叉头盒O1(FoxO1)调节RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性

目的研究叉头盒O1(FoxO1)对RAW264.7巨噬细胞白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)启动子转录活性的调控作用。方法采用100 ng/m L脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞6、12、24 h,流式细胞术观察RAW264.7细胞活化过程中LAIR-1、CD11b以及细胞吞噬功能的变化。软件预测FoxO1与LAIR-1启动子之间存在结合位点。构建FoxO1fl/fl/Lys M-Cre小鼠,观察FoxO1敲除后,RAW264.7巨噬细胞LAIR-1的水平变化。构建LAIR-1基因启动子荧光素酶报告基因载体,转染FoxO1观察对其转录活性的影响。结果 LPS刺激后RAW264.7细胞活化,CD11b表达升高,吞噬能力增强,LAIR-1水平下调。成功构建了髓系细胞FoxO1基因敲除小鼠FoxO1fl/fl/Lys M-Cre,该小鼠LAIR-1 mRNA水平显著降低。软件预测发现在LAIR-1基因启动子区域存在潜在的FoxO1转录因子结合位点,荧光素酶报告基因证实FoxO1可激活LAIR-1启动子转录活性。结论 FoxO1可激活巨噬细胞LAIR-1启动子转录活性。

叉头盒转录因子O1基因多态性与中国重庆汉族人2型糖尿病相关性研究

目的 探讨叉头盒转录因子O1（FOXO1）基因单核苷酸多态性（SNPs）与中国重庆汉族人2型糖尿病（T2DM）的相关性.方法 （1）在无血缘关系的105名中国重庆汉族人中,采用PCR-RFLP和基因测序法,对FOXO1基因编码区和非编码区的15个SNPs进行筛查,连锁不平衡（LD）分析,构建单倍型.（2）选择重庆地区704名汉族人（414名T2DM患者,290名健康人）进行病例对照研究,对位于同一单倍域的5个SNPs进行基因型鉴定,分析SNPs及单倍型与T2DM的关联.结果 （1）共筛查到12个SNPs;外显子Thr488Asn在该人群中未发现多态现象.LD分析提示rs17592236、rs9577066、rs7986407、rs4581585和rs4325426位于同一单倍域内（D＇＞0.7）.（2）rs7986407、rs4581585与T2DM发病相关：rs7986407位点AA基因型个体T2DM患病风险是GG基因型的1.42倍（additive模式OR=1.420,95％CI：0.783～2.577,P=0.011）;rs4581585位点CC基因型个体T2DM患病风险是TT基因型的2.57倍（additive模式OR=2.571,95％CI：1.404～4.695,P=0.002）.年龄、体质量指数、血糖、血脂、胰岛素、Homa-IR和Homa-β等在不同基因型间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 FOXO1基因可能是中国重庆汉族人T2DM的易感基因.

甲状腺功能亢进激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用

【目的】探究甲亢激活心肌细胞β-catenin/FoxO1诱导大鼠心室重构的作用和机制。【方法】通过甲状腺激素(T40.1 mg/kg/day;腹腔注射)连续给药30 d构建甲亢诱导心室重构大鼠体内模型。利用β-catenin抑制剂MSAB(14 mg/kg)同时给药30 d,通过Western-blot检测心肌肥厚主要标志物ANP以及β-catenin、FoxO1等蛋白的表达情况;免疫荧光检测β-catenin、FoxO1的核内外表达及分布情况。利用原代培养的乳鼠心肌细胞,使用甲状腺激素(T320 nmol/L)处理心肌细胞24 h构建体外甲亢诱导心肌细胞肥厚模型,利用β-cateninsiRNA(30 nmol/L)转染心肌细胞敲低β-catenin,Western-blot和免疫荧光检测抑制β-catenin对甲亢诱导乳鼠心肌细胞肥厚的影响。【结果】Wnt/β-catenin通路激活后β-catenin入核增多并于细胞核内的转录因子结合发挥转录调控作用。β-catenin在甲亢诱导的大鼠心室重构模型心肌细胞核内表达显著增加,而其经典下游转录因子TCF7l2表达无显著差异。我们的结果显示,MSAB抑制β-catenin明显改善甲亢诱导的大鼠心室重构。进一步研究表明甲亢诱导大鼠心肌肥厚过程中心肌细胞β-catenin/FoxO1表达明显增强,抑制心肌细胞β-catenin/FoxO1改善甲亢诱导大鼠心肌肥厚。【结论】甲亢性心肌肥厚心肌细胞β-catenin/FoxO1活化,抑制β-catenin/FoxO1改善甲状腺激素诱导的心肌细胞肥大。

DNA高甲基化介导FOXO1转录表达下调促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力

目的:探索叉头盒O1(FOXO1)在鼻咽癌(NPC)中异常表达的分子机制,及其对NPC细胞恶性生物学行为的影响。方法:采用GEO数据集分析NPC中FOXO1表达水平,采用R4.2.1软件进行基因集富集分析。构建FOXO1过表达的NPC细胞系5-8F、HONE1(FOXO1-5-8F、Ctrl-5-8F、FOXO1-HONE1、Ctrl-HONE1)。分别通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术分析细胞周期。通过重亚硫酸氢盐基因测序技术进行DNA甲基化测序。结果:FOXO1 mRNA在NPC细胞和组织中表达下调。FOXO1过表达组的细胞增殖能力和细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.05),相同时间内,空白对照组的细胞侵袭数量高于FOXO1过表达组(P<0.05),FOXO1过表达抑制细胞周期(P<0.05)。在NPC组织中,FOXO1 DNA启动子区域存在甲基化位点,其甲基化水平明显高于非癌组织(P<0.05)。结论:NPC中FOXO1基因DNA高甲基化导致其转录下调,由此促进肿瘤细胞的增殖和侵袭。FOXO1可能是NPC的肿瘤抑制基因。

电针对MPTP诱导帕金森病小鼠FoXO1/NLRP3通路介导神经炎症的影响

目的探究电针对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)模型小鼠的作用机制是否与叉头盒蛋白O1(FoXO1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路介导的神经炎症相关。方法将30只小鼠随机分为对照组(Ctrl)、模型组(MPTP)、电针组(EA),每组10只。连续7 d腹腔注射MPTP 30 mg/(kg•d)制备PD小鼠模型。采用旷场实验及爬杆实验观察小鼠行为学;免疫组化观察小鼠中脑黑质α-突触核蛋白(α-syn)表达水平;蛋白免疫印迹测定Iba-1、FoXO1、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达水平;ELISA法检测中脑黑质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)炎症因子表达水平。结果MPTP组小鼠出现显著的行为学障碍,中脑黑质α-syn明显增加(P<0.01),Iba-1、FoXO1、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白水平升高(P<0.05,P<0.01),TNF-α、IL-1β含量明显增加(P<0.01)。EA治疗后能有效改善PD小鼠运动障碍,提高运动平衡及协调能力(P<0.01),减少α-syn的异常聚集(P<0.01),减轻小胶质细胞异常活化,缓解神经炎症(P<0.05)。结论电针可能通过调控FoXO1/NLRP3通路介导的神经炎症,在PD中发挥保护作用。

微小RNA⁃766对肝细胞癌细胞生物学行为和PI3K/AKT/FOXO1通路的影响

目的探讨微小RNA-766(miR-766)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号/叉头盒O1(PI3K/AKT/FOXO1)通路的影响。方法实时定量PCR(qPCR)检测HCC细胞的miR-766表达;向SMMC-7721细胞转染miR-766抑制剂来下调其表达,随后采用MTT和流式细胞术检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响,划痕和Transwell小室实验检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响,qPCR或Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(CC3)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)的表达,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-766和FOXO1的靶向关系。结果MiR-766在HCC细胞中的表达异常增高(P<0.05),下调miR-766明显抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力且促进细胞凋亡(P<0.05)。MiR-766直接靶向调控FOXO1表达,下调miR-766表达能够增加FOXO1和CC3表达,且抑制Bcl-2和p-AKT表达(P<0.05)。结论miR-766在HCC细胞中上调且可能通过调节PI3K/AKT/FOXO1通路转导来促进HCC进展,有望成为HCC的治疗潜在靶点。

LncRNA-NEAT1调控miR-182-5p表达对狼疮性肾炎肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核旁丛组装转录本1(NEAT1)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)中通过微小RNA(miR)-182-5p/叉头盒蛋白O1(FoxO1)/β-连环蛋白(β-catenin)轴对肾系膜细胞损伤的影响。方法收集2019年3月至2021年7月凉山州第二人民医院收治的32例LN患者(LN组)外周血和32例体检健康者(健康对照组)外周血,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞中NEAT1以及miR-182-5p、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量。采用20%LN患者血清处理肾系膜细胞的方法构建LN肾系膜细胞模型,造模完成后将细胞分为对照组(正常培养,不转染)、模型组(加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NC组(转染si-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(共转染si-NEAT1和anti-miR-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-182-5p组(共转染si-NEAT1和anti-miR-182-5p后加入5μg/mL脂多糖培养)。qRT-PCR法检测各组细胞NEAT1、miR-182-5p表达水平;ELISA法测定各组细胞炎症因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH含量;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测各组细胞增殖活力;流式细胞仪分析各组细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组细胞FoxO1、β-catenin蛋白表达水平。结果与健康对照组比较,LN组患者外周血单个核细胞中NEAT1、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平以及血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著上升,miR-182-5p表达水平显著下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组肾系膜细胞增殖活力、FoxO1和β-catenin蛋白水平以及LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显增加,miR-182-5p表达水平明显降低(P<0.05)。敲低NEAT1后,细胞增殖活力和炎症反应减弱,FoxO1和β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05);抑制miR-182-5p表达可减轻NEAT1敲低对LN肾系膜细胞模型细胞增殖、炎症因子及FoxO1、β-catenin蛋白表达的影响(P<0.05)。各组细胞间凋亡率无显著变化(P>0.05)。结论敲低NEAT1可通过靶向负调控miR-182-5p表达,抑制LN肾系膜细胞过度增殖,降低炎症反应,其可能与抑制FoxO1/β-catenin通路有关。

下调去甲基化酶FTO抑制人肝癌细胞系HepG2增殖

目的 探究去甲基化酶脂肪质量和肥胖相关基因(FTO)抑制对人肝癌细胞系HepG2增殖的作用机制。方法 将肝癌细胞系HepG2分为对照组(转染空质粒)、FTO组(转染FTO过表达质粒)、si-FTO组(转染si-FTO)、si-FTO+si-FoxO1组(同时转染si-FTO和si-FoxO1)。RT-qPCR检测细胞中FTO相对表达量;用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Dot blot检测m~6A甲基化水平;蛋白质印迹检测细胞中FoxO1蛋白表达。结果 通过人类癌基因库(TCGA)分析肝癌患者总体生存期发现FTO高表达提示更短的生存期(P<0.05)。和正常肝细胞系HL7702相比,HepG2细胞中FTO表达明显升高(P<0.05)。和对照组相比,si-FTO组细胞中FTO相对表达量明显降低,FTO组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05);和si-FTO组相比,si-FTO+si-FoxO1组细胞中FTO相对表达量明显升高(P<0.05)。si-FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m~6A相对表达量均低于对照组,细胞凋亡率、FoxO1蛋白表达均高于对照组(P<0.05);FTO组细胞活性、侵袭细胞数、m~6A相对表达量明显高于对照组,细胞凋亡率、FoxO1蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);si-FTO+si-FoxO1组细胞活性、侵袭细胞数目、m~6A相对表达量均高于si-FTO组,细胞凋亡率、FoxO1蛋白表达均低于si-FTO组(P<0.05)。结论 高表达FTO与临床预后较差相关,去甲基化酶FTO敲减可抑制肝细胞癌的增殖和侵袭,诱导肝细胞癌的凋亡,其作用机制可能和调控FoxO1表达有关。

分拣蛋白过表达通过沉默信息调节因子1/叉头盒蛋白O1通路减轻氧化型低密度脂蛋白诱导的肝窦内皮细胞内吞功能障碍的研究

目的探讨分拣蛋白(Sortilin)参与调控氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人肝窦内皮细胞(HLSECs)内吞功能障碍的作用机制。方法体外培养HLSECs,构建Sortilin慢病毒过表达载体(LV-Sortilin)及慢病毒空载体(LV-Con)并转染HLSECs。将细胞分为正常对照(NC)组、ox-LDL组、LV-Sortilin组和LV-Con组。LV-Sortilin及LV-Con感染HLSECs后,加入100μg/ml ox-LDL培养HLSECs 24 h,记为ox-LDL+LV-Sortilin组和ox-LDL+LV-Con组。分别用10μmol/L的EX527和1μmol/L的AS1842856处理LV-Sortilin和LV-Con感染的HLSECs 24 h后,记为ox-LDL+LV-Sortilin+EX527组、ox-LDL+LV-Con+EX527组、ox-LDL+LV-Sortilin+AS1842856组、ox-LDL+LV-Con+AS1842856组。荧光显微镜、RT-PCR和Western blot判断转染效率,CCK-8检测HLSECs活力,RT-PCR和Western blot检测各组Sortilin、沉默信息调节因子1(SIRT1)、叉头盒蛋白O1(FoxO1)、小窝蛋白1(CAV-1)mRNA和蛋白表达。结果LV-Sortilin重组体感染细胞72 h后,LV-Sortilin、LV-Con组细胞出现大量绿色荧光,NC组细胞无绿色荧光。LV-Sortilin组Sortilin mRNA和蛋白表达高于NC组(P<0.05)。与NC组比较,ox-LDL组Sortilin、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),CAV-1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),Ac-FoxO1蛋白表达升高(P<0.05)。与ox-LDL组、ox-LDL+LV-Con组比较,ox-LDL+LV-Sortilin组Sortilin、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),CAV-1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),Ac-FoxO1蛋白表达降低(P<0.05)。与ox-LDL+LV-Sortilin组比较,ox-LDL+LV-Sortilin+EX527、ox-LDL+LV-Sortilin+AS1842856组SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),CAV-1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),Ac-FoxO1表达升高(P<0.05)。结论Sortilin通过SIRT1/FoxO1途径调控CAV-1表达进而调控ox-LDL诱导的HLSECs内吞功能障碍,过表达Sortilin可抑制该病理反应。

FoxO1在小鼠感染流感病毒H1N1中的作用及机制

目的探讨叉头盒转录因子O1(forkhead box O1,FoxO1)在小鼠抵抗流感病毒H1N1感染中发挥的作用及机制。方法用琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠的基因型后,将小鼠分为2组:条件性敲除NKp46^(+)细胞中FoxO1基因的Foxo1^(△NK)组小鼠,以及对照组WT小鼠;2组小鼠使用滴鼻法同1天感染流感病毒H1N1,每天记录小鼠体质量及2组小鼠的死亡情况;在2组小鼠体质量及状态差异明显的第10天取样,HE染色法观察肺组织病理;Luminex液相芯片技术检测肺组织匀浆上清中36种细胞因子的表达情况;流式细胞术检测肺组织免疫细胞的比例变化。结果与WT组相比,感染流感病毒后Foxo1^(△NK)组小鼠死亡率增加,体质量下降更加严重;肺组织病理显示炎症反应减弱;肺组织匀浆上清中的细胞因子表达水平下降,ENA-78、IFN-α、IL-4、IL-5显著降低;肺组织免疫细胞中CD3^(+)NKp46^(+)NKT细胞比例显著下降。结论FoxO1基因的缺失加重了小鼠流感感染进程,可能是通过抑制依赖FoxO1基因调控的CD3^(+)NKp46^(+)NKT细胞相关免疫反应。

维生素D_(3)对小鼠支气管哮喘气道炎症和氧化应激反应的作用及其分子机制

目的探究维生素D_(3)(VitD_(3))在小鼠支气管哮喘气道炎症和氧化应激反应中的作用和相关分子机制。方法将28只雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组(Ctrl)和模型组。模型组小鼠采用卵清蛋白(OVA)致敏法建立哮喘模型后,将其分为哮喘(Asthma)组、VitD_(3)处理(Asthma+VitD_(3))组和叉头盒O1(FOXO1)抑制剂AS1842856处理(Asthma+AS)组。测定各组小鼠肺阻力(LR)变化。采用ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量。Western blot检测肺组织中FOXO1和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)和凋亡斑点蛋白(ASC)的表达水平。结果与Ctrl组相比,Asthma组小鼠的LR升高(P<0.01)。与Asthma组相比,Asthma+VitD_(3)组和Asthma+AS组小鼠的LR降低(P<0.05),Asthma+VitD_(3)组与Asthma+AS组小鼠的LR变化差异无统计学意义。与Ctrl组相比,Asthma组、Asthma+VitD_(3)组和Asthma+AS组小鼠BALF中TNF-α、IL-1β与IL-18含量均增加(P<0.01),肺组织中NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白表达水平均升高(P<0.01);与Asthma组相比,Asthma+VitD_(3)组和Asthma+AS组小鼠BALF中上述炎症因子含量均减少(P<0.05),肺组织中NLRP3、FOXO1、Caspase-1和ASC蛋白表达均降低(P<0.05);与Asthma+VitD_(3)组相比,Asthma+AS组中除FOXO1蛋白表达水平升高外(P<0.05),上述其他检测指标差异均无统计学意义。结论VitD_(3)可减轻OVA诱导的小鼠哮喘症状,改善气道炎症程度和降低氧化应激水平,且其机制可能与FOXO1/NLRP3轴的下调有关。

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对人原代成骨细胞JNK/FOXO1的影响

目的观察矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人原代成骨细胞增殖作用及对c-Jun氨基末端激酶/叉头盒蛋白O1(JNK/FOXO1)的影响。方法收集2017年6月至2018年6月沈阳医学院附属中心医院60~90周岁的骨质疏松且股骨颈或股骨粗隆间骨折行人工股骨头或全髋置换的患者的松质骨组织,分离培养体外成骨细胞。MTT法检测control组(含0μmol/L C3G的α-MEM培养液)、C3G组(含100μmol/L C3G的α-MEM培养液)人原代成骨细胞细胞的增殖活力;实时荧光定量PCR法检测control组和C3G组FOXO1、转录激活因子-4(ATF4)和骨保护素(OPG)mRNA表达的情况。使用JNK通路抑制剂(SP600125)对细胞进行处理,实时荧光定量PCR法检测SP600125-control组和SP600125+C3G组FOXO1 mRNA表达的情况。结果C3G组人原代成骨细胞增殖率高于control组,差异有统计学意义(P<0.05)。C3G组人原代成骨细胞FOXO1、ATF4和OPG mRNA表达量低于control组,差异有统计学意义(P<0.05)。SP600125-control组和SP600125-C3G组FOXO1的mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论C3G可能通过JNK通路影响FOXO1基因水平促进人原代成骨细胞增殖。

叉头盒家族转录因子o1抑制剂重塑七氟醚对糖尿病小鼠肾脏缺血再灌注保护效应的影响研究

目的观察七氟醚对糖尿病肾脏缺血再灌注损伤的影响,探讨叉头盒家族转录因子o1(Foxo1)的靶向抑制剂AS1842856对七氟醚糖尿病肾脏缺血再灌注保护效应的影响。方法40只C57雄性小鼠随机分为糖尿病假手术组(S组)、糖尿病肾脏缺血再灌注组(I组)、糖尿病肾脏缺血再灌注七氟醚处理组(I+S组)和糖尿病肾脏缺血再灌注AS1842856处理组(I+S+AS组),每组各10只。收集各组体重、饮食、饮水、血糖、血肌酐(Scr)及BUN水平;PAS染色评价损伤情况;Western blot法及qRT-PCR法检测各组肾组织中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Foxo1、p-Foxo1、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白、mRNA水平、Foxo1下游凋亡基因BCL2-Associated X的促凋亡蛋白(Bim)、Fas、糖异生基因葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、胰岛素转录因子肌腱膜纤维肉瘤爱吸引同系物A(MaFA)、神经源性分化因子1(NeuroD1)和胰十二指肠同源异形盒1(Pdx1)的mRNA水平。结果与I组比较,I+S+AS组Scr、BUN水平降低(P<0.05);p-Akt及p-Foxo1蛋白表达升高(P<0.05),Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05);Caspase-3及Foxo1下游调控因子Bim、Fas、G6Pase、PEPCK、MafA、NeuroD1的mRNA表达降低(P<0.05),Akt、Pdx1的mRNA表达升高(P<0.05)。结论肾脏缺血再灌注合并糖尿病时,七氟醚预处理肾脏缺血再灌注保护效应消失,Foxo1靶向抑制剂AS1842856可重塑七氟醚糖尿病肾脏缺血再灌注保护效应。

叉头转录因子O1调控胰岛发育和细胞分化的作用

叉头转录因子O1(FoxO1)在血管、脑、肌肉、脂肪、血液等多种组织的发育和细胞分化中发挥作用。FoxO1在胰岛β细胞中高表达,参与胰岛的胚胎发育,其可通过调控胰岛特异性转录因子的表达,调控胰岛的发育和功能;还可调控胰岛细胞的增殖和胰岛细胞的相互转化,本文对此作一综述。

miR-199a在妊娠糖尿病中的表达及参与胰岛素抵抗的作用机制研究

目的探究微小RNA(miR)-199a在妊娠糖尿病(GDM)中的表达及调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头盒转录因子O1(FOXO1)通路参与胰岛素抵抗(IR)的机制。方法GDM孕妇56例为GDM组,正常孕妇60例为正常孕妇组,实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组胎盘中miR-199a水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Pearson相关分析miR-199a与HOMA-IR的相关性。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo并建立IR模型。miR-199a功能验证:细胞依处理方式不同分为模型组、miRNA inhibitor NC组、miR-199a inhibitor组、miRNA mimic NC组、miR-199a mimic组;qPCR检测各组细胞中miR-199a表达情况,蒽酮法检测细胞内葡萄糖吸收量,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、乙酰化(Ac)-FOXO1蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-199a与SIRT1的靶向关系。结果与正常孕妇组比较,GDM组胎盘中miR-199a、HOMA-IR水平升高(P<0.05);GDM组miR-199a水平与HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。棕榈酸、胰岛素共同作用细胞24 h成功建立IR模型。与模型组和miRNA inhibitor NC组比较,miR-199a inhibitor组miR-199a、MDA水平降低,葡萄糖吸收量、SOD水平、SIRT1蛋白水平升高(P<0.05)。与模型组和miRNA mimic NC组比较,miR-199a mimic组miR-199a和Ac-FOXO1蛋白表达升高、MDA水平升高,葡萄糖吸收量、SIRT1蛋白水平降低(P<0.05)。Tarbase数据库分析显示,miR-199a与SIRT1存在互补的结合位点,并经双荧光素酶实验证实。结论GDM患者胎盘中miR-199a高表达,升高的miR-199a可通过靶向下调SIRT1而促进FOXO1乙酰化,导致IR。

MST1通过促进PEPCK的表达调控小鼠肝脏糖异生

目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)在小鼠肝脏糖异生途径中的作用及调节机制。方法RT-qPCR检测MST1 mRNA在糖尿病模型db/db小鼠和对照db/m小鼠肝脏组织中的表达。通过腺病毒感染小鼠肝原代细胞,检测MST1过表达后肝细胞的糖输出能力。在HepG2细胞中,运用荧光素酶报告基因实验检测MST1对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)编码基因的启动子活性的作用。利用干扰腺病毒在小鼠肝原代细胞中敲低叉头盒转录因子O1(FOXO1),检测MST1过表达对PEPCK mRNA水平的影响。结果MST1 mRNA在糖尿病db/db小鼠的肝脏组织中高表达(P<0.001)。在小鼠肝原代细胞过表达MST1促进了葡萄糖的输出(P<0.05)。在HepG2中,过表达MST1促进了PEPCK mRNA的表达(P<0.001)和启动子活性(P<0.01)。进而,当敲低FOXO1表达后,MST1诱导PEPCK mRNA表达的作用消失。结论MST1促进PEPCK表达参与调控小鼠肝脏糖异生依赖于FOXO1。

FOXO1在糖代谢和脂代谢及高甘油三酯血症中的作用

高甘油三酯血症与肥胖和2型糖尿病紧密相关。肥胖和2型糖尿病常伴随胰岛素抵抗,说明胰岛素抵抗可能是影响高甘油三酯血症的重要因素。胰岛素能够抑制叉头盒O1(Forkhead box protein O1,FOXO1)表达;而胰岛素抵抗状态下,FOXO1活性增加,且引起高甘油三酯血症。因此,本文将综述FOXO1在糖代谢和脂代谢及高甘油三酯血症中的作用,为治疗肥胖症和2型糖尿病患者的高甘油三酯血症提供新思路。

EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究

【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P<0.01),凋亡指数显著降低(P<0.05)。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低(P<0.01),LY294002组S期细胞比例显著降低(P<0.05);Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高(P<0.01),而LY294002组EECs细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。

丹芪益肾汤含药血清调控SIRT1/FoxO1通路对高糖诱导的肾系膜细胞氧化应激损伤的影响

目的:探讨丹芪益肾汤含药血清调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头盒蛋白O1(FoxO1)通路对高糖诱导的肾系膜细胞氧化应激损伤的影响。方法:制备丹芪益肾汤含药血清,体外培养人肾系膜细胞,将其分成6组:正常组(加入10%正常血清)、高糖组(加入30mmol/L葡萄糖和10%正常血清)、低、中、高剂量丹芪益肾汤含药血清组(分别加入30mmol/L葡萄糖和10%低、中、高剂量丹芪益肾汤含药血清)、高剂量丹芪益肾汤含药血清+EX527组(分别加入30mmol/L葡萄糖、10%高剂量丹芪益肾汤含药血清和100nmol/L SIRT1抑制剂EX527)。MTT法检测各组细胞活性;流式细胞仪测定细胞凋亡率;ELISA法检测细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;Western blot检测细胞中促凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2以及SIRT1/FoxO1通路蛋白表达水平。结果:与正常组比较,高糖组人肾系膜细胞活性、Bcl-2、SIRT1蛋白表达水平、SOD、GSH-Px含量显著降低,凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax、FoxO1表达水平、MDA、ROS含量显著升高(P<0.05)。与高糖组相比,低、中、高剂量丹芪益肾汤含药血清组人肾系膜细胞活性和Bcl-2、SIRT1蛋白表达水平、SOD、GSH-Px含量明显升高,细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax、FoxO1蛋白表达水平、MDA、ROS含量明显降低(P<0.05),且均表现为剂量依赖性。在高剂量丹芪益肾汤含药血清组中加入SIRT1抑制剂EX527后,细胞活性、Bcl-2、SIRT1蛋白表达水平及SOD、GSH-Px含量明显降低,凋亡率、caspase-3、caspase-9、Bax、FoxO1蛋白表达水平以及MDA、ROS含量显著上升(P<0.05)。结论:丹芪益肾汤含药血清可通过激活SIRT1/FoxO1通路,减缓高糖诱导的肾系膜细胞的氧化应激损伤。

白术提取物对db/db小鼠降血糖作用及机制研究

目的:研究白术提物对2型糖尿病db/db小鼠的治疗作用及其与GLP-1R可能的相关机制。方法:50只db/db小鼠随机分为模型对照组、白术提取物50、100、200 mg/kg组、二甲双胍150 mg/kg组,另取10只db/m小鼠作为正常对照组,各组小鼠分别灌胃给予相应的药物,给药第18 d测定口服葡萄糖耐量(OGTT),第21 d检测小鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等指标,计算血糖曲线下面积(AUC)、胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察肝脏细胞的病理改变情况,油红O染色观察肝细胞脂滴形成情况;Western blotting法检测小鼠肝组织中胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、叉头盒蛋白O1(FOXO1)与胰腺和十二指肠同源盒1(PDX-1)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组小鼠体质量增长显著增加(P<0.01),血清TG、TC、FBG、FINS、IL-1β和TNF-α含量显著升高(P<0.01),AUC和HOMA-IR显著升高而ISI显著降低(P<0.01),肝脏细胞明显病变,脂滴积聚,肝组织GLP-1R、p-PI3K和PDX-1蛋白表达显著下调,FOXO1的蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,白术提取物100、200 mg/kg组小鼠体质量增长明显降低(P<0.05或P<0.01),血清TG、TC、FBG、FINS、IL-1β和TNF-α含量显著降低(P<0.01),AUC和HOMA-IR显著降低(P<0.01),ISI显著升高(P<0.01),小鼠肝脏细胞病变程度明显改善,肝脏脂滴积聚减少,肝脏GLP-1R、p-PI3K和PDX-1蛋白表达显著上调,FOXO1的蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:白术提取物明显调节自发性2型糖尿病小鼠的糖脂代谢紊乱,增强胰岛素敏感性,改善炎症水平,缓解肝脏损伤和脂质沉积,其机制可能与上调肝组织GLP-1R的蛋白表达相关。