叉头框转录因子O1在肾纤维化中的作用及其调控

慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)已成为全球不可忽视的一种慢性疾病,而肾的纤维化是CKD的最终结果和关键性病理特征。在CKD的整个过程中均伴随着肾损伤的修复与愈合,且长期慢性刺激会促使肾纤维化逐渐步向肾衰竭,其主要特征是肌成纤维细胞持续活化及细胞外基质过度产生和沉积。肾的纤维化是一个由多种信号分子介导的多种信号通路参与的协同过程,而TGF-β/Smad和Wnt/β-Catenin信号通路是其中最经典的2个。FoxO1是人体中一个重要的转录因子,在多种细胞类型中表达,参与细胞多种生命活动并发挥重要调节作用。目前的研究已经表明,叉头框转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FoxO1)在肾纤维化病变中扮演着重要角色。FoxO1可通过STAT、SIRT1、Wnt/β-Catenin、PI-3K/Akt等多种信号通路调控肾纤维化的发生和发展,例如FoxO1/STAT信号可调节TIF和肾小管凋亡;SIRT1/FoxO1信号可调控氧化应激反应和脂肪毒性;FoxO1/β-Catenin可抑制Wnt/β-Catenin信号通路;PI-3K/Akt/FoxO1通路调节炎症反应及糖脂代谢等。另外,一些相关研究表明,FoxO1/Smad很可能在肾的纤维化中发挥了作用。本文综述了FoxO1在肾纤维化中的作用及其分子调控机制,旨在进一步明确肾纤维化的发病机制,从而为CKD的治疗提供新的方向与前景。

微小RNA-96靶向叉头框转录因子O1促进肺癌细胞增殖和迁移

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-96通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)促进肺癌细胞增殖和迁移的作用。方法应用茎环反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-96在肺癌细胞株中的表达;干扰慢病毒感染抑制miR-96表达后,分别利用细胞增殖试验(CCK-8)和划痕试验检测其对肺癌细胞增殖和迁移的影响;蛋白质印迹法(Western blot)和双荧光素酶活性试验验证miR-96靶基因FOXO1。应用GraphPad Prism 5统计学软件进行分析,计量资料比较采用t检验。结果CCK-8实验显示抑制H1299细胞miR-96表达后,实验组24、48、72 h吸光度值分别为1.293±0.019、1.684±0.038、2.180±0.034,明显低于对照组的1.655±0.056、1.880±0.020、2.493±0.060,差异有统计学意义(t=5.646、4.426、14.670,P<0.01);划痕试验显示对照组4 h和10 h细胞迁移率为(29.21±3.96)%、(47.49±3.33)%,明显高于实验组[(5.80±2.94)%、(13.63±3.18)%],差异有统计学意义(t=4.748、7.352,P<0.01);筛选miR-96靶基因FOXO1,将miR-96过表达后,肺癌细胞FOXO1表达明显降低;反之,抑制miR-96表达后,FOXO1表达明显增高。荧光素酶活性试验显示miR-96和FOXO13’非翻译区(3’UTR)野生型质粒共转染后,野生型为(22.5±7.6)%,与对照组的(97.2±13.2)%及突变型的(115.6±13.5)%比较,荧火虫/海肾荧光素酶比值明显降低(t=14.750、12.040,P值均<0.01)。结论miR-96通过靶向调控FOXO1促进肺癌细胞增殖和迁移。

白藜芦醇通过调控沉默信息调节因子1/叉头框转录因子O1通路保护白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤

目的探讨白藜芦醇(RES)对IL-1β诱导的软骨细胞的影响及其作用通路。方法提取Wistar乳鼠软骨细胞,实验分为5组:对照组,IL-1β组,RES+IL-1β组,RES+IL-1β+EX-527[沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂]组,RES+IL-1β+AS[叉头框转录因子O1(FOXO1)抑制剂]组。采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测SIRT1、FOXO1和MMP-3 mRNA表达量。免疫荧光技术检测软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白(Col-Ⅱ)的蛋白表达,蛋白质免疫印迹技术检测软骨细胞SIRT1,p-FOXO1/FOXO1的蛋白表达。ELISA检测软骨细胞炎性因子IL-6和TNF-α分泌量。计量资料多组间比较行单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t法。以P<0.05差异具有统计学意义。结果与正常软骨细胞相比,IL-1β诱导的软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显降低,细胞TNF-α[(24.70±2.84),t=19.24,P<0.001]和IL-6的分泌量[(3.35±0.28),t=12.97,P<0.001]明显升高、MMP-3的mRNA表达[(2.46±0.23),t=12.61,P<0.001]明显升高。RES作用于IL-1β诱导软骨细胞后,Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.001),细胞TNF-α[(12.60±1.05),t=10.14,P<0.001]和IL-6[(2.00±0.15),t=9.89,P<0.001]的分泌量明显降低,MMP-3的mRNA表达[(1.30±0.14),t=10.46,P<0.001]明显降低。加入SIRT1抑制剂EX-527或FOXO1抑制剂AS后,RES对IL-1β诱导软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达的促进作用明显降低(P<0.05),对TNF-α和IL-6的分泌量抑制作用明显下降(P<0.001),对MMP-3的mRNA表达抑制作用明显下降(P<0.05)。结论RES通过SIRT1/FOXO1通路可明显改善IL-1β诱导的软骨细胞外基质降解和炎症反应。

沉默FOXO1基因对人主动脉血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨叉头框转录因子O1(FOXO1)基因对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:收集19例AAA患者动脉瘤组织(AAA组)及邻近正常主动脉组织(对照组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平,透射电镜观察2组研究对象动脉瘤组织中自噬溶酶体形成情况;Western blotting法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1及自噬相关蛋白卷曲螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3α(LC3)和P62蛋白表达水平。体外培养人主动脉血管平滑肌细胞(hVSMCs),并采用FOXO1 siRNA(si-FOXO1)及其阴性对照(si-NC)慢病毒感染hVSMCs,10μmol·L^(-1)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合自噬激活剂雷帕霉素(Rap)进行干预,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+si-NC组、AngⅡ+si-FOXO1组、AngⅡ+si-NC+Rap组和AngⅡ+si-FOXO1+Rap组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA法检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,RT-qPCR法检测各组细胞中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中FOXO1、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Beclin1、LC3和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AAA组动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平升高(P<0.05),自噬溶酶体数量增多(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,AngⅡ组hVSMCs增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平降低(P<0.05);与AngⅡ+si-NC组比较,AngⅡ+si-FOXO1组hVSMCs增殖活性升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平降低(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved-caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。与AngⅡ+si-FOXO1组比较,AngⅡ+si-FOXO1+Rap组细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:FOXO1基因沉默可能通过降低自噬水平来提高AngⅡ暴露下hVSMCs增殖活性,并抑制其凋亡,从而参与AAA的发病。

原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13 FOXO1表达水平及其临床意义

目的探究原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13、FOXO1表达水平及其临床意义。方法选取2019年1月至2022年12月在本院收治的183例原发性肾病综合征儿童作为研究组。另选取同时期在本院体检的185名体检健康的儿童作为对照组,苏木精-伊红(ELISA)法检测血清Apelin-13、FOX-O1水平;采用Pearson法分析Apelin-13、FOXO1水平与血脂指标的关系;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Apelin-13、FOXO1对原发性肾病综合征的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结果与对照组比较,研究组患儿血清Apelin-13水平降低,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白(apo)B、FOXO1水平升高(P<0.05);与研究组治疗前比较,治疗后血清Apelin-13水平升高,TG、TC、LDL-C、apoB、FOXO1水平降低(P<0.05);Pearson相关性分析表明,原发性肾病综合征患儿血清Apelin-13与TG、TC、LDL-C、apoB均呈负相关,FOXO1与TG、TC、LDL-C、apoB均呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析表明,Apelin-13、FOXO1诊断原发性肾病综合征发生的曲线下面积(AUC)为0.795、0.734,二者联合诊断的AUC为0.920;多因素Logistic回归分析显示,Apelin-13与FOX-O1是影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结论原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13呈低表达、FOXO1呈高表达,二者与血脂水平有关,并且对原发性肾病综合征具有一定的诊断价值。

转录因子FoxO1与miR-142-3p在口腔鳞癌中的表达关系及意义

目的探讨转录因子叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)与微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在口腔鳞癌(OSCC)中的表达关系及意义。方法选取2016年5月~2018年6月于本院手术中留取的OSCC组织72份为观察组,选取50份形态学正常的癌旁口腔黏膜组织为对照组,比较两组FoxO1、miR-142-3p表达与OSCC临床病理特征的关系及二者的相关性,并采用COX回归模型分析OSCC患者预后不良事件的影响因素。结果观察组较对照组FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);高分化、中分化、低分化相比,FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均依次降低(P<0.05);与Ⅰ~Ⅱ期相比,Ⅲ~Ⅳ期FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);与无淋巴结转移相比,淋巴结转移者FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05)。Spearman结果显示,观察组FoxO1、miR-142-3p表达呈正相关(P<0.05)。单因素分析显示,性别、年龄、BMI、病理分级均与OSCC患者不良预后无关(P>0.05),临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是OSCC患者不良预后的影响因素(P<0.05)。多因素分析显示,临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是影响OSCC患者预后发生不良事件的独立危险因素(P<0.05)。结论FoxO1、miR-142-3p与OSCC的发生、发展及预后密切相关,FoxO1可能受miR-142-3p的靶向调控,这一结果可为病情评估及治疗靶点提供临床参考依据。

蓝萼甲素对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡、自噬及SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法:体外培养AML U937细胞,取培养至对数生长期的U937细胞分为对照组(常规培养U937细胞)、三氧化二砷组(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L蓝萼甲素)、高(在含U937细胞的培养基中加入4μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养48 h后。四甲基偶氮唑蓝法检测U937细胞增殖率,流式细胞术检测U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察U937细胞自噬小体数量,荧光定量PCR法检测U937细胞SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测U937细胞SIRT1、FoxO1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组U937细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:蓝萼甲素能抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

卵巢癌组织中miR-581、FOXO1表达与患者病理特征和预后的关系

目的探讨卵巢癌组织中微小RNA-581(miR-581)、叉头框转录因子O1(FOXO1)的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法选取97例卵巢癌患者,采用RT-qPCR法检测癌组织与癌旁组织中miR-581、FOXO1mRNA表达。采用Pearson相关系数分析卵巢癌组织中miR-581与FOXO1 mRNA表达的相关性。根据卵巢癌组织中miR-581、FOXO1 mRNA表达均值分为高、低表达,采用Kaplan-Meier法绘制不同miR-581、FOXO1 mRNA表达卵巢癌患者生存曲线。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-581表达高,FOXO1 mRNA表达低(P均<0.05)。Pearson相关系数分析显示,卵巢癌组织中miR-581与FOXO1 mRNA表达呈负相关(r=-0.728,P<0.05)。不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移卵巢癌组织中miR-581、FOXO1 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,死亡42例,3年累积生存率为56.70%(55/97)。K-M生存曲线分析显示,miR-581高表达者累积生存率低于miR-581低表达者,FOXO1 mRNA高表达者累积生存率低于FOXO1 mRNA低表达者(P均<0.05)。结论卵巢癌组织中miR-581高表达和FOXO1 mRNA低表达,二者表达与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关。

转录因子FOXO1和干细胞标志物CD133与神经母细胞瘤临床病理因素相关性

目的探究叉头框转录因子O亚族(FOXO)1与干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤(NB)中的表达及其相关性分析。方法使用免疫组织化学方法检测53例NB组织(病例组)和27例癌旁正常组织(对照组)中FOXO1和CD133蛋白表达情况;应用Western印迹检测3例NB组织及3例癌旁组织FOXO1和CD133蛋白表达情况。结果FOXO1在病例组中阳性表达率显著低于对照组;CD133在病例组中阳性表达率显著高于对照组;FOXO1、CD133与临床分期、组织类型和病理分型存在相关性(P<0.05);FOXO1在NB组织显著低于癌旁组织,而CD133在NB组织显著高于癌旁组织;FOXO1和CD133在蛋白表达水平上有明显相关性(P<0.05)。结论FOXO1可能通过负性调节CD133表达来调节NB干细胞特性,是NB发生发展的重要机制。

银杏叶提取物通过miR-145/FOXO1轴对实验性肾功能衰竭大鼠肾脏损伤的影响

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾损伤的影响及潜在的分子机制。方法:SD大鼠采用5/6肾切除术构建CRF模型,并分为模型(model)组、GBE组(100 mg/kg)、GBE+Agomir-NC组、GBE+Agomir-145组,每组12只;另取12只为假手术(sham)组,仅暴露肾脏,不进行肾脏切除。GBE组大鼠每日给予GBE100 mg/kg灌胃,1次/d,连续4周;GBE+AgomirNC组和GBE+Agomir-145组大鼠每日给予GBE100 mg/kg灌胃,然后每3 d一次分别通过尾静脉注射Agomir-NC和Agomir-145,连续4周;sham组和model组灌胃和尾静脉注射等量生理盐水。观察大鼠的一般状态,检测大鼠肾功能指标[24 h尿微量白蛋白(24 h UAlb)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)]和氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)],采用Masson染色观察肾组织纤维化情况,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾组织microRNA-145(miR-145)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和叉头框转录因子O1(FOXO1)m RNA表达水平,采用Western blot检测肾组织TGF-β1、FOXO1蛋白水平。结果:GBE干预后CRF大鼠的一般状态明显好转,体质量、肾组织SOD和GSH-Px活性、FOXO1的mRNA和蛋白水平显著高于model组(P<0.05);24 h UAlb、血清BUN、SCr和肾组织MDA水平、肾间质纤维化的相对面积以及肾组织miR-145、TGF-β1的mRNA和蛋白水平均显著低于model组(P<0.05);且在GBE干预的基础上,上调miR-145表达可明显减弱GBE对CRF大鼠肾损伤的保护作用(P<0.05)。结论:GBE可减轻CRF大鼠的肾脏损伤,其作用机制可能与下调miR-145,上调FOXO1表达,抑制肾纤维化有关。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

氧化苦参碱调控FOXO1表达对TNF-α诱导HaCaT细胞炎症因子分泌的影响

目的探讨氧化苦参碱调控叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)表达对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度TNF-α对HaCaT细胞增殖活性的影响,筛选TNF-α诱导浓度和时间。将诱导后的HaCaT细胞分为模型组(25μg/L TNF-α)、氧化苦参碱组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,未转染)、氧化苦参碱+LV-NC-GFP组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染空载体)、氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染FOXO1过表达载体),另取正常培养的HaCaT细胞为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中FOXO1表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中炎性因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中AKT、TLR-4和FOXO1蛋白表达水平。结果本研究采用25μg/L TNF-α处理24 h诱导HaCaT细胞。与对照组相比,模型组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,氧化苦参碱组和氧化苦参碱+LV-NC-GFP组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与氧化苦参碱+LV-NC-GFP组相比,氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过靶向抑制FOXO1表达降低炎性因子分泌,并可促进HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖。

FOXO1在宫颈癌组织中的表达及临床意义

研究叉头框转录因子O1(Forkhead box transcription factor O1,FOXO1)在宫颈癌组织中的表达变化趋势并进一步探索其表达变化与宫颈癌进程的关系,为临床救治宫颈癌探索新的作用靶点。方法 筛选近两年在我院妇科就诊且初次诊断为宫颈癌的30例患者进入本研究,详细收集并整理入选患者的临床资料和实验室检测结果,取患者部分宫颈癌组织和癌旁组织,经过相关步骤处理后,采用RT-PCR方法检测FOXO1 mRNA表达,采用免疫组化(IHC)法检测FOXO1蛋白表达;通过Kaplan-Meier法探讨在宫颈癌中FOXO1表达变化趋势与患者病理特征是否具有关联性,采用Logic回归分析方法研究宫颈癌中FOXO1表达变化趋势对患者治疗效果及预后的预测价值。结果 宫颈癌患者癌组织中FOXO1 mRNA和蛋白表达具有相同的变化趋势,比较发现,宫颈癌组织FOXO1 mRNA和蛋白相对表达量均明显高于宫颈癌癌旁组织中的相对表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,病理分级I、II、III、IV期患者人群宫颈癌组织中FOXO1 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量逐级升高,差异有统计学意义(P<0.05),提示FOXO1 mRNA和蛋白表达量越高则宫颈癌分化程度越高。并且分析结果显示,FOXO1低表达患者的5年生存率明显高于FOXO1高表达患者,FOXO1高表达为宫颈癌患者独立危险因素。结论 宫颈癌FOXO1表达升高与宫颈癌病理分化程度正相关,FOXO1表达量升高可作为判断宫颈癌预后较差的判断指标,并且FOXO1可作为宫颈癌治疗及新药研究的靶点。

MiR-486-5p/FOXO1轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞增殖和迁移的调节作用

目的探讨miR-486-5p/叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O subfamily 1,FOXO1)轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞的增殖和迁移的调节机制。方法小鼠建立深二度烧伤模型,随机分为NC mimic+Vector组、FOXO1组、miR-486-5p mimic组和miR-486-5p mimic+FOXO1组。采用miR-486-5p mimic和(或)FOXO1处理伤面,观察伤面愈合情况。在烧伤后分别于不同时间点[止血(0 d)、炎症(1 d)和增殖(7 d和14 d)]采用原位杂交技术和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测伤面边缘组织中miR-486-5p表达部位和水平,免疫荧光染色法检测FOXO1表达。通过荧光素酶报告分析FOXO1与miR-486-5p结合关系。构建miR-486-5p过表达或敲低人永生化角质形成细胞(human HaCaTKeratinocytes,HaCaT)模型,通过EdU法和划痕试验考察细胞的增殖和迁移情况,Western blot法分析细胞中FOXO1蛋白表达。结果miR-486-5p在小鼠深二度烧伤伤面愈合过程中显著上调。体内模型显示,miR-486-5p通过抑制FOXO1表达促进伤面愈合。在HaCaT细胞中,miR-486-5p过表达增加了细胞的增殖和迁移,抑制miR-486-5p则具有相反的效果。FOXO1是角质形成细胞中miR-486-5p的直接靶标。FOXO1过表达导致HaCaT细胞的EdU阳性细胞的百分比和伤面愈合降低,并且逆转了miR-486-5p对EdU阳性细胞和伤面愈合的诱导作用。结论miR-486-5p是深二度烧伤创面修复的关键调节剂,通过抑制FOXO1表达促进角质形成细胞的增殖和迁移。

FoxO1过表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制分析

观察FoxO1过表达转染后甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖、凋亡和细胞周期变化情况,并分析相关机制。 方法:于中国医学科学院肿瘤细胞库获取 PTC 细胞株 KTC-1,培养后接种于 24 孔板中,随机分为参照组、过表达组,各 12 孔,予以参照组转染空载体慢病毒,予以过表达组转染 FoxO1 过表达慢病毒,转染培养 72h,观察两组细胞增值率、细胞凋亡率、G0 / G1 期比例;并以 Western Blot 法检测两组细胞磷脂酰肌醇3 激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B 蛋白(p-Akt)、Bim 蛋白。 结果:过表达组 KTC-1 细胞增殖率低于参照组,凋亡率高于参照组,G0 / G1 期高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05);过表达组 KTC-1 细胞中 PI3K、p-Akt 低于参照组,Bim 高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论:FoxO1 过表达能够减少肿瘤细胞增殖、使细胞停滞在 G0 / G1 期、诱导细胞凋亡,控制 PTC 发展,上述作用受 PI3K / Akt / Bim 通路调控。

抑郁症患者血清FOXO1 IL-9表达及其与疾病严重程度的关系

目的探讨转录因子叉头框蛋白O1(FOXO1)、白细胞介素9(IL-9)在抑郁症患者血清中的表达情况及其与抑郁严重程度的关系。方法选取2020年6月至2021年6月于青海省第三人民医院精神科就诊并确诊为抑郁症的患者145例为观察组,根据汉密尔顿抑郁症评定量表(HAMD)评定患者病情,并据此分为轻度组(45例)、中度组(61例)、重度组(39例),同期选取110例健康体检人群为对照组。收集观察组及对照组一般资料并比较;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组血清中FOXO1、IL-9的表达水平;Pearson法分析抑郁症患者血清FOXO1、IL-9表达水平的相关性及二者与HAMD评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析抑郁症患者血清FOXO1、IL-9水平诊断抑郁症的价值。结果抑郁症患者血清中FOXO1、IL-9表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度组、中度组患者血清中FOXO1和IL-9表达水平均高于轻度组,且重度组上述指标均高于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。抑郁症患者血清中FOXO1、IL-9表达水平与HAMD评分呈明显正相关(r=0.546、0.464,P均<0.05),FOXO1与IL-9表达水平呈正相关(r=0.353,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清FOXO1、IL-9水平诊断抑郁症的曲线下面积(AUC)分别为0.877、0.714,灵敏度分别为87.00%、70.00%,特异度分别为81.40%、70.93%,二者联合诊断抑郁症的AUC为0.913,高于单一指标检测,敏感度为69.00%,特异度为95.35%。结论FOXO1和IL-9在抑郁症患者血清中均呈高水平,二者表达水平随着抑郁程度的加重逐渐增加,且二者联合检测可能作为诊断抑郁症的潜在血清标志物。

阿托伐他汀抑制PI3K/AKT/FoxO1通路及高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及氧化应激损伤

目的 基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/转录因子叉头框转录因子O亚族1(PI3K/AKT/FoxO1)通路研究阿托伐他汀对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡、迁移、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6]及氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法 体外培养人肾小球足细胞HGPC,分为对照组、高糖组、阿托伐他汀组、PI3K/AKT/FoxO1信号通路抑制剂组、阿托伐他汀+抑制剂组及阿托伐他汀+PI3K/AKT/FoxO1信号通路激活剂组。分别测定细胞增殖、凋亡、迁移能力、炎症因子(TNF-α、IL-6)水平、氧化因子(SOD、MDA)水平及PI3K/AKT/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。结果 10μmol/L阿托伐他汀为干预细胞活力的最佳浓度。高糖组细胞增殖率、SOD水平降低,凋亡率、迁移率、TNF-α、IL-6、MDA水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-FoxO1/FoxO1比值升高;阿托伐他汀组和抑制剂组细胞增殖率、SOD水平升高,凋亡率、迁移率、TNF-α、IL-6、MDA水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-FoxO1/FoxO1比值降低;阿托伐他汀+抑制剂组细胞上述指标趋势进一步加大,而阿托伐他汀+激活剂组趋势与之相反。结论 阿托伐他汀可通过抑制PI3K/AKT/FoxO1通路促进高糖诱导的足细胞增殖,抑制细胞凋亡、迁移、炎症及氧化应激损伤。

头颈鳞癌患者血清外泌体miR-96-5p高表达抑制FoxO1的生物学意义

目的:通过证实头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者血清外泌体(Exos)中miR-96-5p对叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)的靶向调节作用,探讨Exo-miR-96-5p对HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移等恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:取2020年9月至2022年1月我院收治的HNSCC患者(25例)及同期体检健康者(40例)血清标本,超速离心法提取Exos,RT-PCR检测Exos中miR-96-5p表达;PKH67染液标记Exos后,与HNSCC细胞系-AGZY-973共培养,观察HNSCC细胞对Exos摄取的影响。AGZY-973细胞分为:Control组(加入DMEM培养基正常培养)、HNSCC患者血清Exos组(加入DMEM培养基和50μL HNSCC患者血清Exos悬液共培养)、健康对照者血清Exos组(加入DMEM培养基和50μL健康对照者血清Exos悬液共培养),CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡率;Transwell检测迁移、侵袭;RT-PCR法检测miR-96-5p表达;Western blot法检测细胞FoxO1及促凋亡蛋白Bax、死亡调解子(Bim)、凋亡蛋白p21表达。双荧光素酶报告试验验证miR-96-5p与FoxO1靶向关系;36只裸鼠分为Control组、Exos组、Exos-miR-96-5p inhibitor组、Exos-inhibitor-NC组、Exos-pcDNA FoxO1组、Exos-pcDNA NC组,每组6只。Control组接种AGZY-973细胞培养液,其余各组分别接种含50μL HNSCC患者血清Exos悬液、Exos-miR-96-5p inhibitor悬液、Exos-inhibitor-NC悬液、Exos-pcDNA-FoxO1悬液、Exos-pcDNA-NC悬液的AGZY-973细胞培养液,28d后,检测瘤体体积及瘤体重量,以验证HNSCC患者血清Exos对miR-96-5p及FoxO1调控的影响。结果:HNSCC患者血清Exos及健康对照者血清Exos均有完整膜,形态呈杯口状,均可被AGZY-973细胞摄取。HNSCC患者血清Exos中miR-96-5p表达高于健康对照者血清Exos(P<0.05)。与Control组相比,HNSCC患者血清Exos组AGZY-973细胞miR-96-5p表达升高,FoxO1及Bax、Bim、p21等凋亡蛋白表达降低,细胞增殖、迁移及侵袭能力升高,凋亡率降低(P<0.05);健康对照者血清Exos对AGZY-973细胞miR-96-5p/FoxO1轴及生物学行为影响不大(P>0.05)。miR-96-5p与FoxO1之间有靶向调控关系。HNSCC患者血清Exos中转染miR-96-5p inhibitor或pcDNA-FoxO1,均可部分逆转Exos发挥的促瘤体生长作用(P<0.05)。结论:HNSCC患者血清Exos可通过传递miR-96-5p,靶向下调FoxO1,发挥促进HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移、生长等恶性生物学行为的发展。

叉头框转录因子O在肾脏疾病中作用研究进展

叉头框转录因子O(forkhead box O,FoxO)是体内众多重要信号传导通路中的关键调控因子之一。FoxO作为调节细胞增殖、氧化应激、细胞凋亡、细胞自噬、代谢和免疫反应等多种细胞功能的转录因子,主要通过转录和传导各种生长因子及细胞因子信号发挥其生物学功能,其中FoxO1、FoxO3a在肾脏病发病机制中发挥重要作用。本文就FoxO的结构、功能及其在肾脏疾病中作用的研究进展作一综述。

慢病毒介导shRNA干扰FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠ的表达

叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)是调控骨骼肌生长、代谢及细胞分化过程的重要转录因子,在肌纤维类型转化过程中发挥重要作用.为深入研究其对肌纤维类型的影响,构建FoxO1短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰慢病毒载体并感染猪成肌细胞,用real-time PCR和Western印迹法检测FoxO1和肌球蛋白重链Ⅰ(myosin heavy chainⅠ,MyHCⅠ)mRNA和蛋白的表达情况.测序结果证实,Lenti H1 RNAi FoxO1质粒构建正确,获得Lenti H1 RNAi FoxO1病毒颗粒滴度为8×107U/mL.病毒感染猪成肌细胞后,与对照组相比,siFoxO1a组FoxO1在转录水平上降低了58%,蛋白水平降低了77%,而MyHCⅠmRNA表达量提高了2.58倍.结果表明,本研究成功构建了猪FoxO1基因shRNA干扰慢病毒载体,且沉默FoxO1促进猪成肌细胞中MyHCⅠmRNA的表达.