二仙汤对免疫性卵巢早衰模型小鼠FoxP3基因表达的影响

目的:观察二仙汤对免疫性POF模型小鼠FoxP3基因的影响。方法:用小鼠透明带ZP3第330～342个氨基酸序列(NSSSSQFQIHGPR)为免疫原建立免疫性POF小鼠动物模型,并用二仙汤干预,用RT-PCR观察小鼠卵巢上FoxP3基因的表达。结果:模型组卵巢中FoxP3的基因水平下降;各用药组FoxP3的基因表达均增强,中西药无明显差异。结论:二仙汤能使FoxP3基因蛋白表达增强。

IL-17和Foxp3在小鼠克罗恩病模型中的表达及其意义

目的观察小鼠克罗恩病模型外周血单核细胞及结肠组织中白细胞介素（IL）17、叉头状/翅状螺旋蛋白3（Foxp3）的表达,探讨其在2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的克罗恩病小鼠急性炎症中的作用。方法共40只6~8周龄雌性Bal/c小鼠,采用随机数字表法随机分为两组,20只以TNBS/乙醇溶液灌肠诱导克罗恩病模型（实验组）,另外20只小鼠以同等浓度的乙醇氯化钠灌肠（正常对照组）。干预1周后行疾病活动指数（DAI）,结肠病理组织学评分（TDI）和结肠大体形态损伤指数（CMDI）评价,以实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测小鼠外周血单核细胞IL-17mRNA、Foxp3 mRNA的表达,采用免疫印迹法检测小鼠结肠组织IL-17蛋白、Foxp3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,实验组的DAI、TDI、CMDI显著升高[DAI（5.41±0.48）比（0.85±0.07）,TDI（5.63±0.74）比（0.74±0.08）,CMDI（6.88±0.84）比（0.91±0.06）,P〈0.01],外周血单核细胞的IL-17 mRNA显著升高[（1.118±0.145）比（1.000±0.000）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈正相关（r=0.875,0.935,0.825,P〈0.01）,Foxp3 mRNA显著降低[（0.797±0.271）比（1.000±0.000）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈负相关（r=-0.885,-0.734,r-0.812,P〈0.01）,结肠组织IL-17蛋白显著上升[（0.631±0.331）比（0.272±0.112）,P〈0.01],与其DAI、TDI及CMDI呈正相关（r=0.765,0.778,0.734,P〈0.01）,Foxp3蛋白显著降低[（0.274±0.112）比（0.592±0212）,P〈0.01],与DAI、TDI及CMDI呈负相关（r=-0.889,-0.809,-0.851,P〈0.01）。结论在TNBS诱导的结肠炎中,Th17/Treg轴的免疫偏倚是导致克罗恩病发生和发展的重要因素。

豚鼠肺气肿模型肺组织Foxp_3、RORγt及IL-17的表达及意义

目的采用弹性蛋白主动免疫方法制造豚鼠肺气肿模型,与传统熏烟制造模型方法比较,探究弹性蛋白抗体对肺气肿的影响;探讨豚鼠肺气肿模型肺组织中叉头状/翅状螺旋蛋白3(Foxp3)、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素17(IL-17)的表达和意义。方法分别采用熏烟、弹性蛋白主动免疫的方法制造豚鼠肺气肿模型;测量各组模型中肺泡平均半径;免疫组化技术检测肺组织Foxp3、RORγt和IL-17。结果熏烟组及主动免疫组平均肺泡半径明显长于对照组(P<0.05)。熏烟组及主动免疫组较对照组肺组织中Foxp3阳性细胞数减少,RORγt阳性细胞增多,Foxp3/RORγt比值表达失衡,IL-17表达水平增强(P<0.05),熏烟组与主动免疫组比较差异无统计学意义。相关性分析提示豚鼠肺组织Foxp3/RORγt阳性细胞比值与IL-17及平均肺泡半径呈负相关(P<0.05)。结论弹性蛋白主动免疫可以导致豚鼠肺气肿发生;熏烟组及主动免疫组豚鼠肺气肿模型肺组织中存在Foxp3/RORγt表达失衡,这种失衡可能是免疫调节细胞CD4+T细胞及效应细胞Th17细胞表达失调的重要机制,从而可能参与慢性阻塞性肺疾病(COPD)自身免疫调节,对COPD的发生发展有一定的促进作用。

乳腺癌患者外周血CD_4^+CD_(25)^+细胞胞浆FoxP_3与胞膜CD_(127)的关系研究

目的:探讨人体外周血CD4+CD25+细胞胞浆FoxP3与胞膜CD127的关系,为用CD4+CD25+CD127-作为界定调节性T细胞(Treg)的标志提供依据。方法:利用三色流式细胞计数分别测定32份外周血CD4+CD25+T细胞和CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127-细胞和CD4+CD25+FoxP3+细胞百分率,对两者作相关性研究分析。结果:人体外周血CD4+CD25+T细胞和CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127-与CD4+CD25+FoxP3+细胞的百分率均呈正相关(r值分别为0.962和0.803,P<0.01),CD4+CD25+CD127-的检测比CD4+CD25+FoxP3+检测更简便快捷。结论:人体外周血CD4+CD25+T细胞和血CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127-与CD4+CD25+FoxP3+细胞百分率呈正相关,CD4+CD25+CD127-可以作为界定Treg细胞的标志及其检测。

IGF-1介导TDAG51对抑郁模型大鼠海马PI3K/Akt/FoxO3a信号通路的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导T细胞死亡相关蛋白51(TDAG51)对抑郁模型大鼠海马磷脂酰肌苷3激酶/蛋白激酶B/叉头状转录因子O亚族3a(PI3K/Akt/FoxO3a)信号通路的影响。方法:将50只大鼠按分层随机法分为空白对照组、CUMS组、CUMS+IGF-1组、CUMS+LV-TDAG51-shRNA组、CUMS+IGF-1+LV-TDAG51-shRNA组,每组10只。慢性不可预测轻度应激(CUMS)诱导产生抑郁症大鼠模型。CUMS+IGF-1组大鼠注射5 mL IGF-1(5 mg/mL)和300μL LV-NC慢病毒;CUMS+LV-TDAG51-shRNA组大鼠注射5 mL生理盐水和300μL LV-TDAG51-shRNA慢病毒;CUMS+IGF-1+LVTDAG51-shRNA组大鼠注射5 mL IGF-1(5 mg/mL)和LV-TDAG51-shRNA慢病毒。空白对照组及CUMS组大鼠注射5 mL生理盐水和300μL LV-NC慢病毒。检测大鼠体重和蔗糖消耗量的变化;旷场实验检测大鼠自主行为;实时荧光定量PCR检测大鼠海马TDAG51、PI3K/Akt/FoxO3a信号通路相关因子的mRNA表达;Western blot检测TDAG51蛋白表达及PI3K/Akt/FoxO3a信号通路相关因子的磷酸化水平。结果:与空白对照组相比,CUMS组大鼠体重、蔗糖消耗量、水平交叉数、垂直时间和PI3K、Akt、FoxO3amRNA表达及磷酸化水平显著降低(P<0.05);与CUMS组相比,CUMS+IGF-1组和CUMS+IGF-1+LVTDAG51-shRNA组大鼠海马TDAG51 mRNA和蛋白表达、PI3K、Akt、FoxO3a mRNA表达和磷酸化水平显著升高(P<0.05),体重、蔗糖消耗量、水平交叉数和垂直时间显著升高(P<0.05),CUMS+LV-TDAG51-shRNA组则低于CUMS组;与CUMS+IGF-1组相比,CUMS+IGF-1+LV-TDAG51-shRNA组大鼠海马TDAG51 mRNA和蛋白表达、PI3K、Akt、FoxO3a mRNA表达和磷酸化水平显著降低(P<0.05),体重、蔗糖消耗量、水平交叉数和垂直时间显著降低(P<0.05)。结论:IGF-1可能通过介导TDAG51活化抑郁症模型大鼠海马PI3K/Akt/FoxO3a信号通路,改善抑郁症症状。

子宫内膜异位症病灶内NLRC3和FOXP3的表达及意义

为探讨先天性免疫相关分子核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族胱天酶募集结构域蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 3,NLRC3)和免疫稳态基本转录因子叉头状蛋白3(forkhead box protein 3,FOXP3)在子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)患者中的表达及临床意义。通过免疫组织化学、Western blotting和qRT-PCR方法检测22例Ⅲ期、18例Ⅳ期卵巢异位内膜组织和25例正常子宫内膜组织中NLRC3、FOXP3的表达水平,分析NLRC3、FOXP3表达与EMT临床病理特征的关系及NLRC3、FOXP3表达的相关性。结果显示,与正常子宫内膜组相比,NLRC3表达水平在Ⅲ期、Ⅳ期EMT组均降低,而FOXP3表达水平在Ⅲ期、Ⅳ期EMT组均升高。NLRC3、FOXP3的表达在Ⅲ期、Ⅳ期EMT组中差异无统计学意义。EMT患者中,CA125水平较高的组织中NLRC3表达阳性率更低,而FOXP3^(+)细胞浸润数量更高,差异具有统计学意义(P<0.05),NLRC3表达与FOXP3^(+)细胞浸润数量呈负相关(P<0.05)。NLRC3、FOXP3的表达在不同年龄、病灶大小、痛经程度中差异无统计学意义(P>0.05)。该研究提示,EMT的发病与腹腔微环境免疫失衡有关,通过干预NLRC3、FOXP3的表达靶向治疗EMT失调的免疫微环境是针对EMT新型治疗的潜在途径。

丁苯酞对帕金森病伴抑郁小鼠抑郁行为的影响及对黑质纹状体相关信号通路的调节作用

目的观察丁苯酞对帕金森病伴抑郁小鼠抑郁行为的影响及对黑质纹状体区磷脂酰肌醇⁃3⁃激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头状转录因子O亚族3a(FoxO3a)信号通路关键因子的调节作用,探讨丁苯酞治疗帕金森病抑郁的效果及机制。方法选择C57成年雄性小鼠40只,完全随机分为正常对照组、帕金森病伴抑郁模型组、多巴丝肼治疗组和联合治疗组。正常对照组正常饲养,不给予任何干预。采用腹腔注射1⁃甲基⁃4⁃苯基⁃1,2,3,6⁃四氢吡啶建立帕金森病小鼠模型,采用慢性不可预知温和应激诱导产生帕金森病伴抑郁小鼠模型。多巴丝肼治疗组给予多巴丝肼6.25 mg/kg,1次/d,灌胃7 d;联合治疗组给予多巴丝肼6.25 mg/kg和丁苯酞120 mg/kg,1次/d,灌胃7 d。通过强迫游泳测试、悬尾测试和糖水偏好实验对小鼠的抑郁行为进行评价。蛋白质印迹法检测各组黑质纹状体区PI3K/Akt/FoxO3a信号通路相关磷酸化因子p⁃PI3K、p⁃Akt、p⁃FoxO3a水平。结果帕金森病伴抑郁模型组强迫游泳不动时间及悬尾静止时间长于正常对照组,糖水偏好指数低于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多巴丝肼治疗组及联合治疗组强迫游泳不动时间及悬尾静止时间短于帕金森病伴抑郁模型组,糖水偏好指数高于帕金森病伴抑郁模型组,以联合治疗组更明显,差异均有统计学意义(均P<0.05)。帕金森病伴抑郁模型组p⁃PI3K、p⁃Akt、p⁃FoxO3a表达水平明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多巴丝肼治疗组及联合治疗组p⁃PI3K、p⁃Akt、p⁃FoxO3a表达水平高于帕金森病伴抑郁模型组[(0.54±0.02)、(0.60±0.03)比(0.44±0.01),(0.57±0.01)、(0.66±0.02)比(0.44±0.04),(0.61±0.03)、(0.70±0.03)比(0.45±0.02)],以联合治疗组更明显,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论丁苯酞可通过激活黑质纹状体区PI3K/Akt/FoxO3a信号通路改善帕金森病伴抑郁小鼠的抑郁症状。

艾灸“足三里”对功能性消化不良大鼠Foxp3/ROR-γt失衡的影响

目的探讨艾灸治疗功能性消化不良(FD)的可能作用机制。方法43只大鼠随机选取10只作为空白对照组,剩余33只大鼠进行造模,将造模成功的30只大鼠随机分为模型组、艾灸组、莫沙必利组,每组10只。空白对照组不予任何处置,余组均采用复合因素(夹尾刺激+不规则饮食)干预法造模20日。造模成功后,艾灸组予以艾灸"足三里",每日1次,每次30min;莫沙必利组予以莫沙必利0.45mg/(kg·d)灌胃,两组均干预14天。干预结束后采用ELISA法检测各组大鼠血清血细胞介素17(IL-17)水平,采用HE染色观察各组大鼠十二指肠形态变化,采用Western blot法检测各组大鼠十二指肠叉头状/翅状螺旋蛋白3(Foxp3)、维甲酸相关核孤儿受体-γt(ROR-γt)蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清IL-17水平显著升高(P<0.01);十二指肠黏膜结构较完整,但绒毛部分脱落,排列欠整齐,有炎性细胞浸润;十二指肠Foxp3蛋白表达显著降低(P<0.01),ROR-γt蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组及莫沙必利组大鼠血清IL-17水平均降低(P<0.05);艾灸组及莫沙必利组大鼠十二指肠绒毛排列较模型组整齐,炎症细胞浸润减少,但莫沙必利组大鼠十二指肠绒毛部分绒毛存在破损,脱落;此二组Foxp3蛋白表达升高(P<0.05),ROR-γt蛋白表达降低(P<0.05)。与莫沙必利组比较,艾灸组大鼠血清IL-17水平降低(P<0.05);十二指肠Foxp3及ROR-γt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论艾灸"足三里"能降低FD模型大鼠血清IL-17水平,调节Foxp3/ROR-γt平衡,从而减轻肠道炎症,可能是其治疗FD的作用机制之一。

Foxp3、MCP-1和CCR2在非小细胞肺癌中的表达水平与患者预后的相关性

目的探讨叉头状蛋白p3（Foxp3）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和CC趋化因子受体2（CCR2）在非小细胞肺癌（NSCLC）肿瘤组织中的表达水平与患者预后的相关性。方法使用免疫组织化学法观察128例手术切除的NSCLC标本中Foxp3、MCP-1和CCR2的表达水平，分析其与NSCLC患者临床病理特征、肿瘤转移及预后的关系。结果Foxp3在肿瘤细胞浆中的表达与人组病例的临床病理特征无关。Foxp3在胞核中表达时，其表达阳性率与肿瘤组织病理类型、肿瘤大小、有无淋巴结转移和肿瘤分期有关（P值均〈O．05）。多因素分析提示Foxp3在NSCLC细胞核的表达是关系预后的独立危险因素（HR=3．062，95％CI：1．115～8．407，P=0．030）。MCP-1在NSCLC组织中的表达与患者性别、是否吸烟、肿瘤组织病理类型、肿瘤大小有关（P值均〈O．05）。肺癌患者预后与MCP-1在肿瘤细胞的表达、有无淋巴结转移和肿瘤分期有关（HR=0．486，95％CI：0．207～1．142，P=0．048；HR=2．983，95％CI：1．427～6．235，P=0．004；HR-2．952，95％CI：1．337～6．515，P=0．007），与肺癌患者年龄、性别、是否吸烟、肺癌组织大小、肿瘤组织病理类型和肿瘤细胞分化水平无关。CCR2在肿瘤细胞的表达与肿瘤的分期有关（χ2=7．01，P=0．030），与NSCLC患者的其他临床病理特征和预后无关。结论Foxp3在NSCLC组织中的表达增高与肿瘤的侵袭性有明显相关性。Foxp3和MCP-1的表达增高与NSCLC患者的预后相关。

经血间充质干细胞通过IGF-1信号通路改善小鼠卵巢早衰

目的探讨经血间充质干细胞(MenSCs)移植改善化疗所致卵巢早衰(POF)小鼠卵巢功能的效果和分子机制.方法48只C57BJ雌鼠被随机分成3组:对照组、POF组和干细胞组.环磷酰胺和白消安腹腔注射构建POF小鼠;干细胞组小鼠在化疗药物注射后3 d开始鼠尾静脉注射MenSCs.采用qRT-PCR定量分析卵巢内生长因子受体结合蛋白10(GRB10)的mRNA表达;采用Western blotting定量分析卵巢内GRB10、叉头状转录因子O亚家族蛋白3(FOXO3a)、p-FOXO3a、胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)、p-IGF-1R、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT的蛋白表达.结果对照组、POF组、干细胞组的血清雌二醇浓度分别为(222.29±35.13)、(90.87±28.76)、(193.24±48.74)pg/mL,3组之间差异有统计学意义(F=19.332,P<0.001);POF组低于对照组(P<0.001)和干细胞组(P<0.001).对照组、POF组、干细胞组小鼠超排的成熟卵子数分别为(40.00±10.07)、(9.00±7.42)、(24.60±10.24)个,3组之间差异有统计学意义(F=13.792,P=0.001);对照组(P<0.001)和干细胞组(P=0.021)高于POF组,且对照组高于干细胞组(P=0.023).Western blotting检测对照组、POF组、干细胞组卵巢内GRB10蛋白条带灰度值分别为1.22±0.05、1.82±0.13、1.10±0.09,3组之间差异有统计学意义(F=94.340,P<0.001);POF组高于对照组(P<0.001)和干细胞组(P<0.001).3组中p-FOXO3a的蛋白条带灰度值分别为0.80±0.08、0.33±0.06、0.76±0.05;3组之间差异有统计学意义(F=98.673,P<0.001);POF组低于对照组(P<0.001)和干细胞组(P<0.001).3组小鼠中p-IGF-1R的蛋白条带灰度值分别为0.31±0.10、0.32±0.08、0.42±0.01,3组之间差异有统计学意义(F=3.882,P=0.044);干细胞组p-IGF-1R蛋白含量高于对照组(P=0.023)和POF组(P=0.039).对照组、POF组、干细胞组小鼠的p-AKT蛋白条带灰度值分别为0.57±0.02、0.51±0.05、0.64±0.03,3组之间差异有统计学意义(F=22.227,P<0.001);干细胞组蛋白含量高于对照组(P=0.005)和POF组(P<0.001),对照组高于POF组(P=0.004).结论MenSCs移植后,可能是通过干细胞旁分泌的胰岛素样生长因子1(IGF-1)与IGF-1R结合,促进p-IGF-1R的表达以及下调卵巢靶细胞GRB10的表达,激活IGF-1信号通路,促进磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-AKT-FOXO3a途径下游因子p-FOXO3a的表达,从而激活原始卵泡发育,改善POF.