叉头框转录蛋白1在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义

目的探讨叉头框转录蛋白1(FOXP1)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达及其与DLBCL临床病理特征和预后的关系。方法用免疫组织化学En Vision法检测85例DLBCL组织中FOXP1蛋白的表达情况,并分析FOXP1与临床病理特征及预后的关系。结果 85例DLBCL组织中FOXP1的阳性表达率为71.8%(61/85),FOXP1表达与年龄、PS评分、乳酸脱氢酶(LDH)水平、国际预后指数评分、病理类型密切相关(P<0.05)。在生发中心型(GCB)DLBCL中FOXP1阳性和阴性表达者的无病生存期(PFS)为13个月和44个月(P=0.002),总生存期(OS)为28个月和50个月(P=0.003);而在非生发中心型(non-GCB)中FOXP1表达与生存预后无关(P>0.05)。单因素分析显示分期、LDH水平、有无B症状以及FOXP1表达与DLBCL患者的PFS和OS均相关(P<0.05),Cox多因素回归分析显示分期(95%CI:1.410～4.415,P=0.02)和FOXP1表达(95%CI:0.143～0.734,P=0.007)是PFS的独立预测因素。结论 FOXP1蛋白有可能是DLBCL的一个重要的预后指标,尤其在GCB型DLBCL中FOXP1蛋白阳性表达提示预后不佳。

生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1(FOXD1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法研究于2018年12月至2019年12月进行,通过体外培养PANC-1细胞,经过不同浓度(0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的生长抑素(SST)处理细胞,记为生长抑素各剂量组,其中0 mg/L和400 mg/L的生长抑素作为对照组(Control)和生长抑素组(SST);将过表达载体(pcDNA)和过表达FOXD1(FOXD1)转染至PANC-1细胞,经过400 mg/L的生长抑素及20 mol/L的PI3K抑制剂LY294002处理细胞,记为SST+pcDNA组、SST+FOXD1组和SST+FOXD1+LY294002组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、FOXD1和PI3K/AKT相关蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测FOXD1 mRNA的表达。结果与Control组相比,SST组可以抑制FOXD1 mRNA(0.47±0.03)及蛋白表达(0.42±0.04)、增殖(0.52±0.05)、迁移(66.8±7.2)和侵袭(63.7±6.5)能力,下调p-PI3K(0.43±0.04)、p-AKT(0.39±0.03)蛋白表达;与SST+pcDNA组相比,SST+FOXD1组可以促进以抑制FOXD1 mRNA(0.67±0.05)及蛋白表达(0.64±0.06)、增殖(0.71±0.07)、迁移(86.9±8.5)和侵袭(81.5±7.3)能力,上调p-PI3K(0.62±0.05)、p-AKT(0.65±0.06)蛋白表达。与SST+FOXD1组相比,SST+FOXD1+LY294002组可以抑制FOXD1 mRNA(0.37±0.04)及蛋白表达(0.35±0.03)、增殖(0.53±0.05)、迁移(67.2±6.5)和侵袭(62.5±5.2)。结论生长抑素通过调控FOXD1的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

SF3B1/FOXM1/JUNB轴调控SOX21表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响研究

目的分析剪接因子3B亚基1/叉头框转录因子M1/转录因子活化蛋白激酶B(SF3B1/FOXM1/JUNB)轴调控转录因子21抗体(SOX21)表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法选取2022年3月至2023年12月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的50例宫颈癌患者的癌旁组织及癌组织作为研究对象,利用实时荧光定量PCR检测SF3B1、FOXM1、JUNB、SOX21表达;通过Transwell、细胞计数试剂8(CCK8)检测宫颈癌细胞生物学行为(增殖、迁移、侵袭);利用蛋白质印迹法测定SF3B1、FOXM1、JUNB、SOX21蛋白表达。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织JUNB表达低,FOXM1、SOX21、SF3B1表达高,差异有统计学意义(P<0.05);与si-NC组相比,si-SF3B1/FOXM1/JUNB组0 h OD450值高,侵袭细胞数、迁移细胞数、(24、48 h)OD450值、SF3B1、FOXM1、JUNB低,差异有统计学意义(P<0.05);与OE-NC组相比,OE-SOX21组迁移细胞数、(0、24、48 h)OD450值、SOX21、侵袭细胞数高,差异有统计学意义(P<0.05);与si-SF3B1/FOXM1/JUNB+OE-NC组相比,si-SF3B1/FOXM1/JUNB+OE-SOX21组SOX21、SF3B1、FOXM1、JUNB、(0、24、48 h)OD450值、侵袭细胞数、迁移细胞数高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SF3B1/FOXM1/JUNB轴通过激活SOX21表达可促进宫颈癌细胞侵袭、增殖、迁移。

FoxO1过表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制分析

观察FoxO1过表达转染后甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖、凋亡和细胞周期变化情况,并分析相关机制。 方法:于中国医学科学院肿瘤细胞库获取 PTC 细胞株 KTC-1,培养后接种于 24 孔板中,随机分为参照组、过表达组,各 12 孔,予以参照组转染空载体慢病毒,予以过表达组转染 FoxO1 过表达慢病毒,转染培养 72h,观察两组细胞增值率、细胞凋亡率、G0 / G1 期比例;并以 Western Blot 法检测两组细胞磷脂酰肌醇3 激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B 蛋白(p-Akt)、Bim 蛋白。 结果:过表达组 KTC-1 细胞增殖率低于参照组,凋亡率高于参照组,G0 / G1 期高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05);过表达组 KTC-1 细胞中 PI3K、p-Akt 低于参照组,Bim 高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论:FoxO1 过表达能够减少肿瘤细胞增殖、使细胞停滞在 G0 / G1 期、诱导细胞凋亡,控制 PTC 发展,上述作用受 PI3K / Akt / Bim 通路调控。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

短发夹RNA靶向沉默叉头框蛋白Q1基因对膀胱癌上皮间质转化的逆转作用

目的观察转录因子叉头框蛋白Ql（FOXQl）基因沉默对膀胱癌T24细胞上皮间质转化（EMT）的逆转，探讨其促进肿瘤侵袭转移的作用机制。方法构建针对FOXQl基因的短发卡RNA（shRNA）真核表达载体，脂质体Lipofactamine2000介导FOXQl干扰质粒转染人膀胱癌细胞株T24细胞；转染48h后采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot法检测FOXQl、上皮间质标志物E-钙黏蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏蛋白（N—Cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达改变；细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力；噻唑蓝（M1Tr）比色法和吖啶橙／溴乙锭（AO／EB）荧光染色法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用。结果与转染NC—shRNA阴性对照组比较，转染FOXQl-shRNA48h后的T24细胞，FOXQl和间质标记基因N—Cadherin、Vimentin的mRNA或蛋白表达下降，而上皮标记基因E．cadherin的mRNA或蛋白表达显著增加；转染后的T24细胞形态向正常上皮细胞转化，体外迁移能力与侵袭力下降[（15．4±1．4）％比（76．5±1．1）％，P〈0．05]；细胞增殖明显抑制（57．8％比82．7％，P〈0．05），同时细胞凋亡率增加（37．6％比14．2％，P〈0．05）。结论靶向沉默FOXQl基因可以逆转肿瘤细胞的间质表型向正常上皮表型转化，抑制癌细胞迁移和侵袭，降低肿瘤转移潜能。

FOXP1在上皮性卵巢癌中的表达及其与化疗耐药和预后的关系

目的:探讨叉头框转录蛋白1(FOXP1)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及其与患者化疗耐药和预后的关系。方法:收集经手术后病理检查证实为EOC的60例患者,所有患者术后均接受以铂类为基础的规范化静脉化疗方案,采用免疫组化法测定EOC癌组织及癌旁组织FOXP1表达情况,分析FOXP1表达与EOC临床病理参数的关系;依据化疗敏感性分组,总结FOXP1表达与EOC化疗耐药的关系;并采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并以Cox回归分析筛选EOC预后影响因素。结果:①EOC癌组织FOXP1表达阳性率明显高于癌旁组织(73.33%vs 11.67%,P<0.05);②临床分期为Ⅲ~Ⅳ期(86.67%)、病理分化程度为中、低分化(76.67%、93.75%)、伴淋巴结转移(93.33%)的EOC患者癌组织FOXP1表达阳性率显著高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期(33.33%)、病理分化为高分化(42.86%)且不伴淋巴结转移(66.67%)的EOC患者(P<0.05);③耐药患者癌组织FOXP1阳性率显著高于敏感患者(100.00%vs 66.67%,P<0.05);④FOXP1阴性EOC患者累积生存时间显著高于FOXP1阳性患者(35.05月vs 29.06月,P<0.05);⑤FOXP1表达、临床分期、病理分化程度、淋巴结转移、化疗敏感程度均为EOC预后的影响因素(P<0.05)。结论:EOC癌组织FOXP1呈异常高表达,且FOXP1与EOC分化程度、临床分期、肿瘤转移密切相关,FOXP1可能为预测EOC化疗耐药及不良预后的分子标志物。

FOXP1在重症肌无力患者外周血B 淋巴细胞中的表达和临床意义

目的：探讨重症肌无力（ MG）患者外周血B淋巴细胞中叉头框蛋白P1（ FOXP1） mRNA表达水平和临床意义。方法收集34例MG患者及24例健康体检者（健康对照组）的静脉血样，并根据MG患者病情程度将其分为眼肌型重症肌无力（ OMG）组和全身型重症肌无力（ GMG）组，根据定量重症肌无力（ QMG）量表评分。荧光实时定量PCR检测CD19＋B细胞中FOXP1 mRNA的表达水平，流式细胞术检测外周血中CD138＋浆细胞的表达频率，间接ELISA法检测血清IgG型抗乙酰胆碱受体（ AChR）抗体滴度。分析OMG组和GMG组CD19＋B细胞中FOXP1 mRNA的表达水平与QMG评分、CD138＋浆细胞频率、抗AChR抗体滴度的相关性。结果与健康对照组相比，OMG组和GMG组外周血CD19＋B细胞中FOXP1 mRNA表达水平均降低，抗AChR抗体滴度均增加，差异有统计学意义（P＜0．01），且GMG组变化较OMG组更为显著（P＜0．01）。 OMG组和GMG组外周血CD19＋B细胞中FOXP1 mRNA的表达水平与QMG评分、CD138＋浆细胞频率、抗AChR滴度均呈显著负相关。结论FOXP1在MG患者B细胞中表达减少，与临床严重程度及浆细胞频率负相关，提示FOXP1可能在B细胞向浆细胞分化中发挥负调控作用。

氧化应激通过激活Cdk5抑制FOXO1的神经元损伤及其机制

目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。

ICE方案联合利妥昔单抗对难治性弥漫大B细胞淋巴瘤FOXP1与Livin表达影响研究

目的:探讨ICE方案联合利妥昔单抗对难治性弥漫大B细胞淋巴瘤FOXP1与Livin表达的影响。方法:选取难治性弥漫大B细胞淋巴瘤患者78例,按照治疗方案不同分为对照组和研究组,各39例。对照组采用ICE方案治疗,研究组采用ICE方案联合利妥昔单抗治疗,每21天为1个周期,两组共治疗4个疗程,治疗前后取肿瘤组织切片采用免疫组织化学Envision法检测FOXP1与Livin表达水平,对比两组间临床疗效,同时进行随访,观察和记录生存状况以及不良反应情况。结果对照组治疗有效率71.80%低于研究组89.74%(P<0.05);与治疗前比较,研究组治疗后FOXP1表达阳性率降低(P<0.05),与对照组比较,研究组治疗后FOXP1表达阳性率较低(P<0.05);与治疗前比较,研究组治疗后Livin表达阳性率降低(P<0.05),与对照组比较,研究组治疗后Livin表达阳性率较低(P<0.05);研究组随访第2年、3年生存率(74.36%、66.67%)高于对照组(61.54%、48.72%),有统计学差异(P<0.05);两组间不良反应发生率对比,统计学无差异(P>0.05)。结论:ICE方案联合利妥昔单抗对难治性弥漫大B细胞淋巴瘤疗效确切,降低FOXP1与Livin表达,提高生存率,安全性高。

红景天苷调控FoxO1/β-catenin通路对2型糖尿病骨质疏松大鼠的保护作用研究

目的探讨红景天苷(SDS)对2型糖尿病骨质疏松(DOP)大鼠的保护作用及叉头框转录因子O亚族1(Fox O1)/β-连环蛋白(β-catenin)通路的影响。方法高糖高脂饲养8周,8周后腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ),第10周无菌条件下去除卵巢构建DOP大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、SDS组、Fox O1激动剂组,每组8只;正常组8只大鼠常规饲料正常饲养相同时间。造模成功后第2天予SDS组灌胃36 mg/(kg·d) SDS,Fox O1激动剂组灌胃40 mg/(kg·d)白藜芦醇(Res),连续11周。血糖仪检测空腹血糖水平;苏木精-伊红(HE)检测大鼠股骨组织形态;双能X射线吸收法测定股骨组织骨密度情况;活性氧(ROS)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒检测血清中ROS、SOD、MDA、GSH-Px水平;蛋白免疫印迹检测股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平。结果建模后给药前,与正常组相比,模型组、SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平升高(P<0.05)。给药后,模型组骨小梁出现明显断裂、破坏严重、数量减少;SDS组、Fox O1激动剂组骨小梁明显断裂,但空隙间隔有所缓解,数量有所增加。与正常组相比,模型组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平升高(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组相比,SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平降低(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05)。结论SDS可激活Fox O1/β-catenin通路,增强抗氧化应激作用,实现对DOP大鼠的保护。

乌头汤对骨关节炎软骨细胞中基质金属蛋白酶13和肿瘤坏死因子-α表达的影响机制研究

目的:探讨乌头汤对骨关节炎(OA)软骨细胞中基质金属蛋白酶13(MMP-13)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,以及其对沉默信息转录调控因子1(Silent Information Regulator 1,SIRT1)/转录因子叉头框蛋白O1(Forkhead Box Transcription Factor O1,FOXO1)信号的调控机制。方法:以脂多糖模拟炎性微环境构建骨关节炎软骨细胞模型;以SIRT1信号特异性抑制剂EX527做功能挽救实验,细胞实验分为正常对照组、脂多糖组、乌头汤低剂量组、乌头汤高剂量组、抑制剂组;钙黄绿素-AM(Calcein-AM)/碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色检测各组细胞的生长活性;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,免疫荧光检测各组细胞中TNF-α和MMP-13的表达;免疫组化检测各组细胞中蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)的表达;Western Blot法检测细胞和软骨组织中SIRT1、乙酰化叉头转录因子1(Ac-FOXO1)、B淋巴细胞瘤-2(B Cell Lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl2-associated X Protein,Bax)的表达。结果:在骨关节炎细胞模型中,细胞的生长活性明显降低,凋亡率明显升高,TNF-α和MMP-13以及Ac-FOXO1和Bax的表达明显升高,Aggrecan和CollagenⅡ、SIRT1和Bcl-2的表达明显降低,乌头汤低、高剂量能明显阻滞这些参数的恶化,发挥保护软骨细胞的作用,而EX527可部分逆转乌头汤的保护作用,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:乌头汤能明显下调TNF-α和MMP-13的表达,抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡,这可能与激活SIRT1信号、抑制FOXO1的乙酰化有关。

抑郁症患者血清FOXO1 IL-9表达及其与疾病严重程度的关系

目的探讨转录因子叉头框蛋白O1(FOXO1)、白细胞介素9(IL-9)在抑郁症患者血清中的表达情况及其与抑郁严重程度的关系。方法选取2020年6月至2021年6月于青海省第三人民医院精神科就诊并确诊为抑郁症的患者145例为观察组,根据汉密尔顿抑郁症评定量表(HAMD)评定患者病情,并据此分为轻度组(45例)、中度组(61例)、重度组(39例),同期选取110例健康体检人群为对照组。收集观察组及对照组一般资料并比较;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组血清中FOXO1、IL-9的表达水平;Pearson法分析抑郁症患者血清FOXO1、IL-9表达水平的相关性及二者与HAMD评分的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析抑郁症患者血清FOXO1、IL-9水平诊断抑郁症的价值。结果抑郁症患者血清中FOXO1、IL-9表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度组、中度组患者血清中FOXO1和IL-9表达水平均高于轻度组,且重度组上述指标均高于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。抑郁症患者血清中FOXO1、IL-9表达水平与HAMD评分呈明显正相关(r=0.546、0.464,P均<0.05),FOXO1与IL-9表达水平呈正相关(r=0.353,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清FOXO1、IL-9水平诊断抑郁症的曲线下面积(AUC)分别为0.877、0.714,灵敏度分别为87.00%、70.00%,特异度分别为81.40%、70.93%,二者联合诊断抑郁症的AUC为0.913,高于单一指标检测,敏感度为69.00%,特异度为95.35%。结论FOXO1和IL-9在抑郁症患者血清中均呈高水平,二者表达水平随着抑郁程度的加重逐渐增加,且二者联合检测可能作为诊断抑郁症的潜在血清标志物。

高原环境对大鼠肝脏糖异生的影响

目的研究海拔4300 m高原环境对大鼠肝脏糖异生的影响及机制。方法健康成年大鼠36只,随机分为平原对照组(C组)、高原暴露1、3、7、15、30 d组(分别为H1、H3、H7、H15、H30组)。应用RT-PCR方法测定肝组织中葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、转录因子叉头框蛋白O1(Fox O1)的mRNA表达水平以及应用Western Blot法检测其蛋白表达水平,应用分光光度法测定肝糖原含量,使用自动生化分析仪检测血糖水平。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用Tukey检验。结果与C组比较,(1)H1、H3和H7组肝组织中G6Pase的表达水平以及肝糖原含量显著增高(P值均<0.05);(2)Fox O1的表达水平在H3、H7、H15及H30组中明显降低(P值均<0.05);(3)各高原组血糖水平无明显变化。结论高原暴露急性期肝脏糖异生及糖原合成活跃,可能是高原习服的机制之一;腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和Fox O1对高原暴露大鼠肝脏糖异生具有调节作用;糖原含量增加可能抑制了AMPK的活性。

MicroRNA-26b靶向FOXO1调控人颗粒细胞KGN凋亡的研究

目的探讨MicroRNA-26b(miR-26b)和转录因子叉头框蛋白O1(FOXO1)对人颗粒细胞KGN凋亡的影响,并初步探讨其潜在的作用机制。方法将人颗粒细胞KGN作为研究对象,分为miR-26b过表达组及过表达对照组、miR-26b抑制剂组及抑制剂对照组、FOXO1特异性干扰RNA组(FOXO1-siRNA组)及FOXO1特异性干扰RNA对照组(FOXO1-siRNA NC组)、miR-26b抑制剂和FOXO1-siRNA共转染组,Real-time PCR检测miR-26b转染率、FOXO1转染率,双荧光素酶报告基因检测miR-26b与FOXO13'UTR的靶向关系,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测FOXO1、胰岛素生长因子1受体(IGF-1R)、胰岛素受体底物1(IRSl)、胰岛素受体底物2(IRS2)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的蛋白表达水平。结果双荧光素酶基因检测报告证实miR-26b与FOXO1存在靶向关系。流式细胞术显示:miR-26b过表达组早期凋亡率为[(4.58±0.59)%],高于过表达对照组[(2.78±0.43)%]和miR-26b抑制剂组[(3.41±0.39)%](P均<0.05);miR-26b抑制剂组与抑制剂对照组差异无统计学意义(P>0.05);FOXO1-siRNA组颗粒细胞KGN细胞早期凋亡率升高,且高于miR-26b过表达组(P均<0.01);miR-26b抑制剂和FOXO1-siRNA共转染组的凋亡率高于miR-26b抑制剂组(P<0.05)。蛋白免疫印迹实验显示:与FOXO1-siRNA NC组相比,FOXO1-siRNA组中FOXO1和PI3K蛋白表达水平下降,IGF-1R、IRS1、IRS2蛋白表达水平增高(P<0.05)。结论miR-26b通过靶向FOXO1调控人颗粒细胞KGN的凋亡,可能与IGF-lR/PI3K信号通路相关。

老年慢性心衰患者血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平与抑郁程度的关系

目的探讨老年慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者血清转录因子叉头框蛋白O1(Forkhead box protein O1,FOXO1)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)水平与其抑郁程度的关系。方法选取本院2020年1月~2022年1月收治的60例老年CHF合并抑郁患者纳为合并组,另选取40例老年CHF患者纳为未合并组。检测并比较两组血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平,同时比较不同抑郁程度老年CHF患者基线资料[性别、年龄、美国纽约心脏病学会(New York Heart Associatio n,NYHA)心功能分级]及血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平。最后通过Spearman秩相关分析老年CHF患者血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平与抑郁程度的相关性。结果合并组血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平比较:轻度组<中度组<重度组,差异有统计学意义(P<0.05);血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平与老年CHF患者抑郁程度呈正相关,且P<0.05。结论血清FOXO1、IL-6、CRP、Hcy水平与老年CHF患者抑郁程度呈正相关,临床医师应对上述指标密切监测,以预测抑郁发生与发展。

黄芪甲苷调节PI3K/Akt/FoxO1通路抑制糖尿病大鼠肝糖异生

目的:探讨黄芪甲苷对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝损伤保护潜在机制及肝组织磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1),磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶(PEPCK)和葡萄糖6-磷酸酶(G6Pase)蛋白表达的影响。方法:6周高糖高脂饮食后,链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射(0.035 g·kg^-1)建立T2DM大鼠模型,随机分为正常组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组及二甲双胍组。黄芪甲苷低、中、高剂量组灌胃黄芪甲苷0.02,0.04,0.08 g·kg^-1·d^-1,二甲双胍组灌胃二甲双胍0.2 g·kg^-1·d^-1;给药8周后,于末次灌胃24 h禁食不禁水后处死,测血清肝生化指标,肝脏指数等;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理形态学变化;马松(Masson)染色观察纤维化程度;过碘酸希夫(PAS)染色反应观察细胞内糖原等变化;免疫组化及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肝中PI3K/Akt/FoxO1信号蛋白及PEPCK,G6Pase蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组肝脏指数显著升高(P<0.01),肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)的含量显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著降低(P<0.01),大鼠体质量显著减轻(P<0.01),PI3K/Akt/Fox O1信号减弱(P<0.01),PEPCK,G6Pase蛋白表达水平显著增强(P<0.01);与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量组及二甲双胍组肝功能指标ALT,AST,TC,TG的含量明显降低(P<0.05,P<0.01),大鼠体质量明显增加(P<0.05,P<0.01),肝组织Fox O1,PEPCK及G6Pase蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Fox O1的磷酸化水平明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪甲苷可能通过调节PI3K/Akt/Fox O1信号通路抑制高脂高糖加小剂量STZ诱导T2DM肝糖异生,从而起到延缓T2DM大鼠肝脏损伤作用。

探讨特异性siRNA靶向FOXO1对NIT-1胰岛β细胞凋亡的影响

目的观察小干扰RNA对NIT-1胰岛β细胞增殖和凋亡的影响。方法通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测其对FoxO1的抑制情况,MTT法检测细胞增殖和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡以及对胰岛素分泌的影响。结果在不同糖浓度条件下,各组细胞凋亡率均与对照组比较具有明显差异(P<0.05)。结论FOXO1基因是NIT-1细胞存活的负性调节基因,但FOXO1的表达可能与葡萄糖浓度变化不明显。

miR-141-3p靶向调控FOXA1对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖凋亡的影响

目的探讨miR-141-3p对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制。方法以AECⅡ细胞为研究对象,分别将miR-NC、miR-141-3p mimics、si-NC、si-FOXA1、miR-141-3p mimics+pcDNA3.1、miR-141-3p mimics+pcDNA3.1-FOXA1转染至AECⅡ细胞,分别记作第1,2,3,4,5,6转染组,同时将且未经处理的细胞作为对照组、肺炎链球菌培养细胞作为模型组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-141-3p的表达水平;蛋白质印迹法检测FOXA1的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡。结果对照组、模型组、第1,2,3,4,5,6转染组2 h细胞存活率分别为(100.00±5.18)%,(47.19±3.14)%,(47.28±3.15)%,(86.73±4.63)%,(47.38±3.25)%,(79.93±4.23)%,(86.75±4.51)%,(57.90±3.34)%;细胞凋亡率分别为(8.11±1.12)%,(26.23±1.83)%,(26.23±2.83)%,(10.37±1.51)%,(26.23±2.83)%,(13.36±1.57)%,(10.35±1.57)%,(18.91±1.86)%。对照组与模型组比较,第1转染组与第2转染组比较,第3转染组与第4转染组比较,第5转染组与第6转染组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-141-3p过表达可通过抑制FOXA1表达而抑制肺炎链球菌诱导的肺上皮细胞凋亡,促进细胞增殖。