叉头框蛋白K1在胶质瘤组织的表达及其临床意义

目的探讨叉头框蛋白K1(FOXK1)在胶质瘤组织的表达及临床意义。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测FOXK1在胶质瘤mRNA和蛋白表达水平;乘积极限法(Kaplan-Meier)分析FOXK1与患者临床病理参数关系;RNA干扰胶质母细胞瘤FOXK1的表达,Transwell迁移实验测定LN18细胞迁移能力,细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞计数测定T98G细胞增殖。结果RT-qPCR检测和Western blot结果表明FOXK1在胶质母细胞瘤(GBM)组织中mRNA和蛋白高表达。FOXK1的表达与胶质瘤患者性别无明显相关(P>0.05)、与年龄无明显相关(P>0.05),而FOXK1表达与WHO分级明显相关(P<0.01)。Kaplan-Meier分析显示高表达FOXK1的患者预后较差(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明FOXK1促进癌细胞转移,CCK-8细胞计数结果表明FOXK1促进胶质瘤细胞增殖。结论 FOXK1在胶质瘤患者中高表达,与胶质瘤发生和发展、转移相关。

PPAR-α通过PI3K/Akt/FoxO1信号通路对心肌细胞肥大的负性调控作用

目的 :研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators activated receptor alpha,PPAR-α)对心肌细胞肥大的负性调控作用以及与PI3K/Akt/叉头框蛋白O1(Forkhead box O1,FoxO1)信号通路和氧化应激的关系。方法:应用异丙肾上腺素(isoproternol,ISO)诱导心肌细胞肥大;采用Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;应用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)、PPAR-α及FoxO1 mRNA表达;采用试剂盒检测心肌细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果:(1)ISO诱导心肌细胞肥大,PPAR-αm RNA表达显著下降。(2)应用非诺贝特(Fenofibrate,Feno)上调PPAR-α表达明显抑制ISO诱导的心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达的增加。(3)ISO诱导心肌细胞肥大,FoxO1表达明显减少;应用Feno预处理可增加FoxO1 mRNA的表达;应用PI3K抑制剂LY预处理亦能明显增加FoxO1 mRNA表达。(4)ISO诱导心肌细胞肥大,心肌细胞SOD活性明显降低,MDA含量明显增加,应用Feno预处理能显著提高SOD活性,降低MDA含量。结论:PPAR-α抑制心肌细胞肥大的作用可能与其抑制PI3K/Akt通路的激活,提高FoxO1的表达,降低氧化应激反应有关。

微小RNA-646对胶质母细胞瘤细胞系U251增殖和转移的影响

目的探讨微小RNA-646(miR-646)对胶质母细胞瘤细胞系U251增殖和转移的影响及机制。方法2014年1月至2016年1月,从成都市第六人民医院采集14对神经胶质瘤病人肿瘤组织样本和相邻的非肿瘤样本,并于2018年5月至2019年5月,体外培养正常星形胶质细胞HNAs和人胶质母细胞瘤细胞系SHG44、A172和U251,实时荧光定量PCR检测miR-646在胶质瘤组织、胶质瘤细胞SHG44、A172和U251中的表达。将体外培养的U251细胞分为模拟物对照组、miR-646模拟物组、抑制剂对照组、miR-646抑制剂组、miR-646模拟物+叉头框K1过表达质粒(pcDNA-FOXK1)组和miR-646模拟物+pcDNA组,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-646表达,检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中叉头框K1(FOXK1)和上皮间质转化相关蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验检测miR-646与FOXK1的靶向关系。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中miR-646表达水平(0.36±0.03比1.00±0.06)显著降低(P<0.05);与正常星形胶质细胞相比,胶质瘤细胞SHG44、A172和U251中miR-646表达水平(0.54±0.04、0.63±0.06、0.38±0.04比1.00±0.08)显著降低(P<0.05)。与模拟物对照组相比,转染miR-646模拟物可明显上调U251细胞中miR-646表达(5.28±0.53比1.00±0.11)和上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白水平,减弱细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,抑制FOXK1(0.28±0.03比0.51±0.04)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达(P<0.05);与抑制剂对照组相比,转染miR-646抑制剂可得到与miR-646模拟物处理相反的结果(P<0.05);与miR-646模拟物+pcDNA相比,miR-646模拟物+pcDNA-FOXK1组可明显提高U251细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力(P<0.05)。结论miR-646可抑制U251细胞增殖和转移,其作用机制可能与靶向调控FOXK1表达有关。

miR-195通过靶向调控FOXK1对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的影响

目的探究微小RNA-195(miR-195)通过靶向调控叉头框蛋白K1(FOXK1)对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的影响。方法体外培养胃癌MGC803细胞,将miR-195或miR-NC mimics、inhibitor对照序列通过Lipofectamine2000转染试剂转染入细胞内,并依次将其命名为miR-195 mimics组、mimics-NC组、miR-195 inhibitor组和inhibitor-NC组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中miR-195 mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western blot)方式检测FOXK1蛋白具体表达情况,采用CCK8方式检测细胞的具体增殖水平,细胞的具体侵袭能力分析采用Tranwell实验,细胞的具体转移能力采用划痕试验予以检测,miR-195与FOXK1靶向关系验证则采用荧光素酶实验。结果与inhibitor-NC组相比,miR-195 inhibitor组miR-195 mRNA表达降低,细胞增殖水平、Tranwell实验穿膜数、迁移距离、FOXK1蛋白表达均增大(P均<0.05);与mimics-NC组相比,miR-195 mimics组miR-195 mRNA表达升高,细胞增殖水平、Tranwell实验穿膜数、迁移距离、FOXK1蛋白表达均降低(P均<0.05);荧光素酶实验显示,miR-195可直接靶向作用于FOXK1蛋白。结论miR-195可抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移,可能通过调控FOXK1表达而起作用。