恶性黑素瘤细胞miR-508-3p与叉头框转录因子C1的关系及对增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-508-3p与叉头框转录因子C1(forkhead box C1,FOXC1)的关系及其在恶性黑素瘤中的表达和作用机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测mi R-508-3p和FOXC1在HEM正常黑素细胞及A375恶性黑素瘤细胞中的表达;将体外培养的A375细胞分为mimics NC组、mi R-508-3p mimics组、inhibitor NC组和mi R-508-3p inhibitor组,RT-qPCR检测其沉默效果及对FOXC1 mRNA水平的影响;免疫印迹法(Western blot)分别检测FOXC1蛋白的表达量;MTT法检测A375细胞的增殖能力;Transwell实验检测转染后A375细胞侵袭及迁移能力的变化;荧光素酶报告基因技术检测FOXC1是否为mi R-508-3p的直接靶基因。结果与人正常黑素细胞相比,A375细胞中mi R-508-3p表达明显降低,而FOXC1表达明显升高;与inhibitor NC组相比,转染mi R-508-3p inhibitors的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显下调,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显升高;与mimics NC组相比,转染mi R-508-3p mimics的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显升高,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低;mi R-508-3p mimics可降低野生型FOXC1 3’-UTR的荧光素酶报告基因相对活性。结论 mi R-508-3p通过负向调控FOXC1抑制恶性黑素瘤的增殖、迁移和侵袭。

雷帕霉素对自发性系统性红斑狼疮小鼠外周血调节性T细胞叉头框家族转录因子P3表达量的影响

系统性红斑狼疮、银屑病及白癜风等是临床常见的皮肤疾病,机体免疫功能失调是其发生的重要原因。调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）是一类可以调节其他免疫细胞功能的T细胞亚型,可以通过多种机制抑制免疫效应从而维持体内免疫稳态[1]。近年来研究发现叉头框家族成员P3（forkhead box P3,Foxp3）是调节性T细胞的特异性分子。

癌组织FOXP1、CHI3L1表达与分化型甲状腺癌病人临床病理因素及预后的关系

目的 探索分化型甲状腺癌(DTC)病人癌组织叉头框转录因子P1(FOXP1)、壳多糖酶-3样蛋白-1(CHI3L1)表达情况及其与病人临床病理因素和预后的相关性。方法 选取2016年1月~2017年12月在本院行手术治疗的256例DTC病人,收集癌组织与癌旁组织(距癌旁组织>3cm),检测其FOXP1、CHI3L1表达水平;分析癌组织FOXP1、CHI3L1表达水平与预后的关系;以COX回归模型分析病人预后不良的影响因素。结果 DTC病人癌组织FOXP1阳性表达率低于癌旁组织,CHI3L1阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。DTC癌组织FOXP1、CHI3L1表达水平均与病灶数目、肿瘤直径、T分期、淋巴结转移、腺外浸润、分化程度有关(P<0.05)。DTC病人预后不良发生率为27.73%,FOXP1阳性表达病人预后不良发生率低于阴性表达病人(P<0.05),CHI3L1阳性表达病人预后不良发生率高于阴性表达病人(P<0.001)。肿瘤直径>2 cm、T3~T4分期、淋巴结转移、腺外浸润、低分化、癌组织CHI3L1阳性表达均是DTC病人预后的危险因素(P<0.05)。结论 DTC病人癌组织FOXP1表达下调,CHI3L1表达上调,二者均与DTC病人临床病理因素和预后显著相关。

生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1(FOXD1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法研究于2018年12月至2019年12月进行,通过体外培养PANC-1细胞,经过不同浓度(0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的生长抑素(SST)处理细胞,记为生长抑素各剂量组,其中0 mg/L和400 mg/L的生长抑素作为对照组(Control)和生长抑素组(SST);将过表达载体(pcDNA)和过表达FOXD1(FOXD1)转染至PANC-1细胞,经过400 mg/L的生长抑素及20 mol/L的PI3K抑制剂LY294002处理细胞,记为SST+pcDNA组、SST+FOXD1组和SST+FOXD1+LY294002组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、FOXD1和PI3K/AKT相关蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测FOXD1 mRNA的表达。结果与Control组相比,SST组可以抑制FOXD1 mRNA(0.47±0.03)及蛋白表达(0.42±0.04)、增殖(0.52±0.05)、迁移(66.8±7.2)和侵袭(63.7±6.5)能力,下调p-PI3K(0.43±0.04)、p-AKT(0.39±0.03)蛋白表达;与SST+pcDNA组相比,SST+FOXD1组可以促进以抑制FOXD1 mRNA(0.67±0.05)及蛋白表达(0.64±0.06)、增殖(0.71±0.07)、迁移(86.9±8.5)和侵袭(81.5±7.3)能力,上调p-PI3K(0.62±0.05)、p-AKT(0.65±0.06)蛋白表达。与SST+FOXD1组相比,SST+FOXD1+LY294002组可以抑制FOXD1 mRNA(0.37±0.04)及蛋白表达(0.35±0.03)、增殖(0.53±0.05)、迁移(67.2±6.5)和侵袭(62.5±5.2)。结论生长抑素通过调控FOXD1的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

叉头框转录因子3a和β-连环蛋白在胚胎停育绒毛组织中的表达及意义

目的检测叉头框转录因子3a(FoxO3a)、β-连环蛋白(β-catenin)在胚胎停育绒毛组织中的表达情况,探讨二者在胚胎停育中的相互作用及其与凋亡的关系。方法选取2017年10月-2018年6月就诊于包钢集团第三职工医院妇产科门诊,经彩超动态监测证实为胚胎停育者36例绒毛组织为研究组,同期正常妊娠自愿要求负压吸引术流产者30例绒毛组织为对照组,采用免疫组织化学技术SP法检测FoxO3a和β-catenin在两组中的表达情况。结果与对照组相比,研究组绒毛滋养细胞中的FoxO3a表达降低、β-catenin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),FoxO3a与β-catenin在胚胎停育中的表达呈负相关(P<0.05)。结论胚胎停育滋养细胞中FoxO3a表达降低、β-catenin表达升高,二者可能共同参与胚胎停育的细胞过度凋亡。

GARP、Foxp3及TGF-β在桥本甲状腺炎病人PBMC中的表达及意义

目的:探讨桥本甲状腺炎(HT)病人外周血单个核细胞(PBMC)中糖蛋白A重复序列为主的蛋白(GARP)、叉头框蛋白p3(Foxp3)、转化生长因子β(TGF-β)mRNA表达水平和意义。方法:选取HT病人32例作为观察组,选取同期健康体检者32名作为对照组。采用化学发光免疫法测定2组血清促甲状腺激素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)水平,放射免疫法检测甲状腺抗体TmAb、TgAb水平。采用实时荧光定量PCR检查HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA,分析HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达量与甲状腺功能指标水平的相关性。结果:2组TT3、TT4、TSH水平差异均无统计学意义(P>0.05),观察组TgAb和TmAb水平均明显高于对照组(P<0.01)。观察组GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.01)。Pearson相关分析显示,HT病人PBMC中GARP mRNA表达水平与TgAb水平呈负相关关系(P<0.05),与TT3水平呈明显正相关关系(P<0.01)。结论:HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达降低。GARP mRNA与TgAb水平呈负相关关系,与TT3水平呈明显正相关关系,可能与HT的发生、发展相关。

叉头框转录因子O亚族3a对结肠癌SW620细胞的影响及机制研究

目的:探讨叉头框转录因子O亚族3a(FOXO3a)对人结肠癌SW620细胞的影响,并分析其可能机制。方法:将转染FOXO3a过表达的载体作用于结肠癌SW620细胞。采用MTT法检测48 h后各组细胞生长抑制率。采用免疫细胞化学检测转各组FOXO3a、CD133、八聚体结合转录因子4(OCT4)蛋白表达阳性率。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组FOXO3a、CD133、OCT4 mRNA相对表达水平。采用Western blot检测各组FOXO3a、CD133、OCT4蛋白相对表达水平。采用细胞迁移侵袭实验测定各组细胞穿膜数。对各组上述指标进行比较。结果:转染FOXO3a过表达载体后,结肠癌SW620细胞生长抑制率提高,FOXO3a蛋白表达阳性率增高,CD133、OCT4 mRNA及蛋白相对表达水平降低(P<0.05),迁移侵袭能力受到抑制(均P<0.05)。结论:FOXO3a可以抑制SW620细胞的增殖,减弱肿瘤细胞迁移侵袭能力,其机制可能与降低CD133、OCT4表达有关。

子宫内膜癌组织叉头框转录因子O亚型3a与基质金属蛋白酶-14表达水平及相关性

目的检测子宫内膜癌中叉头框转录因子O亚型(FOXO)3a和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达。方法 63例行子宫内膜癌根治手术患者作为观察组,并留取术后组织,40例子宫内膜复杂性增生患者术后标本作为对照组,40例增生期子宫内膜诊刮标本作为正常对照组。采用免疫组化SP法检测3组中FOXO3a和MMP-14的表达。结果 FOXO3a和MMP-14在三组中的表达有统计学意义。观察组中FOXO3a和MMP-14的阳性率均与肌层浸润深度、淋巴结累犯密切相关,FOXO3a的阳性率与肿瘤的最大径密切相关。观察组中FOXO3a和MMP-14的表达呈负相关性。结论子宫内膜癌中FOXO3a低表达、MMP-14高表达对肿瘤的形成和进展可能有促进作用,二者具有负向协同作用。

乳腺癌组织中FOXP3、CMTM6、Shoc2表达及其临床意义

目的探讨叉头框蛋白P3(FOXP3)、趋化素样因子超家族6(CMTM6)、Shoc2在乳腺癌组织中的表达及与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取51例女性乳腺癌患者为研究对象,采集癌组织与癌旁正常组织,以免疫组织化学法测定FOXP3、CMTM6、Shoc2的阳性表达。收集患者的年龄等一般资料,分析FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系;随访3年,分析三项指标表达与患者预后的关系。结果癌组织FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌患者的年龄、体重指数(BMI)、肿瘤大小无关(P>0.05);FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达患者的3年生存率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FOXP3、CMTM6、Shoc2在乳腺癌组织内呈高表达,与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移联系紧密,参与疾病的发生与发展,且三项指标表达水平越高,则患者预后越差。

转录因子叉头框蛋白O3a对前列腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨转录因子叉头框蛋白O3a(FOXO3a)对前列腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌细胞LNCaP、DUl45、PC-3中FOXO3a表达水平,选择FOXO3a表达最低的前列腺癌细胞系转染pcDNA-FOXO3a、pcDNA-NC构建FOXO3a过表达细胞系(pc-FOXO3a)和阴性对照(NC),采用MTT法、流式细胞法检测细胞活性和凋亡情况,Transwell试验、划痕试验检测细胞侵袭和迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测钙黏附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)、Snail、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、剪切型胱天蛋白酶-3(Cleaved-Cas-3)、Bcl-2相关X(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt1水平。运用氯化锂(Wnt/β-catenin信号通路激活剂)作用于pcDNA-FOXO3a前列腺细胞,分析细胞活性、凋亡和上皮间质转换(EMT)情况。结果LNCaP、DUl45、PC-3细胞中FOXO3a表达水平均显著低于RWPE-1细胞[(0.23±0.04)、(0.53±0.05)、(0.42±0.06)比(1.02±0.08)](P<0.05),其中LNCaP细胞中FOXO3a表达水平最低。pc-FOXO3a LNCaP细胞活性、单个视野细胞侵袭数目、划痕迁移率显著低于NC LNCaP细胞(P<0.05),细胞凋亡率显著高于NC LNCaP细胞(P<0.05);pc-FOXO3a LNCaP细胞N-cadherin、Vimentin、Snail、β-catenin、c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、Wnt1水平显著低于NC LNCaP细胞(P<0.05),而E-cadherin、Cleaved-Cas-3、Bax水平显著高于NC LNCaP细胞(P<0.05)。LiCl-pc-FOXO3a LNCaP细胞活性、单个视野细胞侵袭数目、划痕迁移率、N-cadherin、Vimentin、Snail水平显著高于LiCl-pc-FOXO3a-Ctrl LNCaP细胞(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin水平显著低于LiCl-pc-FOXO3a-Ctrl LNCaP细胞(P<0.05)。结论FOXO3a表达升高可降低前列腺癌细胞活性、促进细胞凋亡,抑制细胞EMT,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

下调叉头框转录因子3a促进鼻咽癌侵袭转移

目的探讨下调叉头框转录因子3a(FOXO3a)对促进鼻咽癌侵袭转移的影响。方法慢病毒sh RNA和空载病毒液Mock sh RNA按复感染指数(multiplicity of infection,MOI)为50转染鼻咽癌CNE2和HNE1细胞,构建低表达FOXO3a的稳定转染细胞。采用Western blot、Real-time PCR检测其转染效率。划痕实验和Transwell实验检测下调FOXO3a对诱导鼻咽癌细胞侵袭转移的影响。Western blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Twist和Snail的表达,免疫荧光检测EMT相关蛋白定位。Western blot和Real-time PCR检测基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的表达。结果成功构建低表达FOXO3a稳定转染鼻咽癌CNE2和HNE1细胞。划痕实验和Transwell实验结果显示,与空载体转染鼻咽癌细胞比较,低表达FOXO3a稳定转染鼻咽癌细胞的侵袭和转移能力增强,EMT相关蛋白E-cadherin表达下调,而Vimentin、N-cadherin、Twist和Snail表达显著升高,MMP2和MMP9表达亦升高。结论下调FOXO3a可促进鼻咽癌的侵袭转移。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

叉头框转录因子O3a对食管癌Eca-109细胞恶性表型的影响及机制探讨

本实验旨在研究叉头框转录因子O3a对人食管癌Eca-109细胞增殖、侵袭、迁移等恶性表型的影响,以期明确食管癌细胞恶性表型相关机制,为探索新的治疗药物及治疗方案提供新的思路。方法 取人正常食管上皮细胞(Het1-A细胞)和Eca-109细胞,通过叉头框转录因子O3a载体和阴性对照载体转染构建叉头框转录因子O3a过表达的Eca-109细胞(叉头框转录因子O3a-Eca-109)和阴性对照Eca-109细胞(NC-Eca-109)。采用Transwell实验装置检测各组细胞侵袭能力、划痕实验检测各组细胞迁移能力,通过RT-PCR实验和Western blot实验检测各组细胞叉头框转录因子O3a、钙黏附蛋白、波形蛋白mRNA和蛋白表达。结果 较人正常食管上皮细胞(Het1-A细胞),NC-Eca-109细胞侵袭能力和迁移能力均明显升高(P<0.05);NC-Eca-109细胞叉头框转录因子O3a mRNA和蛋白相对表达量均显著降低,钙黏附蛋白、波形蛋白mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。较NC-Eca-109细胞,叉头框转录因子O3a-Eca-109细胞侵袭能力和迁移能力均明显降低(P<0.05);叉头框转录因子O3a-Eca-109细胞叉头框转录因子O3a mRNA和蛋白相对表达量均显著升高,钙黏附蛋白、波形蛋白mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论 叉头框转录因子O3a低表达可能是导致人食管癌Eca-109细胞增殖、侵袭、迁移等恶性表型的重要原因,诱导叉头框转录因子O3a表达可作为食管癌防治药物的切入点。

叉头框转录因子D3蛋白表达与胃癌相关病理学参数的关联性

目的:探讨叉头框转录因子D3(FOXD3)蛋白表达与胃癌相关病理学参数的关联性。方法:选取2018-03~2019-11我院胃癌患者109例,对比胃癌组织及癌旁组织FOXD3蛋白阳性率,对比不同病理参数(性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、临床分期、浸润深度、是否有淋巴结转移)FOXD3蛋白阳性表达情况,分析FOXD3蛋白阳性率与胃癌病理学参数关系。结果:胃癌组织FOXD3蛋白阳性率78.90%(86/109)高于癌旁组织28.44%(31/109,P<0.05);低分化程度、浸润程度T3~T4、淋巴结转移患者FOXD3蛋白阳性率高于中高分化程度者、浸润程度T1~T2、无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05);中、低分化程度FOXD3蛋白阳性率是高分化的5.143倍;浸润程度为T3~T4是T1~T2的2.909倍;有淋巴结转移是无淋巴结转移的1.966倍,分化程度、浸润程度、淋巴结转移与FOXD3蛋白阳性率显著相关(P<0.05)。结论:胃癌患者FOXD3蛋白呈异常高表达,且其表达与分化程度、浸润程度、淋巴结转移密切相关,临床可据此判断患者病情程度,为制定针对性治疗措施提供参考依据。

外周血叉头框蛋白P3的表达与原因不明复发性流产关系的研究

目的:探讨外周血叉头框蛋白P3(Foxp3)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法:选择2018年5月至2020年5月于本院进行治疗的126例URSA患者作为URSA组,选择同期于本院进行产前检查的82例健康孕妇作为对照组。比较两组的一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3的mRNA表达;多因素Logisitic回归分析影响URSA发生的相关因素;Pearson相关性分析外周血Foxp3水平与导致URSA发生的危险因素的相关性;流式细胞术检测Foxp3对Th17/Treg平衡的调控作用;ROC曲线分析Foxp3水平对发生URSA的预测价值,并评价其准确度和有效性。结果:两组的孕酮、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)、Foxp3、Th17、Treg、Th17/Treg差异均有统计学意义(P<0.05)。孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平及IL-6、IL-17、Th17水平、Th17/Treg比值均是影响URSA发生的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。Foxp3分别与孕酮、IL-10、TGF-β、Treg呈显著正相关(r>0,P<0.05),与IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg呈显著负相关(r<0,P<0.05);Foxp3刺激CD4+T细胞12小时和24小时能够显著降低Th17细胞比例和Th17/Treg比值,增加Treg细胞比例。ROC曲线分析Foxp3预测URSA发生的曲线下面积为0.795,准确度和有效性较好。结论:孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平降低及IL-6、IL-17、Th17水平及Th17/Treg比值增加均可能导致URSA的发生风险增加,Foxp3对Th17/Treg平衡具有调控作用。

转录因子FoxO1与miR-142-3p在口腔鳞癌中的表达关系及意义

目的探讨转录因子叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)与微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在口腔鳞癌(OSCC)中的表达关系及意义。方法选取2016年5月~2018年6月于本院手术中留取的OSCC组织72份为观察组,选取50份形态学正常的癌旁口腔黏膜组织为对照组,比较两组FoxO1、miR-142-3p表达与OSCC临床病理特征的关系及二者的相关性,并采用COX回归模型分析OSCC患者预后不良事件的影响因素。结果观察组较对照组FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);高分化、中分化、低分化相比,FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均依次降低(P<0.05);与Ⅰ~Ⅱ期相比,Ⅲ~Ⅳ期FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);与无淋巴结转移相比,淋巴结转移者FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05)。Spearman结果显示,观察组FoxO1、miR-142-3p表达呈正相关(P<0.05)。单因素分析显示,性别、年龄、BMI、病理分级均与OSCC患者不良预后无关(P>0.05),临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是OSCC患者不良预后的影响因素(P<0.05)。多因素分析显示,临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是影响OSCC患者预后发生不良事件的独立危险因素(P<0.05)。结论FoxO1、miR-142-3p与OSCC的发生、发展及预后密切相关,FoxO1可能受miR-142-3p的靶向调控,这一结果可为病情评估及治疗靶点提供临床参考依据。

IRF4通过调控FOXP3影响支气管肺发育不良模型小鼠肺血管内皮细胞增殖

目的:通过分析干扰素调节因子4(interferon regulatory factor 4,IRF4)和叉头框蛋白P3(forkhead box P3,FOXP3)的相互作用及其与肺血管内皮细胞(pulmonary vascular endothelial cells,PVECs)增殖的关系,探讨IRF4在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型小鼠肺发育中的作用。方法:利用85%高氧暴露建立C57BL/6小鼠BPD模型,以空气暴露为正常对照,将小鼠分为常氧7 d(normoxia for 7 d,N7)组、高氧7 d(hyperoxia for 7 d,H7)组、常氧14 d(normoxia for 14 d,N14)组和高氧14 d(hyperoxia for 14 d,H14)组,每组6只。分别在空气或高氧暴露7 d和14 d取肺组织,苏木素-伊红染色观察肺组织病理情况;免疫组化染色检测PVECs增殖标志物血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)的表达;Western blot检测血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)、FOXP3和IRF4蛋白的表达水平;免疫共沉淀检测IRF4和FOXP3蛋白的相互作用。结果:与同时间点常氧组相比,高氧组小鼠肺组织CD31阳性细胞平均光密度和肺血管密度均显著降低(P<0.01);高氧组小鼠肺组织VEGFA、Ang-1和FOXP3蛋白表达水平均显著降低,IRF4蛋白表达水平显著升高(P<0.01);免疫共沉淀提示IRF4和FOXP3存在相互作用,且高氧组较常氧组相互作用显著增强(P<0.01);IRF4和FOXP3蛋白表达呈显著负相关(R=-0.932,P<0.01),FOXP3蛋白表达与CD31呈显著正相关(R=0.865,P<0.01)。结论:在高氧诱导的BPD模型小鼠中,IRF4可能通过抑制FOXP3蛋白表达影响PVECs的增殖和肺血管发育。

叉头框蛋白O1通过信号传导和转录激活因子3信号通路对高糖高脂诱导的H9c2心肌细胞自噬及凋亡影响的研究

目的 探讨叉头框蛋白O1(FoxO1)通过信号传导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对高糖高脂诱导的H9c2心肌细胞自噬及凋亡的影响。方法 H9c2细胞分为正常对照组(Con)、高糖高脂(HG)组、阴性对照(si-NC)组、FoxO1小干扰RNA组(si-FoxO1)、si-FoxO1+STAT3小干扰RNA组(si-FoxO1+si-STAT3)。检测各组细胞增殖、细胞内自噬体、细胞凋亡、活性氧簇(ROS),Western blot法检测各组FoxO1、p-FoxO1、STAT3、p-STAT3、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果 与Con组比较,HG、si-NC、si-FoxO1、si-FoxO1+si-STAT3组细胞MDC阳性细胞、细胞凋亡率、ROS平均荧光强度升高(P<0.05),OD_(450)降低(P<0.05),HG、si-NC、si-FoxO1+si-STAT3组p-FoxO1/FoxO1、LC3Ⅱ、Beclin1、Bax蛋白表达升高(P<0.05),p-STAT3/STAT3、Bcl2蛋白表达降低(P<0.05),si-FoxO1组LC3Ⅱ蛋白表达升高(P<0.05),FoxO1、Bcl2蛋白表达降低(P<0.05)。与HG、si-NC组比较,si-FoxO1、si-FoxO1+si-STAT3组OD450、p-STAT3/STAT3、Bcl2蛋白表达升高(P<0.05),细胞MDC阳性细胞、细胞凋亡率、ROS平均荧光强度、FoxO1、LC3Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05),si-FoxO1组p-FoxO1/FoxO1、Beclin1、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。与si-FoxO1组比较,si-FoxO1+si-STAT3组细胞MDC阳性细胞、细胞凋亡率、ROS平均荧光强度、FoxO1、p-FoxO1/FoxO1、LC3Ⅱ、Beclin1、Bax蛋白表达升高(P<0.05),OD450、p-STAT3/STAT3、Bcl2蛋白表达降低(P<0.05)。结论 降低FoxO1可激活STAT3信号通路,以实现对高糖高脂诱导的H9c2心肌细胞自噬和凋亡过度的缓解。

外周血Foxp3、RANTES联合检测对原因不明复发性流产的临床诊断价值

目的探讨外周血叉头框蛋白p3(Foxp3)、T细胞正常表达和分泌刺激因子(RANTES)联合检测对原因不明复发性流产的临床诊断价值。方法选择2021年7月至2022年9月本院收治的128例原因不明复发性流产患者为病例组,另选取同期于本院体检的128例健康早孕者为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有研究对象外周血的Foxp3和RANTES水平,流式细胞仪检测外周血辅助性T细胞(Th17)和调节性T细胞(Treg)水平。采用Pearson和Spearman相关性分析法分析外周血Foxp3和RANTES水平与免疫指标和原因不明复发性流产的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血Foxp3和RANTES水平对原因不明复发性流产的诊断价值。结果与对照组比较,病例组外周血Foxp3、RANTES水平和Treg比例显著下降(P<0.05),Th17比例和Th17/Treg显著升高(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,病例组外周血Foxp3和RANTES水平与Th17、Th17/Treg均呈显著负相关(P<0.05),与Treg均呈显著正相关(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血Foxp3和RANTES水平均与原因不明复发性流产的发生呈显著负相关(r=-0.539,-0.554,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清Foxp3水平单独诊断原因不明复发性流产发生的曲线下面积(AUC)为0.820[95%CI(0.767,0.865)],其敏感度、特异度分别为70.31%、85.94%;血清RANTES水平单独诊断原因不明复发性流产发生的AUC为0.840[95%CI(0.789,0.883)],其敏感度、特异度分别为69.53%、85.16%;血清Foxp3和RANTES联合诊断原因不明复发性流产发生的AUC为0.909[95%CI(0.867,0.942)],显著大于Foxp3单独诊断的AUC(Z=4.165,P=0.000)和RANTES单独诊断的AUC(Z=3.183,P=0.002)。结论Foxp3和RANTES水平均与原因不明复发性流产孕妇的免疫平衡失调有关,二者联合对原因不明复发性流产具有较高的诊断价值。

辅助性T细胞17/调节性T细胞及维甲酸相关孤儿受体γt/叉头框转录因子P3失衡在妊娠相关疾病中的研究进展

在免疫学领域,妊娠相当于一次成功的半同种移植现象,母体对半异体胎儿的免疫耐受情况关乎妊娠的结局。辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)是最新发现的CD^(+)_(4)T淋巴细胞亚群,相关转录因子维甲酸相关孤儿受体γt和叉头框转录因子P3的表达水平与Th17/Treg之间的平衡密切相关。Th17/Treg免疫失衡会导致母体对胎儿的异常攻击,造成母胎耐受紊乱,并与复发性流产、先兆子痫、妊娠糖尿病等病理妊娠有关。