叉头盒转录因子M1调控葡萄糖转运蛋白1影响胃癌细胞的糖代谢及生物学特性

目的观察叉头盒转录因子M1（FOXM1）通过调控葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）的表达对胃癌细胞的糖代谢、细胞增殖和凋亡的影响。方法Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测胃癌细胞（AGS、SGC-7901）和正常胃黏膜细胞（GES-1）3株细胞中FoxM1、GLUT1的蛋白及mRNA的表达。转染FoxM1过表达载体和小干扰RNA（siRNA）感染序列至胃癌细胞，检测FoxM1和GLUT1表达及细胞对葡萄糖的摄取变化。细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖活力，流式细胞凋亡检测分析细胞凋亡，并与阴性转染细胞比较。结果AGS、SGC-7901细胞中FoxM1 mRNA的相对表达量为2.624±0.167、3.023±0.159（t=16.686，P=0.004；t=21.810，P=0.002），GLUT1 mRNA的相对表达量为3.582±0.237、3.867±0.285（t=18.700，P=0.003；t=17.315，P=0.003），均明显高于正常胃黏膜细胞。FoxM1蛋白在AGS、SGC-7901的表达量2.852±0.271、2.533±0.243（t=11.814，P=0.007；t=10.900，P=0.008）较GES-1中1.000±0.017明显升高。GLUT1蛋白在AGS、SGC-7901的表达量3.716±0.316、3.367±0.335较GES-1中1.000±0.021明显升高（t=14.854，P=0.005；t=12.214，P=0.007）。转染FoxM1过表达载体后AGS、SGC-7901两组胃癌细胞中GLUT1的表达明显升高，糖摄取量增加（t=3.242，P=0.048；t=3.964，P=0.029）。AGS转染后48 h和72 h促进细胞增殖（t=10.062，P=0.002；t=6.466，P=0.008），抑制细胞凋亡[（1.36±0.29）%比（3.16±0.32）%，t=－7.219，P=0.006]。转染FoxM1 siRNA感染序列后两组胃癌细胞中GLUT1的表达明显降低，糖摄取量减少（t=－4.217，P=0.024；t=－3.879，P=0.030）。AGS转染后48 h和72 h抑制细胞增殖（t=－10.280，P=0.002；t=－12.530，P=0.001），促进细胞凋亡[（8.02±0.69）%比（3.03±0.26）%，t=11.722，P=0.007]。结论FoxM1调控GLUT1表达促进胃癌细胞葡萄糖摄取和细胞增殖，抑制细胞凋亡。

沉默信息调节因子1和叉头盒转录因子M1在病理性瘢痕组织中的表达及意义

目的 观察沉默信息调节因子1（SIRTl）和叉头盒转录因子M1（FOXMl）在病理性瘢痕中的表达及其相互关系,探讨它们在瘢痕形成中的作用及机制.方法 利用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法、Western blot检测正常皮肤（10例）、成熟瘢痕（10例）、病理性瘢痕（10例）组织中SIRT1和FOXM1的mRNA、蛋白表达水平并进行统计学分析.结果 正常皮肤、成熟瘢痕、病理性瘢痕组织中SIRT1的mRNA及蛋白相对表达水平分别为1.0、1.187982±0.082916、2.402 178±0.178 598;0.498 614±0.056 342、0.534 159±0.044 509、0.976 829±0.145 736.FOXM1的mRNA及蛋白相对表达水平分别为1.0、1.196 429±0.086 786、2.447 249±0.128 875;0.469 935±0.089 373、0.552 653±0.078 293、0.915 367±0.114097.病理性瘢痕组织中SIRT1与FOXM1的mRNA相对表达水平均显著高于正常皮肤、成熟瘢痕（P＜0.01）;病理性瘢痕组织中SIRT1与FOXM1的蛋白相对表达水平均明显增高,与正常皮肤、成熟瘢痕对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 SIRT1和FOXM1在病理性瘢痕组织中表达增高,通过调节这两个因子的表达,可能促进瘢痕组织中细胞的增生,对病理性瘢痕的形成可能起重要作用.

吉马酮通过FOXO3-FOXM1轴调控甲状腺癌BCPAP细胞的增殖、迁移和化疗耐药

目的:探究吉马酮通过叉头盒蛋白O3(FOXO3)-FOX亚类M1转录因子(FOXM1)信号通路调控人甲状腺癌细胞BCPAP和多柔比星(DOX)耐药BCPAP细胞(BCPAP/DOX)的增殖、迁移和化疗耐药。方法:常规培养BCPAP细胞,用BCPAP细胞构建BCPAP/DOX细胞,用MTT法检测不同浓度吉马酮对BCPAP和BCPAP/DOX细胞增殖的影响。将BCPAP和BCPAP/DOX细胞分为Ctrl组(空白对照)、sh-NC组(转染sh-NC质粒)、低浓度吉马酮组(0.10 mmol/L)、高浓度吉马酮组(0.15 mmol/L)、高浓度吉马酮(0.15 mmol/L)+sh-FOXO3组(转染sh-FOXO3质粒),用转染试剂将sh-NC质粒和sh-FOXO3质粒转至相应的BCPAP和BCPAP/DOX细胞中。用CCK-8法、划痕愈合实验和WB法分别检测各组细胞的增殖、迁移能力,以及FOXO3、FOXM1、BAX、MMP-9和多药耐药-1(MDR-1)蛋白的表达。结果:在BCPAP和BCPAP/DOX细胞中成功地敲减了FOXO3的表达,低浓度和高浓度吉马酮均可显著抑制BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖、迁移能力,降低细胞中FOMX1、MMP-9或MDR-1(BCPAP/DOX细胞)蛋白的表达,提升FOXO3和BAX蛋白的表达(均P<0.05),与低浓度比较,高浓度吉马酮的作用更为显著(均P<0.05),敲减FOXO3后可部分逆转吉马酮对这两种细胞的作用(均P<0.05)。结论:吉马酮可能通过FOXO3/FOXM1信号通路调控BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖和迁移能力,降低BCPAP/DOX细胞化疗耐药性。

靶向FoxM1基因的短发夹RNA干扰表达载体的构建和鉴定

目的构建靶向FoxMl基因的短发夹RNA（shRNA）干扰表达载体质粒，为进一步探讨FoxMl在肺部恶性肿瘤及其他疾病中的作用奠定基础。方法化学合成可编码靶向FoxMl基因的siRNA的短发夹DNA（shDNA）片段，通过基凶重组将其插入到线性化的shRNA表达质粒骨架pSilencer2．1-U6中，对得到的新质粒进行酶切鉴定和基因测序。结果所构建的质粒载体中成功插入了可编码靶向FoxMl基因的siRNA的shDNA片段。结论成功构建了靶向FoxMl基因的shDNA表达载体。