叉头框蛋白O3a在失神经肌萎缩中的研究进展

骨骼肌失神经后,肌纤维直径和横截面积减小,导致肌肉质量下降。实验证明,叉头框蛋白O3a(FoxO3a)作为叉头框转录因子亚家族O重要成员之一,对失神经肌萎缩有着重要的调节作用。本文从FoxO3a的结构和功能、上游翻译后修饰和下游靶基因的调控方面,阐述其作为重要的治疗靶点在失神经肌萎缩中的重要意义,旨在未来延缓失神经肌萎缩方面提供精准的理论依据并寻求新的靶点和治疗方法。

叉头框蛋白O3a在神经退行性疾病中靶向研究进展

神经退行性疾病是大脑或脊髓内特定神经元细胞群的丢失或进程性病变而导致的不可逆的神经功能障碍性疾病。神经炎症、氧化应激、线粒体功能障碍、兴奋性毒性和蛋白质聚集可促进神经退行性病变过程。叉头框蛋白O3a(FoxO3a)是Forkhead转录因子FoxO亚家族的一个重要成员,通过磷酸化、泛素化介导的降解、微信号转导以及相关蛋白通路,在细胞增殖、凋亡、自噬、活性氧(ROS)解毒方面发挥着重要作用,与神经退行性疾病的发生与发展息息相关。本文重点对近年来FoxO3a在神经退行性疾病中的作用机制及相关通路的靶向作用进行阐述,旨在为该病的防治提供新的研究思路。

血清HDAC6和FoxO3a蛋白水平在预测妊娠期糖尿病并发重度子痫前期中的临床价值

目的探究血清组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)和叉头框O3a(FoxO3a)蛋白水平在预测妊娠期糖尿病(GDM)并发重度子痫前期(sPE)中的临床价值。方法选取2021年7月至2022年7月在广元市第一人民医院分娩的224例单胎妊娠孕妇作为研究对象。其中GDM孕妇78例为GDM组,GDM并发sPE孕妇76例为GDM-sPE组,正常孕妇70例为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清HDAC6和FoxO3a的蛋白水平;采用Pearson法分析GDM-sPE患者血清HDAC6和FoxO3a的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析HDAC6和FoxO3a对GDM-sPE的预测价值。采用Logistic回归分析GDM-sPE发生的影响因素。结果GDM-sPE组HDAC6和FoxO3a水平均显著高于GDM组和对照组,GDM组显著高于对照组(P<0.05)。相关性分析显示,GDM-sPE患者血清HDAC6和FoxO3a的表达水平呈正相关(r=0.569,P<0.001)。ROC曲线分析显示,二者联合预测GDM-sPE发生的曲线下面积(AUC)高于HDAC6和FoxO3a单独预测的AUC(Z=24.214,P<0.001;Z=19.601,P<0.001)。Logistic回归分析显示,FBG、HDAC6和FoxO3a是GDM-sPE发生的影响因素(P<0.05)。结论GDM-sPE患者血清HDAC6和FoxO3a表达水平均显著升高,二者联合对GDM-sPE具有一定的预测价值。

叉头框蛋白O3介导Th1/Th17/Treg失衡在白塞综合征发病机制中的潜在作用

白塞综合征(Behçet’s syndrome,BS)是一种慢性复发性、可累及多种重要脏器的变异性血管炎。免疫紊乱是BS发生发展的基石,其中辅助性T细胞(T helper cell,Th)1/Th17/调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)失衡起重要作用。叉头框蛋白O3(forkhead box O3,FOXO3)可调节T细胞活化、分化和T细胞功能。FOXO3表达改变与Th1/Th17/Treg失衡相关,使FOXO3成为免疫疾病治疗的潜在靶点。目前尚缺乏FOXO3与BS相关的研究,故本文对FOXO3作为BS潜在治疗靶点的机制进行总结与展望。

叉头框蛋白O3a在缺血性脑卒中的作用及靶向干预的研究进展

脑卒中(stroke)是危害人类健康的常见多发病,也是导致人类致死和致残的主要原因之一。全球疾病负担研究(GBD 2019)显示,仅2019年全球脑卒中发病率为150.8/10万,死亡率84.2/10万。脑卒中每年造成550万人死亡,4 400万人身体残疾[1-2]。《中国脑卒中防治报告2020》显示,我国脑卒中发病率高达201/10万,其中以缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)为主,约占69.6%~70.8%[3]。目前,临床上治疗脑卒中以溶栓、介入为主,因适应证和治疗时间窗选择要求较高,导致符合治疗标准的患者较为局限.

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a、FOXO3与疾病严重程度及预后的关系

目的分析老年重症肺炎并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清微小核糖核酸(miRNA)-27a、叉头框蛋白O3(FOXO3)与疾病严重程度及预后的关系。方法选取2022年10月—2023年9月上海市静安区中心医院重症医学科收治老年重症肺炎并发ARDS患者108例(ARDS组)和老年重症肺炎未并发ARDS患者72例(非ARDS组),ARDS组患者再根据氧合指数分为轻度亚组26例、中度亚组34例、重度亚组48例,并根据28 d预后情况分为死亡亚组33例、存活亚组75例;另选取同期体检健康志愿者60例为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-27a、FOXO3水平,TargetScan数据库预测miR-27a与FOXO3的结合位点。通过Pearson/Spearman相关性分析血清miR-27a与FOXO3 mRNA水平的相关性,多因素Logistic回归分析老年重症肺炎并发ARDS患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-27a、FOXO3 mRNA水平对老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的预测价值。结果健康对照组、非ARDS组、ARDS组血清miR-27a水平依次降低,FOXO3 mRNA水平依次升高(F/P=77.352/<0.001、62.956/<0.001);轻度亚组、中度亚组、重度亚组血清miR-27a水平依次降低,FOXO3 mRNA水平依次升高(F/P=83.597/<0.001、111.833/<0.001);miR-27a与FOXO3的3’-非翻译区3257~3264处存在结合位点。老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a与FOXO3 mRNA水平呈负相关(r/P=-0.736/<0.001),氧合指数与血清miR-27a水平呈正相关,与FOXO3 mRNA水平呈负相关(r/P=0.751/<0.001、-0.785/<0.001)。老年重症肺炎并发ARDS患者28 d死亡率为30.56%(33/108)。年龄增加、机械通气时间延长、FOXO3 mRNA升高为影响老年重症肺炎并发ARDS患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.199(1.033~1.393)、1.547(1.009~2.373)、1.108(1.040~1.180)],氧合指数升高、miR-27a升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.973(0.958~0.989)、0.903(0.844~0.965)];血清miR-27a、FOXO3 mRNA水平及二者联合预测老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的曲线下面积分别为0.784、0.786、0.879,二者联合的AUC大于血清miR-27a、FOXO3 mRNA水平单独预测(Z/P=2.550/0.011、2.963/0.003)。结论老年重症肺炎并发ARDS患者血清miR-27a水平降低,FOXO3 mRNA水平升高,与疾病加重和预后不良密切相关,二者联合预测老年重症肺炎并发ARDS患者死亡的价值较高。

基于FOXO3a/Nrf2信号通路探讨尿毒症骨骼肌自噬的分子机制

目的:探讨叉头盒(forkhead box,FOX)O蛋白3a(forkhead box O3a,FOXO3a)/转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路的调节尿毒症骨骼肌自噬的机制。方法:24只小鼠随机分为假手术组(Sham组)、慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)组和CKD+AST-120(AST)组,每组8只。通过5/6肾切除术建立CKD模型。在肾切除术后4周,CKD+AST组小鼠给予含AST-120粉末(尿毒毒素的木炭吸附剂)饮食,持续8周。透射电子显微镜观察腓肠肌组织中的自噬溶酶体。C2C12小鼠成肌细胞分为对照(Control,Con)组、硫酸吲哚酚(indophenol sulfate,IS)组、IS+si-FOXO3a组。实时RT-PCR和蛋白质印迹法分析FOXO3a表达情况。Giemsa染色对C2C12肌管直径进行量化。结果:与CKD组相比,CKD+AST组血清IS水平和腓肠肌组织中FOXO3a表达、自噬溶酶体的数量明显降低(P<0.05),以及腓肠肌、胫骨前肌、比目鱼肌质量明显增加(P<0.05)。与IS组相比,IS+si-FOXO3a组C2C12细胞中FOXO3a、肌肉萎缩盒基因(Muscle Atrophy F-box,atrogin-1)肌肉环脂蛋白1(muscle RING-finger protein-1,MuRF-1)的表达和细胞自噬通量明显降低(P<0.05),以及细胞直径明显增加(P<0.05)。与Sham组相比,CKD组小鼠腓肠肌组织中Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,KEAP1)表达明显升高(P<0.05),和NRF2表达明显降低(P<0.05)。AST治疗逆转了CKD小鼠腓肠肌组织中这些蛋白的变化。si-NRF2逆转了FOXO3a敲低对自噬流量的抑制作用。结论:IS可能通过持续刺激FOXO3a-KEAP1-NRF2轴促进骨骼肌过度自噬,参与尿毒症少肌症的发病机制。

电针对MPTP诱导帕金森病小鼠FoXO1/NLRP3通路介导神经炎症的影响

目的探究电针对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)模型小鼠的作用机制是否与叉头盒蛋白O1(FoXO1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路介导的神经炎症相关。方法将30只小鼠随机分为对照组(Ctrl)、模型组(MPTP)、电针组(EA),每组10只。连续7 d腹腔注射MPTP 30 mg/(kg•d)制备PD小鼠模型。采用旷场实验及爬杆实验观察小鼠行为学;免疫组化观察小鼠中脑黑质α-突触核蛋白(α-syn)表达水平;蛋白免疫印迹测定Iba-1、FoXO1、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平;ELISA法检测中脑黑质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)炎症因子表达水平。结果MPTP组小鼠出现显著的行为学障碍,中脑黑质α-syn明显增加(P<0.01),Iba-1、FoXO1、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白水平升高(P<0.05,P<0.01),TNF-α、IL-1β含量明显增加(P<0.01)。EA治疗后能有效改善PD小鼠运动障碍,提高运动平衡及协调能力(P<0.01),减少α-syn的异常聚集(P<0.01),减轻小胶质细胞异常活化,缓解神经炎症(P<0.05)。结论电针可能通过调控FoXO1/NLRP3通路介导的神经炎症,在PD中发挥保护作用。

基于SIRT1/FOXO3a信号通路探讨“温阳通脉”灸法对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

【目的】探讨“温阳通脉”灸法防治动脉粥样硬化(AS)的作用机制。【方法】将10只饲喂普通饲料的C57BL/6J小鼠设为空白组;将30只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,随机分为模型组、辛伐他汀组和艾灸组,每组10只。于造模第1天开始干预,艾灸组小鼠给予膻中、神阙、内关、血海穴艾灸,辛伐他汀组给予辛伐他汀蒸馏水混悬液灌胃,共干预12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉病理形态结构,透射电镜观察小鼠胸主动脉内皮细胞超微结构,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测胸主动脉沉默信息调节因子1(SIRT1)和叉头框转录因子O3a(FOXO3a)的mRNA表达水平,Western Blot法检测胸主动脉SIRT1和FOXO3a蛋白表达水平。【结果】与空白组比较,模型组小鼠胸主动脉及血管内皮细胞病理变化明显,血清炎症因子TNF-α、ICAM-1和VCAM-1水平升高(P<0.05或P<0.01),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和艾灸组小鼠的胸主动脉及血管内皮细胞结构得到明显改善,血清TNF-α、ICAM-1、VCAM-1水平均降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。辛伐他汀组和艾灸组上述指标组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】“温阳通脉”灸法可通过调控SIRT1/FOXO3a信号通路减轻炎症反应防治小鼠AS。

颅脑外伤患儿血清FoxO3a和Cav-1水平变化及其临床意义

目的探讨颅脑外伤患儿血清叉头框转录因子O3a(FoxO3a)和陷窝蛋白-1(Cav-1)水平变化及其临床意义。方法选取2020年12月—2022年11月南京医科大学附属儿童医院颅脑外伤患儿107例,根据格拉斯哥昏迷评分(GCS)分为轻度组(49例)、中度组(37例)和重度组(21例)。收集所有患儿临床资料,并检测血清FoxO3a、Cav-1水平。对所有患儿从入院当日起连续随访60 d,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价FoxO3a、Cav-1判断颅脑外伤患儿预后的效能,采用多因素Logistic回归分析评估颅脑外伤患儿预后不良的危险因素。结果轻度组、中度组和重度组血清FoxO3a和Cav-1水平均依次升高(P<0.001)。预后不良组血清FoxO3a和Cav-1水平均显著高于预后良好组(P<0.001)。血清FoxO3a和Cav-1单项检测和联合检测判断颅脑外伤患儿预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.764、0.843、0.908。预后不良组入院GCS得分≤8分、合并其他脏器损伤、受伤至入院时间、D-二聚体(DD)、白细胞(WBC)计数、血小板(PLT)计数均高于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,入院GCS评分≤8分、合并其他脏器损伤、FoxO3a≥6.31 ng·mL^(-1)、Cav-1≥23.15 ng·mL^(-1)是颅脑外伤患儿预后不良的危险因素[比值比(OR)值分别为1.943、2.061、2.649、3.337,95%可信区间(CI)分别为1.414~2.669、1.474~2.881、1.711~4.100、2.076~5.362,P<0.001]。结论血清FoxO3a、Cav-1水平异常与颅脑外伤患儿的病情和预后密切相关,FoxO3a高水平和/或Cav-1高水平是颅脑外伤患儿预后不良的危险因素。

2型糖尿病周围神经病变患者血清FOXO3a、PDGF表达及临床意义

目的 探究2型糖尿病周围神经病变(DPN)患者血清叉头盒O类转录因子-3a(FOXO3a)、血小板源性生长因子(PDGF)表达及临床意义。方法 选取2020年12月—2022年12月中部战区总医院接收的110例2型糖尿病患者作为研究对象。根据是否并发DPN将患者分为无并发症组(NDPN组)和周围神经病变组(DPN组),分别有45和65例,随机选取同期在该院体检的健康人群30例作为对照组(NC组)。采集受试者的一般资料及血脂、血糖等相关生化指标。采用酶联免疫吸附试验检测3组受试者血清FOXO3a、PDGF水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清FOXO3a、PDGF水平对2型糖尿病发生DPN的预测价值。结果 各组年龄、病程比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。各组性别构成、体质量指数、舒张压、收缩压、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、肌酐、尿素氮水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NDPN组与DPN组动脉粥样硬化、视网膜病变、降压药使用史、注射胰岛素、服用二甲双胍构成比比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、空腹C肽、踝肱指数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NDPN组、DPN组糖化血红蛋白、空腹血糖水平较NC组高(P <0.05),DPN组运动神经传导速度、感觉神经传导速度水平较NDPN组低(P <0.05)。NDPN组、DPN组FOXO3a、PDGF水平较NC组高(P <0.05),DPN组FOXO3a、PDGF水平较NDPN组高(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清FOXO3a、PDGF以及联合诊断糖尿病患者是否发生DPN的曲线下面积分别为0.695(95%CI:0.590,0.779)、0.636(95%CI:0.539,0.726)、0.732(95%CI:0.639,0.812),敏感性分别为80.00%(95%CI:0.733,0.848)、92.31%(95%CI:0.856,0.977)、89.23%(95%CI:0.838,0.954),特异性分别为55.56%(95%CI:0.438,0.654)、33.33%(95%CI:0.238,0.452)、51.11%(95%CI:0.416,0.597)。结论 2型糖尿病DPN患者体内血清FOXO3a、PDGF水平异常,提示其与2型糖尿病周围神经病变发生、发展有相关性。

组织内TRIM3及FoxO1表达与原发性肝癌患者病理特征及预后间的关系分析

目的探讨组织内三重基序蛋白3(TRIM3)及叉头转录因子O家族1(FoxO1)表达与原发性肝癌(PHC)患者病理特征及预后间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2019年12月南京医科大学附属淮安第一医院收治的119例PHC患者的临床资料。比较PHC患者肝癌组织与癌旁组织中的TRIM3、FoxO1表达,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的病理特征,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的预后。结果PHC患者肝癌组织中TRIM3、FoxO1阳性率(46.22%、42.02%)显著低于癌旁组织(75.63%、79.83%)(P<0.05)。TRIM3阳性患者肿瘤大小<5 cm、高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于TRIM3阴性患者(P<0.05),FoxO1阳性患者肿瘤大小<5 cm、单发、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于FoxO1阴性患者(P<0.05)。肝癌组织内TRIM3阳性患者、TRIM3阴性患者3年生存率分别为61.82%、31.25%,差异有统计学意义(Log Rank=10.242,P=0.001);FoxO1阳性患者、FoxO1阴性患者3年生存率分别为60.00%、34.78%,差异有统计学意义(Log Rank=6.978,P=0.008)。结论组织内TRIM3及FoxO1表达与PHC患者病理特征及预后显著相关,可作为评估PHC患者病情及预后的重要指标。

丹皮酚对去卵巢骨质疏松大鼠叉头框蛋白O3a/Wnt信号通路及椎骨密度的影响

背景:丹皮酚可抑制炎症,减轻慢性骨关节炎临床症状,作为一种不良反应小、更为安全的天然药物成分,探讨其对骨质疏松症的治疗作用具有重要的临床意义。目的:探究丹皮酚对去卵巢骨质疏松大鼠叉头框蛋白O3a(forkhead box O3a,FoxO3a)/Wnt信号通路及椎骨密度的影响。方法:雌性SD大鼠随机分为6组,每组10只。假手术组仅切除卵巢旁部分脂肪组织;其余50只大鼠均采用双侧卵巢摘除法制备去卵巢骨质疏松大鼠模型,模型制备成功后分为模型组、雌激素组[炔雌醇10μg/(kg·d)]、丹皮酚低、中、高剂量组[丹皮酚125,250,500 mg/(kg·d)],每组10只,灌胃给药;假手术组、模型组灌胃等量生理盐水,持续干预12周。ELISA法测定血清雌激素、骨保护素、骨钙素水平;采用双能X射线动物骨密度测定仪检测大鼠股骨及椎骨骨密度;采用骨科生物力学测试仪检测大鼠股骨及椎骨生物力学指标:弹性模量、最大载荷、屈服载荷;实时荧光定量PCR检测椎骨组织FoxO3a、Wnt2 mRNA表达水平;免疫印迹法检测椎骨组织FoxO3a、Wnt2及核内β-catenin蛋白表达。结果与结论:①治疗后,与假手术组比较,模型组L4,5骨密度、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、血清雌二醇、骨保护素水平、椎骨组织Wnt2 mRNA及蛋白水平、核内β-catenin蛋白水平均显著降低(P<0.05),骨钙素水平、椎骨组织FoxO3a mRNA及蛋白水平显著增加(P<0.05);②与模型组比较,丹皮酚低、中、高剂量组大鼠L4,5骨密度、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、血清雌二醇、骨保护素水平、椎骨组织Wnt2 mRNA及蛋白水平、核内β-catenin蛋白水平依次增加(P<0.05),血清骨钙素水平、椎骨组织FoxO3a mRNA及蛋白水平依次降低(P<0.05),且丹皮酚高剂量组均优于雌激素组(P<0.05);③提示丹皮酚可增加去卵巢骨质疏松大鼠椎骨骨密度,改善其骨生物力学状况,减轻骨质疏松,该作用可能与抑制FoxO3a、促进Wnt2/β-catenin通路激活有关。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

叉头盒O1(FoxO1)调节RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性

目的研究叉头盒O1(FoxO1)对RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性的调控作用。方法采用100 ng/m L脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞6、12、24 h,流式细胞术观察RAW264.7细胞活化过程中LAIR-1、CD11b以及细胞吞噬功能的变化。软件预测FoxO1与LAIR-1启动子之间存在结合位点。构建FoxO1fl/fl/Lys M-Cre小鼠,观察FoxO1敲除后,RAW264.7巨噬细胞LAIR-1的水平变化。构建LAIR-1基因启动子荧光素酶报告基因载体,转染FoxO1观察对其转录活性的影响。结果 LPS刺激后RAW264.7细胞活化,CD11b表达升高,吞噬能力增强,LAIR-1水平下调。成功构建了髓系细胞FoxO1基因敲除小鼠FoxO1fl/fl/Lys M-Cre,该小鼠LAIR-1 mRNA水平显著降低。软件预测发现在LAIR-1基因启动子区域存在潜在的FoxO1转录因子结合位点,荧光素酶报告基因证实FoxO1可激活LAIR-1启动子转录活性。结论 FoxO1可激活巨噬细胞LAIR-1启动子转录活性。

胰岛素样生长因子结合蛋白-3和叉头样转录因子O4在胃癌组织中的mRNA表达水平及临床意义探讨

目的：探讨胃癌组织中胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）和又头样转录因子04（FOX04）在的表达及与胃癌，临床病理参数及预后的关系。方法：筛选本院手术切除的胃癌组织及相应癌旁组织标本各75例，应用RT-PCR技术检测胃癌组织和对应的癌旁组织中IGFBP-3和FOX04mRNA表达，分析其与胃癌临床病理参数间的关系。结果：胃癌组织中IGFBP-3mRNA和FOX04mRNA阳性检出率分剐为16．67％（12例）、19．44％（14例），明显低于癌旁组织中IGFBP-3mRNA（84．72%，61例）、FOXO4mRNA（86．11％。62例）的阳性检出率（p〈0．01）。胃癌组织中IGFBP-3和FOXO4mRNA的表达显著低于癌旁组织（P〈0．01）。胃癌标本组织中IGFBP-3和FOX04mRNA的表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤部位无关（P〉0．05），而与浸润深度、分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈显著性相关（P〈0．01）。1年期随访：23例死亡，49例存活；死亡组患者入院时胃癌标本组织中IGFBP-3和FOXO4mRNA表达显著低于存活组（P〈0．01）。结论：IGFBP-3和FOXO4mRNA在胃癌组织中低表达，与胃癌的临床病理参数和患者的预后密切相关。

有氧运动通过调节FoxO3a磷酸化及亚细胞定位减轻小肠缺血再灌注损伤

目的探讨有氧运动通过调控叉头框家族蛋白O3a(forkhead box protein O3a,FoxO3a)活性在C57BL/6小鼠小肠缺血/再灌注(II/R)损伤中的保护作用及机制。方法6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为静息+假手术(SS)组、静息+II/R(SI)组、游泳训练+II/R(TI)组和游泳训练+II/R+FoxO3a磷酸化激活剂SC79(TSC)组。TI和TSC组进行为期5周的游泳训练,所有小鼠于训练结束后3 d行II/R术,SS组不夹闭血管,TSC组小鼠于再灌注前1 h腹腔注射0.04 mg/g SC79。再灌注2 h后处死小鼠取标本,苏木精-伊红染色观察小肠组织病理改变,DHE染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。同时检测小肠组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。Western blot法检测Ser253磷酸化叉头框家族蛋白O3a(P-FoxO3a^(Ser253))、FoxO3a表达。qRT-PCR检测抗氧化基因锰超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase,MnSOD)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC1α)的表达。结果II/R前行有氧运动干预,通过发挥抗氧化应激作用,减轻II/R损伤。与SI组小鼠相比,TI组小鼠小肠组织细胞质内P-FoxO3a^(Ser253)表达水平下调(P<0.01),细胞核内FoxO3a含量提高(P<0.01),抗氧化基因MnSOD和PGC1α的表达增加(P<0.05和P<0.01),小肠组织ROS生成减少(P<0.01),氧化应激产物MDA含量明显下降(P<0.05),抗氧化酶CAT和SOD含量增加(P<0.05和P<0.01);再灌注前腹腔注射SC79后,上述有氧运动减轻II/R损伤作用被抵消。结论有氧运动通过调节FoxO3a磷酸化及亚细胞定位减轻C57BL/6小鼠II/R损伤。

叉头框蛋白O3通过调控Nod样受体蛋白3炎性小体抑制心脏成纤维细胞衰老

目的 研究叉头框蛋白O3(FoxO3)在心脏成纤维细胞(CF)衰老中的作用及机制。方法 选取新生Wistar乳鼠第五代CF随机分为小干扰RNA转染对照(siNC)组和siFoxO3组(n=3)。siFoxO3组转染FoxO3小干扰RNA。通过实时定量PCR和免疫印迹法检测衰老和Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体相关基因以及FoxO3表达情况。结果 与原代CF比较,第五代CF中细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂2A(p16)和细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂1A(p21)mRNA表达、p21和平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05)。第五代CF中FoxO3 mRNA和蛋白表达明显低于原代(0.67±0.10 vs 1.03±0.02,0.47±0.12 vs 0.95±0.05,P<0.05)。与siNC组比较,siFoxO3组细胞中FoxO3 mRNA表达明显降低,而p16和p21 mRNA表达、p21蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01)。与siNC组比较,siFoxO3组细胞中NLRP3、硫氧还蛋白结合蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1、白细胞介素1βmRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 FoxO3通过调控NLRP3炎性小体抑制CF衰老,为衰老相关心血管疾病提供靶点。

子宫内膜癌组织叉头框转录因子O亚型3a与基质金属蛋白酶-14表达水平及相关性

目的检测子宫内膜癌中叉头框转录因子O亚型(FOXO)3a和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达。方法 63例行子宫内膜癌根治手术患者作为观察组,并留取术后组织,40例子宫内膜复杂性增生患者术后标本作为对照组,40例增生期子宫内膜诊刮标本作为正常对照组。采用免疫组化SP法检测3组中FOXO3a和MMP-14的表达。结果 FOXO3a和MMP-14在三组中的表达有统计学意义。观察组中FOXO3a和MMP-14的阳性率均与肌层浸润深度、淋巴结累犯密切相关,FOXO3a的阳性率与肿瘤的最大径密切相关。观察组中FOXO3a和MMP-14的表达呈负相关性。结论子宫内膜癌中FOXO3a低表达、MMP-14高表达对肿瘤的形成和进展可能有促进作用,二者具有负向协同作用。