雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框F2表达的影响

目的探讨雌激素对宫腔粘连纤维化进程及叉头框(Fox)F2表达的影响。方法采用0.2%Ⅰ型胶原酶消化-筛网过滤-差时贴壁分离法获取原代人子宫内膜基质细胞(HESCs)并进行鉴定。采用10ng/ml转化生长因子β_1(TGF-β_1)作用于HESCs 48h建立宫腔粘连细胞模型。以0、10–6、10–8、10–10、10–12mol/L雌二醇(E2)作用于模型组48h,采用qPCR及Western blotting检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)及FoxF2的mRNA和蛋白表达。结果免疫细胞化学法检测显示HESCs波形蛋白阳性,角蛋白18阴性。模型组α-SMA、COLⅠ、FoxF2的mRNA和蛋白表达均高于对照组(P<0.05),模型构建成功。qPCR检测结果显示,与模型组相比,10^(–6)、10^(–8)、10^(–10)mol/L E_2组α-SMA、CO LⅠ、FoxF2的mRNA表达除10^(–10)mol/L E_2组COLⅠ表达无差异外,其余各组表达均下降(P<0.05),10^(–12)mol/L E2_组α-SMA及COLⅠmRNA表达上升,但差异无统计学意义(P>0.05),FoxF2 mRNA表达下降(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与模型组相比,10^(–6)、10^(–8)、10^(–10)mol/L E_2组α-SMA、COLⅠ及FoxF2蛋白表达下降(P<0.05),10^(–12)mol/L E_2组α-SMA蛋白表达上升,但差异无统计学意义(P>0.05),COLⅠ及FoxF2蛋白表达下降(P<0.05)。结论 FoxF2在宫腔粘连中的表达增加。雌激素可在一定范围内逆转宫腔粘连的纤维化进程,并抑制FoxF2的表达。

叉头框F2在宫腔粘连中的表达及意义

目的:建立稳定的宫腔粘连细胞模型,检测叉头框F2(Fox F2)表达。方法:原代培养人子宫内膜基质细胞(HESCs),免疫荧光法进行细胞鉴定。用0、2.5、5和10ng/ml转化生长因子β1(TGF-β1)作用于HESCs 48h,10ng/ml TGF-β1作用于HESCs 12、24、48h和72h,PCR及Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原I(COLI)及Fox F2 m RNA和蛋白表达。结果:与0ng/ml组比较,2.5、5ng/ml和10ng/ml组α-SMA、COLI及Fox F2的m RNA和蛋白表达均逐渐增加。随着10ng/ml TGF-β1作用时间的延长,与12h组相比,24、48和72h组α-SMA、COLI和Fox F2的m RNA和蛋白表达逐渐增加。结论:TGF-β1可诱导HESCs发生纤维化改变,建立宫腔粘连细胞模型。随着TGF-β1作用时间的延长,作用浓度的增加,Fox F2在宫腔粘连中表达增加。

慢病毒介导叉头框转录因子F2过表达抑制子宫内膜癌RL95-2细胞增殖与迁移

目的:探讨慢病毒介导叉头框转录因子F2(FoxF2)过表达对子宫内膜癌RL95-2细胞增殖与迁移的影响。方法:将体外培养的RL95-2细胞随机分为3组:Control、Lv-NC组和Lv-expFoxF2组。分别采用FoxF2过表达的慢病毒颗粒(Lv-expFoxF2组)和空载体对照慢病毒颗粒(Lv-NC组)感染RL95-2细胞,检测各组细胞FoxF2的mRNA和蛋白表达水平和各组细胞的增殖活性、细胞周期及体外迁移能力。结果:与Control组比较,Lv-expFoxF2组RL95-2细胞中FoxF2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.001)。与Control组比较,Lv-expFoxF2组的细胞存活率显著降低(P<0.05),G_0/G_1期细胞百分比明显增加,S期细胞百分比明显减少(P<0.05),体外迁移细胞数显著降低(P<0.05)。结论:慢病毒介导的FoxF2过表达可抑制子宫内膜癌RL95-2细胞的增殖和迁移,诱导细胞发生G_0/G_1期阻滞。

叉头框转录因子F2小发夹RNA对人眼小梁网细胞外基质蛋白表达的抑制作用

目的探讨叉头框转录因子F2(FoxF2)对小梁网细胞外基质表达的调控作用。方法将培养人眼小梁网细胞(HTMCs)分为Scramble对照组和FoxF2小发夹RNA(shRNA)组,构建FoxF2重组干扰载体FoxF2 shRNA,应用FoxF2 shRNA慢病毒颗粒感染HTMCs,采用Western blot法检测FoxF2 shRNA的敲低效果及细胞外基质(ECM)蛋白的表达变化,利用Transwell计数实验分析HTMCs的迁移能力。结果体外培养的HTMCs呈长梭形,生长状态良好,形态符合HTMCs形态学特征。FoxF2 shRNA组FoxF2蛋白相对表达量为0.72±0.02,显著低于Scramble对照组的1.27±0.05,差异有统计学意义(t=16.68,P<0.01)。FoxF2shRNA组纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达量分别为0.43±0.03、0.53±0.08和0.86±0.15,显著低于Scramble对照组的0.87±0.04、1.66±0.06和1.73±0.13,差异均有统计学意义(t=15.08、18.81、7.50,均P<0.01)。FoxF2 shRNA组HTMCs的迁移数量为117.30±11.41,显著低于Scramble对照组的251.00±10.37,差异有统计学意义(t=8.72,P<0.01)。结论成功制备可特异性敲低HTMCs内源性FoxF2表达的FoxF2 shRNA病毒,并证实FoxF2干扰对HTMCs中ECM的表达及细胞迁移具有抑制作用。

胶质瘤中叉头框蛋白N2与F2的表达及意义

目的 观察叉头框蛋白N2(FOXN2)与叉头框蛋白F2(FOXF2)在正常脑组织和各级别胶质瘤中的表达情况,探讨两者与胶质瘤级别的关系,推测其在胶质瘤发生发展中的作用,为胶质瘤的治疗寻找可能的药物治疗靶点。方法 从皖南医学院弋矶山医院病理科调取36例2016年1月~2020年12月脑胶质瘤患者手术切除的胶质瘤组织标本,双盲法进行免疫组织化学和免疫荧光染色检测FOXN2、FOXF2的表达情况;采用SPSS 18.0统计学软件进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。再对2020年1月~2021年1月皖南医学院弋矶山医院神经外科手术中获取的新鲜正常脑组织、低级别胶质瘤组织和高级别胶质瘤组织进行Western blotting、Real-time PCR实验(正常脑组织均来自外伤手术患者)。结果 免疫组织化学与免疫荧光结果表明,胶质瘤级别越高FOXN2与FOXF2的表达越低(P<0.05);Western blotting实验显示,正常脑组织及低级别胶质瘤中FOXN2和FOXF2表达都高于高级别胶质瘤组(P<0.05);Real-time PCR结果显示,正常脑组织中FOXN2和FOXF2的表达同样高于高级别胶质瘤组(P<0.01)。结论 FOXN2和FOXF2在正常脑组织中有表达,在胶质瘤中低表达且呈级别依赖性,提示FOXN2和FOXF2与胶质瘤的级别及不良预后有关,增强FOXN2和FOXF2的表达有望成为胶质瘤治疗的靶点。

滋肾化瘀汤在宫腔粘连纤维化进程中的疗效及对FoxF2、TGF-β1表达的影响

目的探讨滋肾化瘀汤应用在子宫宫腔手术后宫腔粘连(IUA)的临床疗效以及对转录调节因子叉头框F2(FoxF2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法选择2018年1月至2019年3月行宫腔操作的患者68例,根据住院号随机分为试验组和对照组,每组34例,试验组采用滋肾化瘀汤预防宫腔粘连,对照组采用雌激素预防宫腔粘连。随访2组患者治疗前后中医证候改善情况;治疗后月经恢复情况及子宫内膜厚度;比较宫腔镜查看粘连分度、例数及总发生率;比较2组患者血清FoxF2、TGF-β1的阳性例数表达状况。结果治疗后试验组患者中医证候改善、月经恢复、子宫内膜厚度、宫腔再发粘连与对照组差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2组患者的FoxF2、TGF-β1阳性例数明显低于治疗前,且试验组例数明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论滋肾化瘀汤在预防宫腔术后腔内粘连、促进子宫内膜功能恢复、抑制FoxF2、TGF-β1的表达等方面具有明显优势,值得临床应用。

siRNA干扰FOXF2对人宫颈癌SiHa细胞体外转移的影响

目的研究siRNA干扰叉头框转录因子F2(FOXF2)对人宫颈癌SiHa细胞体外转移能力的影响及其作用机制。方法采用RT-PCR、Western blot分别检测siRNA-FOXF2转染前后,SiHa细胞中FOXF2 mRNA、蛋白的表达变化;同时用划痕试验和Transwell侵袭试验分别检测siRNA-FOXF2转染前后细胞的迁移和侵袭能力,CCK8检测siRNA-FOXF2转染前后细胞的增殖能力。结果 SiHa细胞内FOXF2敲除后,RT-PCR、WB检测显示siRNAFOXF2转染组FOXF2的蛋白、mRNA均明显下降;划痕试验和Transwell侵袭试验显示细胞侵袭、迁移能力增强;CCK8检测显示siRNA-FOXF2转染组促进细胞增殖能力(P<0.01)。结论 siRNA干扰FOXF2促进SiHa细胞的体外转移能力及细胞增殖能力,进而促进宫颈癌的发生发展。

叉头框转录因子F2作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白信号通路候选靶基因的研究

目的筛选叉头框转录因子F2(FOXF2)作用于结肠癌细胞中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的候选靶基因并分析其生物学功能。方法设置干扰FOXF2基因的最佳慢病毒转染获得的HT29细胞为沉默组, 空载慢病毒转染获得的HT29细胞为对照组。对照组和沉默组各取三个样本行转录组测序分析;富集到Wnt/β-catenin信号通路, 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)验证该通路的候选靶基因。多组间比较采用单因素方差分析, 两组间比较采用t检验。结果 3组干扰慢病毒沉默HT29细胞中FOXF2的表达效果显著高于空载慢病毒[FOXF2基因信使RNA(mRNA)表达分别为0.29±0.02、0.28±0.05、0.26±0.01比1.00±0.13, FOXF2基因蛋白表达分别为0.20±0.02、0.16±0.01、0.12±0.01比1.00±0.01], 差异有统计学意义(F=75.948、3 549.333, 均P<0.01), 第3组慢病毒沉默FOXF2效果最佳。HT29细胞沉默FOXF2后有389个差异表达基因(DEGs);基因本体论(GO)功能富集分析显示, DEGs显著富集在免疫效应过程、细胞外区域、腺苷酸转移酶活性等功能集团;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示, DEGs主要涉及EB病毒感染、NOD样受体信号通路及Wnt信号通路等;Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BAMBI)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体5(LGR5)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白耦联受体6(LGR6)和MSTRG.14182(新基因)主要涉及正向调控Wnt信号通路、细胞增殖和迁移等生物学过程。沉默组中BAMBI、LGR5、LGR6 mRNA和蛋白表达显著高于对照组[mRNA表达分别为1.86±0.21比1.00±0.20、1.95±0.11比1.00±0.09、2.06±0.10比1.00±0.03, 蛋白表达分别为1.88±0.02比1.00±0.06、2.08±0.12比1.00±0.04、1.80±0.03比1.00±0.08], 差异有统计学意义(t=-5.066、-11.646、-17.584、-24.100、-14.820、-16.710, 均P<0.01)。结论沉默FOXF2基因的HT29细胞存在较多的差异表达基因, Wnt/β-catenin信号通路的候选靶基因可能参与正向调控Wnt信号通路、细胞增殖及迁移等生物学过程。

宫腔粘连患者子宫内膜厚度及相关因子变化在宫腔镜手术联合激素治疗中的临床意义

目的探讨宫腔粘连患者宫腔镜手术联合激素治疗后子宫内膜厚度和相关因子表达情况变化。方法选取2020年1月至12月湖南省株洲市妇幼保健院收治的100例中重度宫腔粘连患者作为研究对象。所有患者在宫腔镜下粘连分离术后给予人工周期治疗。连续治疗3个月。统计治疗前、治疗3个月后经量改善情况及子宫内膜形态变化,统计治疗前、治疗3个月后血清及宫腔粘连组织周围的内膜中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(HAb18G)、转录调节因子叉头框F2(FoxF2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、雌激素受体(ER)、结缔组织生长因子(CTGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平变化。结果与治疗前比较,治疗3个月后,患者月经量、子宫内膜腺体数增多,子宫内膜厚度增厚,子宫内膜纤维化面积比、血清及宫腔粘连组织周围的内膜中HAb18G、FoxF2、TGF-β1、CTGF、VEGF及IGF-1表达降低,ER升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论宫腔粘连患者子宫内膜状态及月经量异常,伴有子宫内膜纤维化的发生,而宫腔粘连的发生发展可能与HAb18G、FoxF2、ER、TGF-β1、CTGF、VEGF及IGF-1的异常表达有关,临床可据此对宫腔粘连进行早期预测及预防,并评估其临床治疗效果。

过表达FOXF2对人宫颈癌SiHa细胞迁移及增殖影响机制探讨

目的探讨过表达叉头框转录因子F2(FOXF2)调控HPV早期基因区6(early region,E6)和早期基因区7(early region,E7)抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移、增殖的影响及其作用机制。方法构建慢病毒转染SiHa细胞,实验分为对照组和实验组,qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达慢病毒对照组及实验组中FOXF2、E6、E7、p53、pRB/RB、E2F1mRNA和(或)蛋白表达变化;划痕试验和平板克隆形成试验分别检测细胞迁移和增殖能力。SPSS 20.0对数据进行统计学分析。结果 SiHa细胞内FOXF2过表达后,过表达慢病毒实验组FOXF2mRNA表达水平为20.07±0.63,高于对照组的1.05±0.08,差异有统计学意义,F=272.883,P<0.001;实验组p53mRNA表达水平为1.46±0.07,高于对照组的0.95±0.16,差异有统计学意义,F=25.775,P=0.007;实验组E2F1mRNA表达水平为0.77±0.06,低于对照组的1.00±0.02,差异有统计学意义,F=39.74,P=0.003;实验组RB mRNA表达水平为1.22±0.09,高于对照组的1.00±0.04,差异有统计学意义,F=14.738,P=0.018。过表达慢病毒实验组FOXF2蛋白表达水平为0.41±0.05,高于对照组的0.21±0.06,差异有统计学意义,F=34.192,P<0.001;RB蛋白表达水平为0.68±0.06,高于对照组的0.40±0.03,差异有统计学意义,F=71.468,P=0.001;pRB蛋白表达水平为0.45±0.06,低于对照组的0.75±0.09,差异有统计学意义,F=25.480,P=0.007;E2F1蛋白表达水平为0.32±0.03,低于对照组的0.57±0.06,差异有统计学意义,F=43.872,P=0.003;p53蛋白表达水平为0.22±0.03,高于与对照组的0.11±0.01,差异有统计学意义,F=36.327,P=0.004;E6蛋白表达水平为0.21±0.03,低于对照组的0.40±0.09,差异有统计学意义,F=12.36,P=0.025;E7蛋白表达水平为0.21±0.03,低于对照组的0.36±0.08,差异有统计学意义,F=9.093,P=0.039。实验组细胞迁移率为(0.36±0.06)%,低于对照组的(0.74±0.06)%,差异有统计学意义,F=60.945,P=0.001。实验组细胞克隆形成率为(0.34±0.04)%,低于对照组的(0.67±0.07)%,差异有统计学意义,F=49.751,P=0.002。结论 FOXF2通过调控HPV E6/E7而抑制SiHa细胞的体外迁移及细胞增殖能力,促进p53的表达,抑制pRB及E2F1表达。FOXF2可能通过下调HPV E6/E7抑制宫颈癌的发生发展。