LncRNA-NEAT1调控miR-182-5p表达对狼疮性肾炎肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核旁丛组装转录本1(NEAT1)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)中通过微小RNA(miR)-182-5p/叉头盒蛋白O1(FoxO1)/β-连环蛋白(β-catenin)轴对肾系膜细胞损伤的影响。方法收集2019年3月至2021年7月凉山州第二人民医院收治的32例LN患者(LN组)外周血和32例体检健康者(健康对照组)外周血,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞中NEAT1以及miR-182-5p、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量。采用20%LN患者血清处理肾系膜细胞的方法构建LN肾系膜细胞模型,造模完成后将细胞分为对照组(正常培养,不转染)、模型组(加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NC组(转染si-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(共转染si-NEAT1和anti-miR-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-182-5p组(共转染si-NEAT1和anti-miR-182-5p后加入5μg/mL脂多糖培养)。qRT-PCR法检测各组细胞NEAT1、miR-182-5p表达水平;ELISA法测定各组细胞炎症因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH含量;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测各组细胞增殖活力;流式细胞仪分析各组细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组细胞FoxO1、β-catenin蛋白表达水平。结果与健康对照组比较,LN组患者外周血单个核细胞中NEAT1、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平以及血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著上升,miR-182-5p表达水平显著下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组肾系膜细胞增殖活力、FoxO1和β-catenin蛋白水平以及LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显增加,miR-182-5p表达水平明显降低(P<0.05)。敲低NEAT1后,细胞增殖活力和炎症反应减弱,FoxO1和β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05);抑制miR-182-5p表达可减轻NEAT1敲低对LN肾系膜细胞模型细胞增殖、炎症因子及FoxO1、β-catenin蛋白表达的影响(P<0.05)。各组细胞间凋亡率无显著变化(P>0.05)。结论敲低NEAT1可通过靶向负调控miR-182-5p表达,抑制LN肾系膜细胞过度增殖,降低炎症反应,其可能与抑制FoxO1/β-catenin通路有关。

敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3⁃L1中FOXP1的表达增加

目的在小鼠前脂肪细胞系3T3-L1分化过程中敲低双链RNA结合蛋白Staufen1(Stau1)后筛选差异表达的基因,分析其生物学功能,并用qPCR验证测序结果。方法用RNA-seq分析Stau1敲低后基因的转录调控。构建STAU1 shRNA并转染3T3-L1细胞,鸡尾酒方法诱导其分化为成熟脂肪细胞,收取0、4 d的细胞设立对照组和STAU1敲低组(各3组生物重复样本)收取12组样品的细胞基因芯片信息,以变化倍数log2(Fold change)>1且校正后的P<0.05作为条件筛选Stau1敲低的细胞与对照组样本间的差异表达基因,进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(KEGG通路数据库),qPCR验证差异表达的基因。荧光素酶报告基因实验验证SATU1与叉头盒蛋白P1 FOXP1 mRNA 3′UTR上Staufen1结合位点(SBS)存在结合。结果较对照组STAU1敲低细胞组中共筛选出差异表达基因588个,其中上调406个、下调182个。差异表达基因主要参与的生物学过程中脂代谢、炎性反应因子,主要富集的信号通路有糖代谢和能量代谢相关通路。敲低Stau1后FOXP1表达升高5.3倍,软件预测FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点,荧光素酶报告基因验证了FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点。结论推测STAU1能够与FOXP1 mRNA上的STAU1结合位点结合并促进其降解。

"叉头盒"P1蛋白在肝内胆管癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的研究"叉头盒"P1蛋白(FOXP1)在肝内胆管癌(ICC)中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法回顾性分析2013年1月1日至2019年12月12日在上海交通大学医学院附属新华医院行根治性切除术的ICC患者的临床资料。共入选ICC患者48例,其中男性24例,女性24例,年龄(59.1±10.1)岁,年龄范围42~83岁。记录患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、分期等临床资料。免疫组织化学方法检测FOXP1在ICC癌组织和癌旁组织中的表达。使用Kaplan-Meier方法计算患者存活率并绘制生存曲线。Cox回归模型分析患者预后的影响因素。结果48例ICC患者对应取得40例癌旁组织。FOXP1在ICC癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁正常组织[54.2%(26/48)比92.5%(37/40)],差异具有统计学意义(χ2=15.76,P<0.05)。肿瘤分化程度、淋巴结转移、器官侵犯和TNM分期与FOXP1表达情况相关(P<0.05)。共42例患者获得随访,中位随访时间11.5(7.75,19.25)个月。Cox多因素分析显示,周围器官侵犯、淋巴结转移、高TNM分期(Ⅲ期)和FOXP1阴性表达是影响ICC患者总体生存时间的独立危险因素。FOXP1阳性ICC患者的总体生存时间为17.5个月,无复发生存时间为15.5个月,均高于FOXP1阴性者的总体生存时间14.0个月和无复发生存时间11.1个月,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论FOXP1阴性表达与ICC的恶性生物学行为和不良预后相关;FOXP1可能成为ICC诊断或治疗的新靶点。