M-PgPs通过上调FOXO1信号通路诱发巨噬细胞的免疫炎症反应,该作用与未经药物处理的Pg无显著差异。

叉头框蛋白Q1对肝细胞癌患者术后行经肝动脉化疗栓塞术疗效的影响

目的研究叉头框蛋白Q1（FOXQ1）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达情况,探讨其对手术切除后行经肝动脉化疗栓塞术预后的影响,分析FOXQ1在评估肝癌疗效中的价值。方法收集2004年1月-2007年12月南通大学附属肿瘤医院收治的HCC患者120例。采用免疫组化分析FOXQ1在HCC组织中的表达情况,与患者临床特征进行比较。计数资料组间比较采用χ2检验;利用Kaplan-Meier曲线和log-rank分析患者术后的无瘤生存率（DFS）;采用Cox比例风险回归模型进行单因素和多因素回归分析。结果免疫组化结果显示,FOXQ1在癌组织中呈深褐色,主要表达于肿瘤细胞质和细胞核中。单因素回归分析结果显示患者术后5年的DFS受肝脏TNM分期[风险比（HR）=0.347,95%可信区间（95%CI）：0.210-0.573,P〈0.001]、肝内肿瘤个数（HR=0.294,95%CI：0.176-0.490,P〈0.001）、HBV感染情况（HR=0.395,95%CI：0.222-0.704,P=0.002）、AFP表达水平（HR=0.348,95%CI：0.207-0.586,P〈0.001）、是否肝硬化（HR=0.414,95%CI：0.244-0.702,P=0.001）、FOXQ1高表达（HR=1.968,95%CI：1.171-3.308,P=0.011）等因素影响;多因素回归分析发现肝癌患者术后5年的DFS与TNM分期（HR=0.466,95%CI：0.248-0.874,P=0.017）、肝内肿瘤个数（HR=0.427,95%CI：0.216-0.844,P=0.014）、FOXQ1高表达（HR=2.896,95%CI：1.628-5.152,P〈0.001）有关,FOXQ1高表达的患者治疗后无瘤生存时间小于FOXQ1低表达患者（18个月vs 26个月,χ2=5.006,P=0.025）。结论 FOXQ1可作为判断肝癌患者预后的生物标志物,用于评价肝癌治疗效果。

同源盒蛋白1和叉头框蛋白C2在结肠癌中的表达及临床意义

目的探讨同源盒蛋白1(Six1)、叉头框蛋白C2(FOXC2)在结肠癌中的表达及其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法采用免疫组织化学法SP法检测70例结肠癌组织和30例癌旁正常组织中Six1、FOXC2的表达情况,分析两者在结肠癌发生发展中的相关性,及与肿瘤患者临床病理特征之间的关系。结果 Six1、FOXC2在结肠癌中的阳性表达率分别为82.9%和74.3%,均明显高于癌旁正常组织中的表达(16.7%,20.0%,P<0.05),且两者在结肠癌中的表达具有相关性(r=0.426,P<0.01)。Six1、FOXC2在结肠癌中的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化状态无关(P>0.05)。结论 Six1、FOXC2高表达可能共同参与了结肠癌的发生发展过程并在结肠癌的侵袭转移过程中存在协同作用,故二者的表达可能与结肠癌的不良预后具有密切联系。

U2AF1基因突变调控FOXO3a-Bim信号通路对SKM-1细胞炎症因子表达的影响

目的:探讨U2AF1基因突变对人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系SKM-1细胞炎症因子表达的影响,并观察上述作用是否通过FOXO3a-Bim信号通路介导。方法:构建U2AF1野生型以及U2AF1蛋白序列第34位丝氨酸突变为苯丙氨酸的真核表达质粒(S34F),慢病毒包装并转染SKM-1细胞,通过慢病毒技术上调细胞中FOXO3a的表达并验证其转染效率。采用CCK-8法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;qRT-PCR法检测促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α,以及抑炎因子IL-4的表达;Western blot法检测FOXO3a、Bim、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,S34F组细胞凋亡率及促炎因子IL-1β和TNF-α转录水平显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞在G2期,细胞增殖及抑炎因子IL-4的转录水平显著降低;FOXO3a、Bim和Bax蛋白表达水平显著增加(P<0.05);Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05)。FOXO3a基因的上调使U2AF1基因S34F突变的SKM-1细胞增殖受到明显抑制、细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在S期和G2期;促炎因子IL-1β和TNF-α转录水平显著降低(P<0.05),抑炎因子IL-4转录水平无明显变化(P>0.05)。结论:U2AF1基因S34F突变可诱导SKM-1细胞炎症反应表型,并通过FOXO3a-Bim信号通路在MDS中发挥作用。

转录因子叉头框Q1与肿瘤相关性的研究进展

转录因子叉头框Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)是叉头框(forkhead box,FOX)超家族的成员之一,广泛存在于人体的多种组织和器官,参与胚胎干细胞和脊椎动物的发育过程。作为转录因子,FOXQ1蛋白通过作用于靶基因的启动子或与其他转录因子相互作用激活靶基因的转录,并从上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和细胞信号转导等多方面影响肿瘤的发生、发展、侵袭和转移过程。鉴于FOXQ1与肿瘤具有明显相关性,其表达水平可作为某些肿瘤预后评估的指标,并有望成为肿瘤治疗的新靶点。本文通过综述最新文献,着重阐述了FOXQ1在肿瘤发生和发展过程中的作用及其可能的机制,以期为肿瘤治疗和研究提供一些参考。

下调叉头转录因子M1基因表达对非小细胞肺癌细胞生长与侵袭能力的影响

目的研究用叉头转录因子M1（FoxM1）基因小干扰RNA下调非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株FoxM1基因表达后细胞增殖与侵袭能力的改变，为开发新的NSCLC靶向治疗方法提供依据。方法设计靶向FoxM1小干扰RNA（siFoxM1），分别以siFoxM1和无关对照siRNA转染人NSCLC细胞株SPC—A－1、A549和LTEP-a-2，采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测FoxM1 mRNA和蛋白表达，采用集落形成试验、划痕试验和细胞侵袭试验研究下调FoxM1基因表达对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果转染siFoxM1可高效特异地下调SPC—A－1、A549和LTEP－a－2细胞的FoxM1 mRNA表达（分别下降83．9％、83．6％、88．6％）和蛋白表达。转染siFoxM1的SPC—A－1、A549和LTEP－a-2细胞集落形成数[分别为（136．0±15．5）、（87．0±2．6）和（121．7±9．4）个]和穿膜细胞数[分别为（19．2±2．5）、（4．2±0．8）和（6．2±1．8）个]均明显低于转染无关对照siRNA细胞[集落形成数分别为（222．3±20．5）、（164．7±14．1）和（260．7±13．5）个，穿膜细胞数分别为（81．4±6．2）、（39．2±4．6）和（35．6±3．0）个，均P〈0．01]；转染siFoxM1的SPC—A－1细胞划痕愈合率（52．6％±7．8％）明显低于转染无关对照siRNA细胞（85．3％±18．6％，P〈0．01）。结论FoxM1基因表达下调可显著降低多种NSCLC细胞的增殖与侵袭能力，提示FoxM1是潜在的肺癌治疗靶点。

叉头状转录因子01对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的通过激活和抑制叉头状转录因子01（Fox01）活性及表达，探讨其对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）氧化应激的作用。方法采用脂质体转染法将FoxOl短发夹样RNA（Fox01shRNA）质粒载体稳定转染MCs；用高糖（30．0mmol／L）和白藜芦醇（Resv20．0txmol／L）培养稳定转染后的MCs。以5．6mmol／L葡萄糖培养的MCs为正常对照组（NG），将高糖培养的MCs分为5组：单纯高糖组（HG）、HG＋Resv组、HG＋Fox01shRNA转染组、HG＋Resv＋Fox01shRNA转染组、HG＋转染阴性对照组（shNC）。培养72h后，用荧光酶标仪检测各组MCs内活性氧（ROS）水平；逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测去乙酰化酶（Sirtl）、Fox01、锰超氧化物歧化酶（MnSOD）mRNA表达；Westernblotting法检测Fox01及磷酸化Fox01（p-Fox01）水平。多组间数据比较采用单因素方差分析。结果与NG组相比，HG组SirtlmRNA表达下降，p-Fox01水平升高，MnSODmRNA表达下降，ROS水平升高，差异均有统计学意义（t=12．38、13．27、14．13、8．36，均P〈0．05）。与HG组相比，HG＋Fox01shRNA转染组Fox01mRNA表达被抑制，MnSODmRNA表达更低，ROS水平更高，差异均有统计学意义（t=20．61、13．61、10．13，均P〈0．05）；HG＋Resv组SiitlmRNA表达升高，p-Fox01水平下降，MnSODmRNA表达升高，ROS水平下降，差异均有统计学意义（t=6．02、10．69、5．39、5．37，均P〈0．05）。与HG＋Resv组比较，HG＋Resv＋Fox01shRNA转染组，Fox01mRNA表达被抑制，MnSODmRNA表达降低，ROS水平升高，差异均有统计学意义（t=22．53、15．31、14．63，均P〈0．05）。结论Fox01是调节MCs内ROS水平的重要转录因子，其可能通过激活下游抗氧化靶基因MnSOD的表达，保护MCs对抗氧化应激。

叉头转录因子1基因沉默对水通道蛋白9在正常人肝细胞中表达的影响

目的观察叉头转录因子1(Forkhead transcription factor 1,FoxO1)基因沉默对水通道蛋白9(Aquaporin 9,AQP9)在正常人肝细胞L-02中表达的影响。方法将4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4及阴性对照质粒FoxO1-NP经脂质体介导瞬时转染L-02细胞,荧光显微镜下观察转染效率,筛选FoxO1基因沉默效率最佳的干扰质粒转染的肝细胞,经RT-PCR及Western blot法从mRNA及蛋白水平检测其对AQP9表达的影响,并在转染后不同时间点,经荧光定量PCR检测AQP9的转录时间谱。结果 4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4均有不同程度的沉默效果,其中以FoxO1-shRNA2沉默效果最佳,与对照组相比,AQP9在L-02细胞中的mRNA及蛋白水平的表达均下降,且差异均有统计学意义(P<0.05);AQP9的表达随着转染后时间的延长而降低,在转染后60 h达抑制峰值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FoxO1基因沉默对AQP9在正常人肝细胞中的表达有明显的影响,为下一步采用染色质免疫共沉淀技术研究不同时间点FoxO1与AQP9启动子区IRE结合水平的动态变化提供了依据。

叉形头转录因子O亚型相关基因位点多态性与肝细胞癌关系

目的探讨叉形头转录因子O亚家族（forkhead box-containing protein O subfamily,FOXO）基因多态性与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）遗传易感性的关系。方法采用以医院为基础的病例对照研究方法,选取1 049例HCC患者作为病例组,1 052例无肿瘤患者作为对照组,对照组按年龄、性别、民族与病例组频数匹配。采用高通量TaqMan MGB实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time fluorescent guantitative polymerase chain reaction,RT-PCR）技术对FOXO1的rs17592236位点、FOXO3的rs4946936位点和FOXO4的rs4503258位点进行基因分型。应用Logistic回归模型分析上述位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与HCC发病风险的关系,并研究基因多态性与环境因素的交互作用。结果 rs17592236、rs4946936和rs4503258位点基因型在病例组和对照组中分布差异均无统计学意义（均有P〉0.05）。多因素Logistic回归分析发现,rs17592236位点CT/TT基因型可能降低HCC发病风险[P=0.010,OR（95%CI）=0.699（0.526~0.927）]。分层分析结果显示rs17592236位点SNP与HCC发病风险存在统计学关联。交互作用分析显示,rs17592236、rs4946936、rs4503258位点多态性与吸烟、饮酒、HBV感染、肝癌家族史4种环境因素均存在交互作用,rs17592236与rs4503258位点SNPs之间存在基因-基因交互作用[P=0.003,OR（95%CI）=0.755（0.628~0.908）]。结论携带FOXO1的rs17592236位点突变等位基因T可能降低HCC发病风险。rs17592236、rs4946936、rs4503258与环境危险因素的交互作用可能与HCC发生有关。

肥胖相关基因与叉头转录因子在非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脏中的表达

目的研究肥胖相关基因(FTO)与叉头转录因子O1(FoxO1)蛋白在非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏中的表达水平。方法通过饲喂高能量和高脂肪的大鼠饲料制备非酒精性脂肪肝动物模型,然后采集大鼠的血液和肝脏组织,测定其肝脏指数和血液生化指标,包括三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(AST)、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL);对大鼠进行肝脏病理检测;采用免疫组织化学法测定FTO蛋白和FoxO1蛋白在大鼠肝脏中的表达水平。结果 8周后,模型组大鼠的肝脏质量、体质量和肝脏指数3项指标均高于对照组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠的AST、ALT、LDL、ALP、TG和TC均高于对照组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠的HDL低于对照组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠肝小叶部分产生脂肪变性、炎症,对照组大鼠则没有;模型组大鼠的FTO蛋白和FoxO1蛋白在肝脏中的表达积分高于对照组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FTO与FoxO1一起相互作用,可能扰乱正常的能量和脂肪代谢。

叉头框转录因子O1和Kruppel样转录因子9在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中叉头框转录因子O1(FOXO1)与Kruppel样转录因子9(KLF9)的表达及其临床意义。方法收集2012年9月至2015年6月榆林市第一医院手术切除的102例NSCLC肿瘤组织标本,另选取距癌组织边缘≥5 cm的癌旁组织作为对照组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NSCLC组织及癌旁组织中FOXO1与KLF9 mRNA相对表达量,免疫组织化学法检测NSCLC组织及癌旁组织中FOXO1、KLF9蛋白表达。根据癌组织mRNA检测结果的均值将FOXO1、KLF9分为高表达组与低表达组,分析二者与患者临床病理参数的关系。采用Pearson法对FOXO1、KLF9的表达进行相关性分析,采用Kaplan-Meier法对患者生存情况进行分析,对影响NSCLC预后的相关因素进行logistic回归分析。结果与癌旁组织相比,NSCLC组织FOXO1 mRNA相对表达量升高(2.82±0.15比1.28±0.47,t=31.525,P<0.05),KLF9 mRNA相对表达量降低(0.34±0.07比1.04±0.11,t=54.222,P<0.05)。FOXO1在有淋巴结转移、分化程度高、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织中的表达水平较高,差异均有统计学意义(均P<0.05);KLF9在有淋巴结转移、分化程度高、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织中的表达水平较低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析法显示FOXO1与KLF9表达无相关性(r=0.154,P=0.156)。Kaplan-Meier法分析结果显示FOXO1高表达组3年总生存率低于FOXO1低表达组(10.81%比60.71%,χ^2=27.341,P<0.01),KLF9低表达组3年总生存率低于KLF9高表达组(26.32%比61.54%,χ^2=8.526,P=0.003)。logistic回归分析结果显示FOXO1高表达是影响NSCLC预后的危险因素(OR=2.682,P=0.003),KLF9高表达是NSCLC预后的保护因素(OR=0.446,P=0.012)。结论NSCLC组织中FOXO1高表达与KLF9低表达可作为预测NSCLC进展情况的有效指标,二者均与患者预后不良密切相关。

人线粒体转录终止因子3与叉头框蛋白3在非小细胞肺癌预后预测中的价值

目的 探讨人线粒体转录终止因子3(hMTERF3)与叉头框蛋白3(Foxp3)对预测非小细胞肺癌(NSCLC)预后的价值。方法 回顾性分析解放军总医院第三医学中心2017年3月至2018年3月收治的88例NSCLC患者的临床资料,所有患者均经病理穿刺确诊。电话随访12个月,根据患者预后情况,分成预后良好组、预后不良组。所有患者均取病理组织,采用免疫组织化学法检测hMTERF3、Foxp3蛋白表达情况,比较预后良好组、预后不良组的hMTERF3、Foxp3表达情况,采用logistic回归模型分析NSCLC患者预后不良的危险因素。结果 88例患者中,61例(69.3%)预后良好,27例(30.7%)预后不良。预后良好组hMTERF3阳性率为57.4%(35/61),低于预后不良组的81.5%(22/27)(χ2=4.766,P=0.029);预后良好组Foxp3阳性率为55.7%(34/61),低于预后不良组的85.2%(23/27)(χ2=7.113,P=0.008)。预后良好组的中、高分化及Ⅰ~Ⅱ期患者比例分别为82.0%(50/61)、68.8%(42/61),均高于预后不良组[48.2%(13/27)、25.9%(7/27)](均P<0.05)。logistic回归分析结果显示,低分化、Ⅲ~Ⅳ期、hMTERF3阳性、Foxp3阳性是NSCLC患者预后不良的危险因素(均P<0.05)。结论 NSCLC预后良好者的hMTERF3、Foxp3阳性率较低,hMTERF3阳性、Foxp3阳性是NSCLC患者预后不良的危险因素。