溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1、核因子-κΒmRNA表达与病情严重程度关系研究

目的:探究溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1(FoxM1)、核因子-κΒ(NF-κΒ)mRNA表达与病情严重程度的关系。方法:选取活动期UC患者128例为活动期UC组、缓解期UC患者81例为缓解期UC组、结肠单发息肉切除术后肠镜复查正常者88例为对照组。以改良Truelove和Witts分型标准将活动期UC患者按病情严重程度分成活动期轻度组(53例)和活动期中度组(46例)和活动期重度组(29例)。荧光定量PCR法检测受试者结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达。比较对照组、缓解期UC组、活动期UC组和不同病情严重程度活动期UC患者FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达及改良Mayo评分。分析UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分的相关性,影响活动期UC患者重度病情发生的因素,FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA预测活动期UC患者重度病情发生的价值。结果:与对照组和缓解期UC组比较,活动期UC组结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达水平升高(均P<0.05)。与缓解期UC组比较,活动期UC组改良Mayo评分升高(P<0.05)。活动期轻度组、活动期中度组、活动期重度组结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达水平及改良Mayo评分依次升高(均P<0.05)。UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA与NF-κΒmRNA表达呈正相关(P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA与改良Mayo评分呈正相关(均P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分是活动期UC患者发生重度病情的危险因素(均P<0.05)。FoxM1、NF-κΒmRNA两项联合预测活动期UC患者发生重度病情的曲线下面积(AUC)高于FoxM1、NF-κΒmRNA各自单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:FoxM1、NF-κΒmRNA在活动期UC患者结肠黏膜组织中呈高表达,且病情越重两者升高趋势越明显,可用于预测活动期UC患者重度病情的发生。

叉头框蛋白M1和程序性细胞死亡受体1配体在胃癌组织中的表达及其与临床预后的相关性研究

目的 分析叉头框蛋白M1(FOXM1)和程序性细胞死亡受体1配体(PD-L1)在胃癌组织中表达及其与临床预后的相关性。方法 选取2017年7月~2019年7月间本院接受手术治疗的胃癌病人在术中切除的胃癌组织及相应癌旁组织124例;FOXM1和PD-L1 mRNA表达采用qRT-PCR检测;FOXM1和PD-L1蛋白表达采用免疫组化法检测;采用Kaplan-Meier生存曲线分析FOXM1和PD-L1与预后的关系;采用Cox回归分析影响胃癌病人预后的危险因素。结果 胃癌组织中FOXM1和PD-L1 mRNA表达水平和蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中FOXM1和PD-L1表达与TNM分期和浸润深度有关(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析表明,胃癌组织FOXM1和PD-L1阳性表达病人3年生存率(39.47%)均低于阴性表达(62.50%),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析表明,FOXM1阳性表达和PD-L1阳性表达是影响胃癌病人预后的危险因素(P<0.05)。结论 FOXM1和PD-L1在胃癌组织中表达升高,与病人临床病理特征和预后密切相关,是影响胃癌病人预后的危险因素。

老年心力衰竭并发肺炎患者血清FOXM1和IGF2表达水平及与预后价值研究

目的探究血清叉头盒蛋白M1(forkhead box protein M1,FOXM1)和胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)表达对老年心力衰竭合并肺炎患者预后的预测价值。方法将邯郸市中心医院2021年3月~2022年6月收治的126例老年心力衰竭并发肺炎患者设为病例组,并根据随访情况将122例患者分为预后不良组(n=33)和预后良好组(n=89),另选取该院同期126例健康体检者为对照组。检测两组(病例组和对照组)血清FOXM1和IGF2水平,检测病例组用力肺活量(forced vital capacity,FVC)和第一秒用力呼容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)。采用Spearman分析法分析老年心力衰竭并发肺炎患者血清FOXM1和IGF2水平与心功能分级的相关性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清FOXM1和IGF2水平对老年心力衰竭并发肺炎患者预后的预测价值。结果与对照组比较,病例组血清FOXM1(2.39±0.55 vs 1.06±0.21)和IGF2(71.33±7.96pg/ml vs 47.82±5.14pg/ml)水平明显较高,差异有统计学意义(t=25.358,27.581,均P<0.05);与预后良好组比较,预后不良组血清FOXM1(3.87±1.06 vs 1.95±0.51)和IGF2水平(85.88±9.54pg/ml vs 69.14±8.73pg/ml)明显较高,差异具有统计学意义(t=13.453,9.174,均P<0.05);预后良好组和预后不良组心功能分级比较差异有统计学意义(χ^(2)=7.120,P<0.05),且与预后不良组比较,预后良好组FEV1(1.24±0.32L vs 1.08±0.25L)和FEV1/FVC(55.46%±5.77%vs 52.30%±5.38%)明显较高,差异有统计学意义(t=2.592,2.735,均P<0.05);老年心力衰竭并发肺炎患者血清FOXM1水平和IGF2水平与心功能分级呈显著正相关(r=0.496,0.517,均P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清FOXM1单独预测老年心力衰竭并发肺炎患者预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.854(95CI%:0.779~0.912),其敏感度、特异度分别为75.76%,86.52%,最佳截断值为2.75;IGF2单独预测老年心力衰竭并发肺炎患者预后的AUC为0.874(95CI%:0.802~0.927),其敏感度、特异度分别为72.73%,85.39%,最佳截断值为78.30 pg/ml;二者联合预测老年心力衰竭并发肺炎患者预后的AUC显著大于血清FOXM1和IGF2单独诊断的AUC(Z=2.413,2.737,P=0.006,0.016)。结论血清FOXM1和IGF2水平在老年心力衰竭并发肺炎患者中升高,且二者联合检测对患者预后具有较高的预测价值。

超声造影联合血清Ficolin-3,FOXM1对2型糖尿病下肢动脉病变的诊断价值分析

目的超声造影联合血清纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)、叉头框蛋白M1(FOXM1)对2型糖尿病(T2DM)下肢动脉病变的诊断价值分析。方法选取2022年2月至2023年2月我院收治的T2DM患者114例,以下肢动脉血管造影检查为金标准,将患者分为下肢动脉病变组23例(病变组)和无下肢动脉病变组91例(T2DM组),另选取同期于本院进行体检的健康志愿者91例为对照组。对患者及健康志愿者进行血清Ficolin-3、FOXM1及超声造影检查;ROC曲线分析血清Ficolin-3、FOXM1对T2DM下肢动脉病变的诊断价值;采用四格表法分析血清Ficolin-3、FOXM1、超声造影及3项联合对T2DM下肢动脉病变的诊断价值。结果病变组、T2DM组血清Ficolin-3水平显著高于对照组,且病变组血清Ficolin-3水平显著高于T2DM组(均P<0.05);病变组、T2DM组血清FOXM1水平显著低于对照组,且病变组血清FOXM1水平显著低于T2DM组(均P<0.05);血清Ficolin-3诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.868,敏感度为86.96%,特异度为75.82%,最佳截断值为35.12μg/ml;血清FOXM1诊断T2DM下肢动脉病变的曲线下面积为0.854,敏感度为82.61%,特异度为78.02%,最佳截断值为0.57;血清Ficolin-3、FOXM1检查结果与金标准均具有中度一致性(Kappa=0.480、0.481,均P<0.001);超声造影检查结果显示,T2DM下肢动脉病变的阳性检出率为73.91%,与金标准具有较高一致性(Kappa=0.631,P<0.001);3项联合检测的敏感度、漏诊率均显著优于超声造影单独诊断,准确度显著优于Ficolin-3、FOXM1单独诊断,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论血清Ficolin-3、FOXM1联合超声造影检查在T2DM下肢动脉病变诊断中的应用价值较高,进一步提升了诊断的敏感度、准确度,减少了误诊率。

缺血性疾病患者血清lncRNA PVT1和FOXM1表达水平及联合心脏磁共振延迟强化成像与预后的关系

目的 探讨缺血性疾病患者血清长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(lncRNA PVT1)和叉头框转录因子M1(FOX M1)表达水平及联合心脏钆对比剂延迟增强磁共振成像(LGE-MRI)与预后的关系。方法 选取2021年2月-2022年2月我院收治的缺血性心脏病患者118例即为研究组,随访一年根据随访过程中是否发生主要心脏不良事件(MACE),分为MACE组32例,无MACE组86例。同期选择在我院体检健康的志愿者118例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA PVT1的相对表达量。采用酶联免疫吸附试验(E LISA)检测FOXM1水平。受试者工作特征(ROC)曲线分析LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1对缺血性心脏病患者预后发生MACE的预测价值。结果 研究组患者DBP、SBP、TG、TC、 LDL-C、GLU水平与对照组相比显著升高,HDL-C水平显著降低(P<0.05)。与对照组相比,研究组的血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平显著升高(P<0.05)。与无MACE组相比,MACE组患者DBP、SBP、TC、LDL-C水平显著升高, HDL-C水平显著降低(P<0.05)。与无MACE组相比,MACE组患者血清中lncRNA PVT1和FOXM1水平显著升高(P<0.05)。MACE组的LGE-MRI阳性数量显著高于无MACE组(P<0.)05。与LGE-MRI、血清lncRNA PVT1和FOXM1单独预测相比,三者联合预测MACE发生的AUC更高(Z=7.221,P<0.001;Z=7.737,P<0.001;Z=7.091,P<0.001)。结论 缺血性心脏病预后发生MACE的患者血清lncRNA PVT1和FOXM1水平呈高表达,二者联合LGE-MRI对MACE的发生有一定的预测价值。

miR-21及FOXM1在妊娠期高血压与子痫前期患者血清中的表达

目的探讨微小RNA-21(miR-21)及叉头框蛋白M1(FOXM1)在妊娠期高血压(GHT)与子痫前期(PE)患者中的表达及意义。方法选取妊娠期高血压疾病(HDP)患者150例,其中GHT患者112例作为GHT组、PE患者38例作为PE组,选择年龄及孕周匹配同期产检正常孕妇150例作为对照组;3组均于入组当天采集晨空腹外周静脉血4 mL,检测血清miR-21及FOXM1水平;分析GHT组及PE组患者血清miR-21与FOXM1 mRNA的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)计算曲线下面积(AUC),评估PE的影响因素;分析miR-21及FOXM1 mRNA对PE的预测价值及对妊娠结局的影响。结果PE组、GHT组血清miR-21及FOXM1 mRNA水平低于对照组,PE组低于GHT组(P<0.05);PE组、GHT组miR-21与FOXM1 mRNA均呈正相关(P<0.05);miR-21及FOXM1 mRNA是PE的独立保护因素(P<0.05);基于miR-21及FOXM1 mRNA构建的风险模型评估PE的AUC值为0.841,高于miR-21及FOXM1 mRNA单独评估的AUC值(P<0.05);PE组不良妊娠结局发生率高于GHT组(χ^(2)=4.053,P=0.044),不良妊娠结局患者血清miR-21及FOXM1 mRNA水平低于正常妊娠者(P<0.05)。结论miR-21表达降低可能会靶向下调FOXM1 mRNA表达,促进GHT与PE的发生、发展,且与不良妊娠结局有关。

circFOXM1作为新型胃癌标志物调控胃癌发生、发展的机制研究

目的分析新型胃癌标志物环状叉头框蛋白M1(circFOXM1)在胃癌发生、发展机制中的调控作用。方法选取2022年1月至2023年4月该院肿瘤科收治的60例胃癌患者作为研究对象,检测其胃癌组织及癌旁组织中circFOXM1的表达水平。根据circFOXM1的表达水平,将60例患者分为circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组。比较circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组的临床病理资料(淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹法检测GES-1、HGC-27、BGC-823、MKN-45、MKN-1细胞中circFOXM1信使RNA(mRNA)、微小RNA(miR)-182-5p mRNA与母亲信号蛋白同源物7(SMAD7)mRNA及SMAD7蛋白的表达水平。体外培养MKN-45细胞,将其随机分为对照组、circFOXM1敲低组[转染circFOXM1小干扰RNA(siRNA)质粒]、circFOXM1过表达组(转染circFOXM1过表达质粒)、共转染阴性对照组(转染空载质粒和miR-182-5p抑制剂阴性对照)、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组(转染circFOXM1 siRNA质粒和miR-182-5p抑制剂),分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组MKN-45细胞circFOXM1 mRNA、miR-182-5p mRNA与SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白的表达水平;采用Transwell侵袭及细胞划痕试验检测各组MKN-45细胞侵袭迁移情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组MKN-45细胞增殖情况。取50只裸鼠随机分为对照小鼠组、circFOXM1敲低小鼠组、circFOXM1过表达小鼠组、共转染阴性对照小鼠组、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,每组10只。将各组MKN-45细胞接种在对应裸鼠右腋附近背部皮下构建胃癌移植瘤模型,饲养4周后检测各组移植瘤裸鼠MKN-45细胞增殖率、肿瘤体积及肿瘤质量。将MKN-45细胞随机分为野生miR-182-5p+空载组、野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组、突变miR-182-5p+空载组、突变miR-182-5p+circFOXM1过表达组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic组,再按照不同方式对各组MKN-45细胞进行转染。采用荧光素酶报告试验检测各组MKN-45细胞circFOXM1对miR-182-5p、SMAD7的靶向调控。结果circFOXM1低表达组有17例患者,circFOXM1高表达组有43例患者。circFOXM1低表达组和circFOXM1高表达组患者淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MKN-45、HGC-27、BGC-823、MKN-1细胞中circFOXM1 mRNA、SMAD7 mRNA、SMAD7蛋白表达水平均高于GES-1细胞,miR-182-5p mRNA表达水平均低于GES-1细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组circFOXM1 mRNA表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组和circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1过表达组,低于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平均低于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,均低于circFOXM1过表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低小鼠组MKN-45细胞增殖率低于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,肿瘤体积及肿瘤质量均小于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1过表达小鼠组MKN-45细胞增殖率高于对照小鼠组、肿瘤体积及肿瘤质量均大于对照小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组相对荧光素酶活性低于野生miR-182-5p+空载组(P<0.05)。野生SMAD7+miR-182-5p mimic组相对荧光素酶活性低于野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组(P<0.05)。结论敲低circFOXM1可经上调miR-182-5p而抑制表达SMAD7,从而抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及其体内肿瘤生长,可作为胃癌的新型标志物。

FOXM1靶向HMMR对骨肉瘤细胞凋亡和自噬影响

目的探讨叉头盒M1(FOXM1)转录因子通过靶向透明质酸介导的运动受体(HMMR)对骨肉瘤(OS)细胞凋亡和自噬的影响。方法使用慢病毒载体构建敲低FOXM1和过表达HMMR的OS细胞系,将转染空载慢病毒的细胞作为对照组,转染sh-FOXM1慢病毒的细胞作为敲低FOXM1组,转染sh-FOXM1慢病毒和OE-HMMR慢病毒的细胞作为过表达HMMR组。采用Western blot方法检测正常成骨细胞(hFOB1.19)和OS细胞(U-2OS)中FOXM1蛋白的表达;通过流式细胞术检测对照组、敲低FOXM1组和过表达HMMR组U-2OS细胞的凋亡率;采用Western blot方法检测对照组和敲低FOXM1组OS细胞中HMMR蛋白、自噬蛋白(LC3Ⅰ/Ⅱ)、凋亡相关蛋白(Cleaved-Caspase3、Bax)的表达以及过表达HMMR组OS细胞中自噬蛋白(LC3Ⅰ/Ⅱ)的表达。结果FOXM1在U-2OS细胞中的表达明显高于hFOB1.19细胞(t=38.780,P<0.005)。与对照组相比,敲低FOXM1组U-2OS细胞凋亡率显著增加(t=3.517,P<0.05),Cleaved-Caspase3、Bax、LC3Ⅰ/Ⅱ和HMMR蛋白表达显著下降(t=3.155~6.334,P<0.05),而过表达HMMR恢复了敲低FOXM1导致的凋亡率增加和自噬抑制(F=31.00、160.20,P<0.05)。结论FOXM1敲低通过降低HMMR蛋白的表达促进OS细胞凋亡和抑制OS细胞自噬。

食管癌组织中FOXM1和RNF2表达与临床病理参数及预后的相关性分析

目的探讨食管癌组织中叉头盒蛋白M1(FOXM1)和环指蛋白2(RNF2)表达与临床病理参数及预后的相关性。方法选取我院2018年1月至2019年12月期间收治的120例食管癌患者作为研究对象,收集术中切除的食管癌组织标本及癌旁组织标本。另选取45例食管癌患者并收集术中切除的食管癌组织标本作为验证组。检测食管癌组织及癌旁组织中FOXM1和RNF2的表达水平,分析二者相关性及其与患者预后状态的关系,并探讨影响食管癌患者预后状态的影响因素。结果食管癌组织中FOXM1和RNF2表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);食管癌组织FOXM1和RNF2表达水平呈正相关(r=0.625,P<0.05);FOXM1高表达组及RNF2高表达组TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、发生淋巴结转移、浸润深度为深层的食管癌患者所占比例高于FOXM1低表达组及RNF2低表达组(P<0.05);癌组织中呈现出FOXM1低表达及RNF2低表达的食管癌患者其3年生存率(47.45%、48.33%)明显高于FOXM1高表达和RNF2高表达者(27.87%、26.67%)( χ^(2)=4.302、6.009,P=0.038、0.014);TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、FOXM1及RNF2是食管癌患者死亡的危险因素(P<0.05);验证组中,FOXM1高表达组和RNF2高表达组发生淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、浸润深度为深层的患者所占比例分别高于FOXM1低表达组和RNF2低表达组(P<0.05),而3年生存率则分别低于FOXM1低表达组和RNF2低表达组(P<0.05)。结论FOXM1和RNF2在食管癌患者癌组织中的表达水平与其临床病理特征及3年生存率有关。

吉马酮通过FOXO3-FOXM1轴调控甲状腺癌BCPAP细胞的增殖、迁移和化疗耐药

目的:探究吉马酮通过叉头盒蛋白O3(FOXO3)-FOX亚类M1转录因子(FOXM1)信号通路调控人甲状腺癌细胞BCPAP和多柔比星(DOX)耐药BCPAP细胞(BCPAP/DOX)的增殖、迁移和化疗耐药。方法:常规培养BCPAP细胞,用BCPAP细胞构建BCPAP/DOX细胞,用MTT法检测不同浓度吉马酮对BCPAP和BCPAP/DOX细胞增殖的影响。将BCPAP和BCPAP/DOX细胞分为Ctrl组(空白对照)、sh-NC组(转染sh-NC质粒)、低浓度吉马酮组(0.10 mmol/L)、高浓度吉马酮组(0.15 mmol/L)、高浓度吉马酮(0.15 mmol/L)+sh-FOXO3组(转染sh-FOXO3质粒),用转染试剂将sh-NC质粒和sh-FOXO3质粒转至相应的BCPAP和BCPAP/DOX细胞中。用CCK-8法、划痕愈合实验和WB法分别检测各组细胞的增殖、迁移能力,以及FOXO3、FOXM1、BAX、MMP-9和多药耐药-1(MDR-1)蛋白的表达。结果:在BCPAP和BCPAP/DOX细胞中成功地敲减了FOXO3的表达,低浓度和高浓度吉马酮均可显著抑制BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖、迁移能力,降低细胞中FOMX1、MMP-9或MDR-1(BCPAP/DOX细胞)蛋白的表达,提升FOXO3和BAX蛋白的表达(均P<0.05),与低浓度比较,高浓度吉马酮的作用更为显著(均P<0.05),敲减FOXO3后可部分逆转吉马酮对这两种细胞的作用(均P<0.05)。结论:吉马酮可能通过FOXO3/FOXM1信号通路调控BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖和迁移能力,降低BCPAP/DOX细胞化疗耐药性。

SF3B1/FOXM1信号通路调控细胞周期干预宫颈癌进展的机制研究

目的:基于剪接因子3B亚单位1(splicing-factor-3B-subunit-1,SF3B1)/叉头框蛋白M1(Forkhead Box M1,FOXM1)轴探讨调控细胞周期宫颈癌进展的作用机制。方法:通过转染SF3B1过表达质粒(SF3B1 overexpression plasmid,pSF3B1)和2个SF3B1特异性短发夹RNA(short hairpin RNA)(shSF3B1-1、shSF3B1-2)过表达HeLa细胞或敲低SiHa细胞SF3B1。通过试验和乙炔基-2'-脱氧尿苷分析细胞的增殖活力和增殖率。流式细胞术分析细胞周期分布。应用细胞周期聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)阵列分析、流式细胞术、染色质免疫共沉淀-定量聚合酶链式反应(chromatin immunoprecipitation-quantitative polymerase chain reaction,ChIP-qPCR)和荧光素酶实验明确SF3B1和FOXM1的靶向关系。结果:SF3B1过表达后,HeLa细胞的生长率和增殖能力均显著增加(P<0.05)。此外,SF3B1敲低后,SiHa细胞的生长率和增殖能力均显著降低(P<0.05)。在HeLa细胞中,与pENTER组相比,pSF3B1组细胞在细胞周期的G_(0)/G_(1)期降低。然而,在SiHa细胞系中,敲低SF3B1提高了G_(0)/G_(1)期比率。此外,SF3B1过表达促进了HeLa细胞中G_(1)期相关蛋白细胞周期蛋白D1表达,而敲低SF3B1抑制了SiHa细胞中周期蛋白D1表达。上调SF3B1表达明显增强FOXM1的表达,而下调SF3B1导致FOXM1的明显抑制。ChIP-qPCR分析进一步显示SF3B1在HeLa细胞系中与FOXM1启动子位点结合。在野生型FOXM1启动子中,与shNC组相比,荧光素酶活性在SF3B1敲低组中受到抑制(1.30±0.08 vs.0.73±0.02、0.70±0.04,均P<0.01),突变型FOXM1启动子不能在SiHa细胞中引发对shSF3B1的应答。HeLa细胞的增殖能力通过SF3B1过表达而增强(shNC+pENTER vs.shNC+pSF3B1:25.1±1.9 vs.61.2±3.8,P<0.01),并被shFOXM1降低(shNC+pSF3B1 vs.shFOXM1+pSF3B1:61.2±3.8 vs.18.5±1.9,P<0.001),并且SF3B1过表达诱导的细胞G_(0)/G_(1)周期降低通过敲低FOXM1而部分逆转(shNC+pSF3B1 vs.shFOXM1+pSF3B1:35.0±1.5 vs.58.0±1.8,P<0.05)。结论:SF3B1可以作为宫颈癌中的潜在肿瘤促进基因,其可能通过上调FOXM1的表达来促进宫颈癌细胞增殖并扰乱细胞周期。

布托啡诺调节FOXO3-FOXM1信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的实验研究

目的探究布托啡诺(BUT)调节叉头框蛋白O3(FOXO3)-叉头框蛋白M1(FOXM1)信号轴对骨肉瘤细胞生物活性和化疗药物耐药性的影响。方法将2.0μmol/L顺铂(CDDP)处理的CDDP耐药MG-63细胞(MG-63/CDDP)分为对照组(MG-63/CDDP细胞用含0.05g/dl DMSO培养液处理)、BUT组(40μg/ml BUT处理MG-63/CDDP细胞)、JY-2组(用100μmol/L FOXO3-FOXM1抑制剂JY-2处理MG-63/CDDP细胞)和BUT+JY-2组(用40μg/ml BUT以及100μmol/L JY-2处理MG-63/CDDP细胞)。CCK8法检测MG-63/CDDP细胞活性;流式细胞术检测MG-63/CDDP细胞凋亡情况;Transwell法检测MG-63/CDDP细胞迁移、侵袭情况;Western blot检测自噬蛋白以及FOXO3-FOXM1信号通路相关蛋白表达。结果与MG-63细胞相比,MG-63/CDDP细胞IC50增加(20.56±2.52μmol/L vs 0.97±0.10μmol/L),差异具有统计学意义(q=19.017,P<0.05),筛选出较适浓度1μmol/L CDDP用于后续实验。与对照组相比,BUT组MG-63/CDDP细胞A值(0.43±0.05 vs 0.68±0.06),细胞迁移数量(63.63±7.58个vs114.56±10.57个)以及侵袭数量(43.38±4.58个vs 79.56±8.48个)、自噬相关蛋白Beclin1(0.31±0.05 vs 0.62±0.07)和微管相关蛋白轻链3(LC3)-II/I蛋白(0.51±0.08 vs 0.98±0.11)水平均下降(q=6.763~9.591,均P<0.05),凋亡率(28.57%±3.14%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.72±0.08 vs 0.33±0.04),FOXM1(1.22±0.15 vs 0.70±0.08)蛋白水平均上升(q=14.077,10.681,7.493,均P<0.05),而JY-2组MG-63/CDDP细胞A值(0.99±0.13 vs0.68±0.06),细胞迁移数量(147.59±15.37个vs 114.56±10.57个)以及侵袭数量(111.83±12.58个vs 79.56±8.48个),Beclin1(0.94±0.11 vs 0.62±0.07),LC3-II/I蛋白(1.27±0.13 vs 0.98±0.11)水平均升高(q=4.171~6.012,均P<0.05),凋亡率(4.56%±0.86%vs 8.67%±1.46%),FOXO3(0.17±0.01 vs 0.33±0.04),FOXM1(0.46±0.03 vs 0.70±0.08)蛋白水平降低(q=5.941,9.505,6.881,均P<0.05),差异具有统计学意义。JY-2逆转了BUT对MG-63/CDDP细胞活性和化疗耐药性的有利影响。结论BUT可能通过激活FOXO3-FOXM1信号通路调节骨肉瘤细胞的细胞活性和CDDP耐药性。

FOXM1通过调节KIF20A介导巨噬细胞M2极化对食管鳞状细胞癌细胞的作用

目的 探究叉头转录因子(FOX)M1和驱动蛋白家族(KIF)20A对食管鳞状细胞癌细胞的作用及其可能的作用机制。方法 体外培养正常食管上皮细胞(Het-1A)、人食管鳞状细胞癌细胞(KYSE70)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)。佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞产生M0巨噬细胞。将M0巨噬细胞与KYSE70细胞共培养以获得肿瘤相关巨噬细胞(TAM),收集共培养上清液处理KYSE70细胞,分为空白对照组(不进行转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-FOXM1组(转染si-FOXM1)、si-NC+oe-NC组(转染si-NC和oe-NC)、si-FOXM1+oe-NC组(转染si-FOXM1和oe-NC)、si-NC+oe-KIF20A组(转染si-NC和oe-KIF20A)、si-FOXM1+oe-KIF20A组(转染si-FOXM1和oe-KIF20A),荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀(ChIP)-PCR实验检测FOXM1对KIF20A的转录调控作用;实时荧光定量(qRT)-PCR和Western印迹检测FOXM1、KIF20A、精氨酸(Arg)-1、白细胞介素(IL)-10、E-钙黏蛋白(cadherin)和N-cadherin表达;流式细胞术检测TAM细胞中CD68^(+)/CD206^(+)细胞率;EdU实验检测细胞增殖;CCK-8检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果 与Het-1A组相比,KYSE70组细胞中FOXM1和KIF20A表达明显升高(P<0.001)。FOXM1通过靶向结合KIF20A启动子区域调节KIF20A表达。与si-NC+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-NC组TAM细胞中CD68^(+)/CD206^(+)细胞率、Arg-1和IL-10蛋白表达明显降低(P<0.05),si-NC+oe-KIF20A组变化明显升高(P<0.05);与si-FOXM1+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-KIF20A组TAM细胞中CD68^(+)/CD206^(+)细胞率、Arg-1和IL-10蛋白表达明显升高(P<0.05)。用共培养上清液处理KYSE70细胞,与空白对照组相比,TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力受到明显促进(P<0.05);与si-NC+oe-NC+TAM组相比,si-FOXM1+oe-NC+TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力明显抑制,而si-NC+oe-KIF20A+TAM组明显促进(P<0.05);与si-FOXM1+oe-NC+TAM组相比,si-FOXM1+oe-KIF20A+TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力受到明显促进(P<0.05)。结论 FOXM1通过上调KIF20A表达促进巨噬细胞M2极化从而促进KYSE70细胞增殖和转移。

AECOPD患者血清FOXM1和CCR5水平与肺功能及预后的预测价值研究

目的探讨叉头框蛋白M1(fork head box M1,FOXM1),CC趋化因子受体5(CC chemokine receptor 5,CCR5)对老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者肺功能及预后的评估价值。方法选取2022年1月~2023年1月岳阳市人民医院收治的128例AECOPD患者作为急性加重期组,选择同期收治的135例稳定期COPD患者作为稳定期组,年龄、性别相仿的120例健康体检志愿者为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中FOXM1和CCR5的表达水平,肺活量计检测肺功能指标。Pearson法分析AECOPD患者血清FOXM1,CCR5与肺功能指标的相关性;多因素Logistic回归分析筛选AECOPD患者预后影响因素,受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析FOXM1,CCR5水平对AECOPD患者预后不良的评估价值。结果AECOPD组患者和稳定期组患者血清中CCR5(49.36±12.31 ng/ml,34.25±8.87 ng/ml),FOXM1(40.21±10.74 pg/ml,23.38±5.77 pg/ml)水平较对照组(14.55±4.58 ng/ml,15.06±3.55 pg/ml)明显升高,FEV1(1.15±0.13 L,1.67±0.19 L),FVC(2.93±0.30 L,3.28±0.36 L),FEV1/FVC(39.25%±3.97%,50.91%±5.01%)较对照组(1.95±0.26 L,3.57±0.44 L,54.62%±5.20%)下降,差异具有统计学意义(F=111.034~641.907,均P<0.05)。血清FOXM1,CCR5水平随着肺功能分级加重而逐渐升高,肺功能指标FEV1,FVC水平随着肺功能分级加重而逐渐降低,差异具有统计学意义(F=31.27,49.37;42.72,29.48,均P<0.05)。血清FOXM1,CCR5表达与FEV1,FVC,FEV1/FVC呈负相关(r=-0.639~‐0.479,均P<0.05)。Logistic回归分析发现,CCR5[OR(95%CI):3.380(1.944~5.876)],FOXM1[OR(95%CI):5.711(3.175~10.273)],APACHEⅡ评分[OR(95%CI):2.132(1.243~3.60)],肺功能分级[OR(95%CI):2.017(1.007~4.037)]为预后不良发生的危险因素(均P<0.05),FEV1[OR(95%CI):0.649(0.441~0.955)],FVC[OR(95%CI):0.120(0.073~0.198)]为预后不良发生的保护因素(均P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清FOXM1,CCR5水平预测AECOPD患者预后不良的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.821,0.831,二者联合预测的AUC为0.895,高于单一指标检测(Z=2.800,2.654,均P<0.05)。结论FOXM1和CCR5在AECOPD患者血清中均呈高水平,早期检测二者可作为评估AECOPD患者肺功能及预后不良的血清标志物。

过表达叉头盒F1对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制实验研究

目的:探讨过表达叉头盒F1(FOXF1)对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,并初步探究其分子机制。方法:选取肝癌细胞(MHCC-97H和Huh7细胞)为实验细胞,分别设立vector组(转染空白载体)和ov-FOXF1组(转染FOXF1过表达载体)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western bolt检测转染后FOXF1 mRNA及蛋白表达。采用MTT法检测肝癌细胞增殖。采用流式细胞术检测肝癌细胞周期和细胞凋亡。采用Western bolt检测Wnt5a/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果:ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞FOXF1 mRNA和蛋白表达量高于vector组(均P<0.05)。转染后48、72 h,ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞增殖受到抑制(均P<0.05)。与vector组比较,ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞G_(0)/G_(1)期细胞比例升高,S期细胞比例降低(均P<0.05)。ov-FOXF1组G_(2)/M期Huh7细胞比例较vector组降低(P<0.05)。MHCC-97H细胞两组G_(2)/M期细胞比例比较差异无统计学意义(均P>0.05)。ov-FOXF1组Huh7和MHCC-97H细胞凋亡比例高于vector组(均P<0.05)。与vector组比较,ov-FOXF1组FOXF1、active Caspase-3蛋白表达增加,Wnt5a、β-catenin、c-myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:FOXF1过表达能够抑制肝癌细胞的增殖及周期进展,促进细胞凋亡,其机制可能与调控Wnt5a/β-catenin通路及细胞周期相关蛋白等有关。

微小RNA-325-3p和叉头框蛋白M1在胃腺癌中的表达及靶向关系研究

目的:探究微小RNA-325-3p(miR-325-3p)与叉头框蛋白M1(FOXM1)在胃腺癌中的表达,分析miR-325-3p与FOXM1的靶向关系。方法:选择人胃腺癌MGC-803、SGC-7901细胞系,分别构建miR-325-3p mimic组、miR-325-3p inhibitor组,并设立空白对照组,应用Western blot法检测FOXM1蛋白的表达,应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-325-3p与FOXM1的靶向关系。收集确诊为胃腺癌并行根治术的42例患者的肿瘤组织和距肿物边缘>2 cm的癌旁正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-325-3p的表达,应用免疫组化染色(EnVision法)检测组织中FOXM1的表达。结果:胃癌MGC-803和SGC-7901细胞系miR-325-3p mimic组FOXM1蛋白表达明显低于空白对照组,miR-325-3p inhibitor组FOXM1蛋白表达明显高于空白对照组(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-325-3p与FOXM1具有靶向关系。胃腺癌组织中miR-325-3p相对表达量明显低于癌旁正常胃黏膜组织,FOXM1阳性率明显高于癌旁正常胃黏膜组织(均P<0.05)。miR-325-3p和FOXM1在胃腺癌不同肿瘤最大径、浸润深度方面比较差异有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-325-3p与FOXM1呈负相关(r=-0.630,P=0.027)。结论:胃腺癌中miR-325-3p与FOXM1异常表达,参与肿瘤的形成和进展。miR-325-3p与FOXM1具有靶向调控关系。

叉头结构域抑制物6(FDI-6)通过下调细胞核FoxM1增加喉癌细胞凋亡并抑制其侵袭和迁移

目的探讨新型小分子抑制剂叉头结构域抑制物6(FDI-6)对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法采用MTT法检测(5、10、20、40、80)μmol/L FDI-6处理12、24 h后,Hep-2细胞的增殖情况。采用流式细胞术检测(10、20)μmol/L FDI-6处理Hep-2细胞24 h后细胞凋亡情况,TranswellTM法检测细胞侵袭、迁移能力的变化。实时荧光定量PCR检测叉头盒M1(FoxM1)的mRNA水平,Western blot法检测FoxM1、Bcl-2、BAX的蛋白水平。结果 FDI-6可明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性。与对照组相比,FDI-6组可诱导Hep-2细胞凋亡,抑制细胞的侵袭和迁移,且浓度越大,抑制作用越明显。FDI-6处理喉癌Hep-2细胞24 h后,FoxM1 mRNA和蛋白水平无明显改变。Bcl-2蛋白水平下降,BAX蛋白水平升高,而在细胞核中FoxM1的蛋白水平随FDI-6浓度升高而降低。结论 FDI-6可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖、侵袭、迁移,并诱导细胞凋亡,可能与下调细胞核中FoxM1有关。

新的促炎癌转化标志物:叉头框M1

慢性非可控性炎症的长期存在是炎癌转化的诱因之一,约超过20%的人类癌症与其关联。叉头框(FOX)家族成员FOXM1可以调节基因转录,参与包括代谢、发育和分化等一系列过程,并且在肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌和宫颈癌等绝大多数癌症中均呈显著高表达。FOXM1不仅可诱导细胞因子分泌和细胞自噬,激活炎症通路如信号转导与转录激活蛋白3(STAT3)和核因子κB(NF-κB)等,还能够促进炎癌转化,进而加速癌细胞增殖和侵袭/迁移。FOXM1能调控多种肿瘤进程,且具有促进炎症的作用及相关机制,这提示FOXM1可能成为促进炎癌转化的新标志物。据此,本文主要就FOXM1促进炎癌转化的作用及其机制进行综述。

叉头框M1调控circNOTCH1对胃癌细胞增殖、侵袭及耐药性的影响

目的探讨叉头框M1(FOXM1)调控环状RNA circ_NOTCH1对胃癌细胞增殖、侵袭及耐药性的影响。方法采用Western blot、实时荧光定量PCR分别检测胃癌及癌旁组织、人正常胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞系MGC-803、HGC-27、BGC-823中FOXM1蛋白及circ_NOTCH1表达。将BGC-823细胞分为对照组、短发夹RNA FOXM1(sh-FOXM1)及阴性对照(sh-NC)组、小干扰RNA circ_NOTCH1(si-circ_NOTCH1)及阴性对照(si-NC)组、sh-FOXM1+circ_NOTCH1过表达质粒(sh-FOXM1+pcDNA-circ_NOTCH1)及sh-FOXM1+阴性对照(sh-FOXM1+pcDNA)组,采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭。各组细胞分别加入1.0 mg/L阿霉素处理48 h后分析细胞耐药性,Western blot检测FOXM1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、多药耐药基因1(MDR1)的表达,RNA下拉和RNA免疫沉淀检测FOXM1蛋白与circ_NOTCH1结合情况。结果与癌旁组织比较,胃癌组织FOXM1蛋白、circ_NOTCH1表达水平显著升高(P均<0.001);与GES-1细胞比较,MGC-803、HGC-27、BGC-823细胞FOXM1蛋白、circ_NOTCH1表达水平显著升高(P均<0.001)。与对照组和sh-NC组比较,sh-FOXM1组BGC-823细胞FOXM1蛋白、circ_NOTCH1、吸光度值、克隆形成率、细胞侵袭数量、细胞活力及PCNA、MRP1、MDR1蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P均<0.001);与对照组和si-NC组比较,si-circ_NOTCH1组BGC-823细胞circ_NOTCH1、吸光度值、克隆形成率、细胞侵袭数量、细胞活力及PCNA、MRP1、MDR1蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P均<0.001)。与sh-FOXM1组和sh-FOXM1+pcDNA组比较,sh-FOXM1+pcDNA-circ_NOTCH1组BGC-823细胞circ_NOTCH1、吸光度值、克隆形成率、细胞侵袭数量、细胞活力及PCNA、MRP1、MDR1蛋白表达显著升高,Bax蛋白表达显著降低(P均<0.001)。FOXM1蛋白可与circ_NOTCH1相互作用。结论干扰FOXM1可能通过下调circ_NOTCH1表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭及耐药性。

叉头盒N1(FoxN1)、 p63和自身免疫调节因子(AIRE)对胸腺增龄性萎缩进程的影响研究进展

随着年龄增长而发生的胸腺萎缩会导致增龄性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤及机会性感染等的发生。叉头盒N1(FoxN1)、p63和自身免疫调节因子(AIRE)等转录因子可以通过影响胸腺上皮细胞(TEC)的增殖、发育和分化过程,进而影响胸腺增龄性萎缩进程与T细胞的分化、发育和输出。我们总结了FoxN1、p63和AIRE转录因子的上下游靶点、影响其功能的微小RNA(miRNA)及相关信号通路参与调控胸腺增龄性萎缩的机制及新的治疗方案。