XELOX方案对结直肠癌根治术后患者叉头盒P3表达的影响

目的:探讨XELOX方案对结直肠癌根治术后患者叉头盒P3(FOXP3)表达的影响。方法:选取2020年9月~2022年4月30例结直肠癌根治术患者为研究对象。对所有受试者均开展术后XELOX方案化疗,分别于化疗前、化疗4次后以及化疗8次后采集外周血,借助流式细胞学分离外周血中T细胞,采用RT-PCR法检测FOXP3的表达水平。此外,比较所有患者化疗前后血清肿瘤标志物水平及不良反应发生情况。结果:化疗8次后患者的Treg比例以及FOXP3 mRNA表达均低于化疗前与化疗4次后,且化疗4次后Treg比例以及FOXP3 mRNA表达均低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05);化疗8次后患者血清CA199以及CEA水平均低于化疗前,差异有统计学意义(均P<0.05)。30例患者神经毒性2例,发生率为6.67%;白细胞减少1例,发生率为3.33%;中性粒细胞减少2例,发生率为6.67%;血小板减少3例,发生率为10.00%;恶心呕吐4例,发生率为13.33%;腹泻9例,发生率为30.00%;口腔黏膜炎6例,发生率为20.00%;肝肾功能异常5例,发生率为16.67%。结论:XELOX方案可有效下调结直肠癌根治术后患者FOXP3表达,促进肿瘤标志物的改善。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

结直肠癌组织STAT3、Foxp3、IL-6表达与临床病理特征的相关性

目的 检测结直肠癌组织中信号转导及转录因子3(STAT3)、叉头盒p3(Foxp3)及白细胞介素6(IL-6)蛋白的表达,分析其与结直肠癌临床病理特征间的关联。方法 选择44例结直肠癌患者的肿瘤组织作为实验组,记录患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤类型及淋巴结转移等病理临床参数,同时选择20例患者结直肠癌旁组织作为对照组;应用免疫组织化学法分析实验组和对照组中STAT3、Foxp3及IL-6的表达,分析3种蛋白的表达与临床病理特征的相关性及3种蛋白之前的相互关系。结果 实验组STAT3、Foxp3、IL-6蛋白的表达明显高于对照组,STAT3蛋白的表达与肿瘤分化程度有关,差异有统计学意义(P<0.05);Foxp3蛋白的表达与淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05);IL-6蛋白的表达与肿瘤分化程度有关,差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌肿瘤组织中STAT3、Foxp3和IL-6蛋白的表达无相关性,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌组织中STAT3、Foxp3和IL-6蛋白过量表达提示患者恶性程度高,转移可能性大,可以作为判断结直肠癌预后效果的重要参考指标之一。

全反式维甲酸促进急性肺损伤大鼠肺组织FOXP3表达减轻肺损伤

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对大鼠急性肺损伤(ALI)的治疗作用及叉头盒P3(FOXP3)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、 ALI模型组及ATRA处理组。ALI模型组和ATRA处理组经大鼠尾静脉注射5 mg/kg的脂多糖(LPS)建立ALI模型, ALI模型组在注射LPS前5 d,每天以橄榄油灌胃1次[0.5 mL/(kg·次)],注射LPS后,经腹腔注射橄榄油1 mL/kg;在注射LPS的前5 d, ATRA处理组的大鼠每天用含30 mg/kg ATRA的橄榄油灌胃,每天1次;注射LPS后,腹腔注射含5 mg/kg ATRA的橄榄油1 mL/kg。对照组给予生理盐水(0.5 mL/kg)。腹腔注射ATRA 12 h后,处死大鼠。HE染色观察肺组织病变情况,测定肺组织湿/干质量比(W/D)及大鼠动脉血氧分压(PaO2);反转录PCR检测大鼠肺组织FOXP3 mRNA水平, Western blot法检测肺组织FOXP3蛋白水平。结果与对照组相比, ALI模型组大鼠肺组织W/D增加,炎性细胞浸润显著增多;动脉PaO2明显降低,大鼠肺组织FOXP3 mRNA和蛋白水平均明显降低。与ALI模型组相比, ATRA处理组大鼠肺组织炎症浸润减轻,肺组织中FOXP3 mRNA和蛋白水平明显增高, PaO2也明显增加。结论 ATRA对大鼠ALI具有保护作用, ATRA处理显著增高ALI模型大鼠肺组织FOXP3水平。

TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用

目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。

外周血辅助性T细胞17与调节性T细胞的平衡与白癜风临床特征的相关性

目的分析白癜风患者外周血辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)的平衡与临床特征的关系。方法选取白癜风患者109例,其中进展期患者56例,稳定期患者53例,另选取同期本院健康体检者59例为对照组。采用流式细胞术检测3组受试者外周血Th17、Treg细胞数量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测3组受试者白介素-17(IL-17)、叉头盒蛋白P3(Foxp3)水平;采用Pearson法分析白癜风患者Th17、Treg细胞及IL-17、Foxp3的关系。结果对照组、稳定期组、进展期组Th17细胞含量、Th17/Treg、IL-17水平逐渐升高,Treg细胞含量、Foxp3水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着白癜风皮损面积的增加,Th17细胞含量、Th17/Treg、IL-17水平逐渐升高,Treg细胞含量、Foxp3水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。白癜风患者Th17细胞与Treg细胞、IL-17与Foxp3均呈显著负相关(r=-0.449、-0.497,P<0.05)。结论Th17/Treg细胞平衡可能与白癜风的发生及临床特征有关。

直肠间质瘤切除术联合新辅助放化疗后对肿瘤免疫标志物的影响

探讨直肠间质瘤切除术联合新辅助放化疗对肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)叉头盒P3(FOXP3)、程序性死亡配体1(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的等肿离免疫标志物的影响。选取2017年3月至2019年6月份我院确诊为直肠间质瘤接受切除手术并行新辅助化放疗的50例患者为研究对象。其中男28例、女22例;年龄范围40~69岁,≥55岁者29例,<55岁者21例;恶性27例,良性23例;31例患者行切除术联合新辅助化放疗后病情好转,19例病情未得到有效控制。良性患者CD4+TILs低于恶性患者,CD8+TILs、FOXP3+TILs和MDSC计数表达与临床病理特征无关。高CD8+TILs患者治疗效果优于低CD8+TILs患者;高CD4+TILs患者治疗效果优于低CD4+TILs患者;高MDSC+TILs患者治疗效果低于低MDSC+TILs患者。CTLA-4和FOXP3和治疗效果无关。直肠间质瘤切除术联合新辅助放化疗后对CD8+、CD4+和MDSC+等肿瘤免疫标志物的表达有一定影响,且CD8+TILs、CD4+TILs高表达及MDSC+TILs低表达与患者预后紧密相关。

骨髓间充质干细胞注射抑制败血症大鼠的炎症反应

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)对败血症大鼠的治疗作用。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、治疗组。利用盲肠结扎造瘘术(CLP)制备大鼠败血症模型,提取BMSC培养至第三代,治疗组大鼠尾静脉注射BMSC,模型组大鼠注射等剂量的PBS。观察各组大鼠术后72 h后存活率,取大鼠肺脏组织HE染色观察病变情况,心脏采血应用实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、叉头盒蛋白3(Foxp3)、CC趋化因子配体2(CCL2)的mRNA水平,ELISA检测IL-6、IL-17、TNF-α的蛋白水平。结果空白组大鼠与假手术组大鼠的存活率以及肺组织形态均未见明显异常、大鼠血培养未见细菌生长;IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2、Foxp3 mRNA和蛋白水平无明显差别。模型组中大鼠存活率明显低于假手术组,组织病变明显,大鼠血培养可见大量肠杆菌生长。外周血单个核细胞IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2 mRNA和IL-6、IL-17、TNF-α蛋白的表达水平较假手术组明显增高,而Foxp3的mRNA表达水平较假手术组明显降低。治疗组中大鼠存活率明显高于模型组,肺组织病变明显减轻,IL-6、IL-17、TNF-α和CCL2 mRNA和蛋白的表达水平较模型组明显降低,而Foxp3的mRNA表达水平较模型组组明显增高。结论 BMSC治疗可增加败血症大鼠存活率,降低炎性细胞因子水平。

宣白承气汤对流感病毒和肺炎链球菌共感染致肺肠免疫损伤的影响

目的基于叉头盒P3(Foxp3)/维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)免疫失衡机制分析相关细胞因子及肠道菌群的变化,探讨宣白承气汤对流感病毒(IV)和肺炎链球菌(Spn)共感染所致肺肠损伤的作用机制。方法将96只小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、中药组、西药组,每组24只。除正常组外,其余组用流感病毒溶液滴鼻,72 h后用肺炎链球菌滴鼻,24 h后形成共感染模型。中药组予宣白承气汤1.0 g/kg灌胃,西药组予奥司他韦22.8 mg/kg联合头孢56.9 mg/kg灌胃,空白组与模型组予以等量生理盐水,各组均每天1次,持续给药7天。在3、5、7天时HE染色观察肺肠组织病理变化;采用ELISA法检测小鼠血清IL-17、IL-10表达;采用Western Blot法检测肺肠组织中Foxp3、RORγt蛋白的表达;采用16S rDNA测序观察小鼠肠道菌群结构与组成情况。结果与正常组比较,模型组小鼠肺泡间隔破裂,肺间质水肿,大量炎性细胞聚集,肠组织单层柱状上皮细胞间紧密连接破坏,数量减少,黏膜层有大量炎性细胞浸润;肺指数升高(P<0.01);血清IL-17水平升高、IL-10水平降低(P<0.01),Foxp3蛋白表达量降低,RORγt蛋白表达量升高(P<0.01),肠道菌群丰度与多样性均降低。与模型组比较,中药组与西药组小鼠的肺肠组织病理损伤有明显改善;肺指数降低(P<0.01);血清IL-17水平降低、IL-10水平增高(P<0.05,P<0.01);明显上调肺肠组织Foxp3蛋白表达水平、下调RORγt蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);各药物组干预后肠道菌群丰度和多样性均升高。结论宣白承气汤干预治疗IV/SPN共感染,可以进一步调节肺肠Foxp3、RORγt及其相关细胞因子表达,调节免疫微环境,可能通过调整肠道菌群的结构和多样性对IV/SPN共感染所致肺肠损伤起到治疗作用。

胃癌患者免疫微环境中表型特征及其与临床病理参数和预后的关系

目的探究胃癌患者免疫微环境中的表型特征,分析其与临床病理参数及预后的关系。方法纳入研究的92例胃癌组织[男58例,女34例;年龄M(Q_(1),Q_(3)),70(59,77)岁]及84例癌旁组织[男57例,女27例,年龄70(59,77)岁]购自上海芯超生物科技有限公司,标本来自样本库中的28家医院,检测其白细胞分化抗原(CD)8、CD4、T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM3)、人叉头盒蛋白P3(Foxp3)及共定位肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)亚群的表达水平。根据各阳性淋巴细胞百分比的最佳截断值将胃癌及癌旁组织分别分为高表达组和低表达组,分析各免疫表型在胃癌及癌旁组织中的表达量;采用Kaplan-Meier法进行生存分析;采用Cox比例风险模型探究胃癌患者预后的影响因素。结果胃癌组织中CD8、CD4、TIM3和Foxp3阳性细胞百分比的最佳截断值分别为12.73%、1.39%、10.77%和2.44%;胃癌组织中Foxp3的表达量高于癌旁组织[M(Q_(1),Q_(3)),0.93(0.45,2.16)比0.31(0.09,0.86),P<0.001];CD8[4.92(2.34,8.80)比8.81(6.61,12.17),P<0.001]、CD4[4.79(1.77,11.36)比8.40(4.84,12.77),P=0.022]和TIM3[5.68(2.05,11.58)比7.07(3.13,11.43),P=0.338]的表达量低于癌旁组织;不同淋巴结转移和临床分期的胃癌患者中TIM3表达量的差异均有统计学意义(均P<0.05)。胃癌组织中CD4高表达、TIM3低表达和Foxp3低表达的患者5年生存率均较差,其中CD4高、低表达组分别为29.3%、64.7%;TIM3高、低表达组分别为60.9%、30.4%;Foxp 3高、低表达组分别为64.3%、33.3%(均P<0.05)。胃癌组织中共定位CD8^(+)TIM3+TILs、CD4^(+)TIM3+TILs、CD8^(+)Foxp3^(+)TILs、CD4^(+)Foxp3^(+)TILs阳性细胞百分比的最佳截断值分别为3.86%、0.23%、0.08%、0.76%;胃癌组织中CD8^(+)Foxp3^(+)TILs的表达量高于癌旁组织(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示CD4高表达(HR=3.079,95%CI:1.350~7.024,P=0.008)、TIM3低表达(HR=0.428,95%CI:0.208~0.879,P=0.021)、Foxp3低表达(HR=0.288,95%CI:0.121~0.687,P=0.005)是胃癌患者术后5年生存率的影响因素。结论胃癌患者具有复杂的免疫微环境特征,CD4、TIM3、Foxp3的表达量与患者预后密切相关。