大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞的损伤

目的:探讨大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2(FOXK2)减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞(MCs)损伤。方法:检测MRL/faslpr小鼠(狼疮性肾炎肾组)和MRL/MPJ小鼠(对照组)24 h尿蛋白以及血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)含量。MCs分离纯化后分为:MCs组(未做任何处理的MCs);L-EMO组(10μmol/L大黄素处理MCs)、M-EMO组(25μmol/L大黄素处理MCs)、H-EMO组(50μmol/L大黄素处理MCs)、H-EMO+miR-96-5p-NC组(50μmol/L大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-NC)、HEMO+miR-96-5p-minic组(50μmol/L大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-minic)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和FOXK2的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-96-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXK2以及凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MCs炎性因子水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定MCs活力;Annexin-V FITC/PI双染法检测MCs凋亡情况。结果:与对照组相比,狼疮性肾炎组24 h尿蛋白含量、血清BUN和Scr水平显著升高(P<0.05);与MCs组相比,L-EMO组、MEMO组、H-EMO组miR-96-5p的表达量、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、A450值、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平依次显著下降(P<0.05),FOXK2水平、细胞凋亡率、Bcl-2相关的X基因(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平依次显著升高(P<0.05),大黄素作用效果呈现剂量依赖性;与H-EMO组、H-EMO+miR-96-5p-NC组相比,H-EMO+miR-96-5p-minic组显著升高miR-96-5p的表达量、炎性因子水平、A450值以及Bcl-2蛋白水平(P<0.05),显著降低FOXK2水平以及细胞凋亡率(P<0.05)。结论:大黄素通过下调miR-96-5p进而上调FOXK2,从而减轻狼疮性肾炎MCs损伤。

探讨免疫球蛋白超级家族成员9促进肺腺癌细胞增殖的作用及机制

肺癌是全球发病率与死亡率均位于第一位的恶性肿瘤。肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)大约占整个肺癌的40%。但是,目前对肺腺癌发生发展的机制尚未阐明。TCGA在线数据库GEPIA证实,免疫球蛋白超级家族成员9(immunoglobulin superfamily member 9,IGSF9)在肺腺癌中的平均表达量是6.56,其在正常癌旁组织中的平均表达量是0.55,提示IGSF9在肺腺癌中的表达量是正常癌旁组织的11.93倍。人类蛋白组学数据库也提示,IGSF9在肺腺癌中高表达。通过qRT-PCR检测IGSF9在肺腺癌细胞中的表达量,发现其在A549和H1299细胞中的表达量分别是其在BEAS-2B细胞中的4.17倍和6.6倍。细胞功能实验发现,过表达IGSF9,其LUAD细胞的增殖能力显著增加。平板克隆形成实验发现,在A549细胞中,对照组平板克隆大约有240个,过表达IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是385个,实验组的克隆数目是对照组的1.60倍(P<0.01)。敲低IGSF9,则LUAD细胞增殖能力明显降低。平板克隆形成实验发现,在H1299细胞中,对照组平板克隆大约有320个,敲低IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是164个,实验组的克隆数目仅为对照组的51.25%(P<0.01)。生物信息学预测结合后期研究证实,IGSF9可显著抑制叉头蛋白K2(forkhead box protein K2,FOXK2)的表达。MTS实验发现,过表达FOXK2可显著逆转IGSF9对LUAD细胞增殖的促进作用,而敲低FOXK2则可明显补偿敲低IGSF9对LUAD细胞的增殖抑制作用。这些结果提示,IGSF9通过下调FOXK2从而促进LUAD细胞的增殖。

lncRNA SNHG14调控肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的机制研究

目的探讨长链非编码RNA SNHG14(lncRNA SNHG14)靶向miR-17-5p/叉头蛋白K2(FOXK2)轴对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响。方法将肺泡上皮细胞A549分为对照组、感染组、sh-NC组、sh-SNHG14组、sh-SNHG14+inhibitor NC组、sh-SNHG14+miR-17-5p inhibitor组。采用荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞lncRNA SNHG14、miR-17-5p、FOXK2 mRNA表达,CCK-8试剂盒检测A549细胞增殖,流式细胞术检测A549细胞的凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA SNHG14与miR-17-5p、miR-17-5p、FOXK2的结合情况。结果与对照组相比,感染组lncRNA SNHG14、FOXK2 mRNA表达水平、细胞凋亡率、IL-6、TNF-α、IL-1β水平均升高,miR-17-5p表达水平、吸光度(A)值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);sh-SNHG14组lncRNA SNHG14、FOXK2 mRNA表达水平、细胞凋亡率、IL-6、TNF-α、IL-1β水平较感染组、sh-NC组均降低,miR-17-5p表达水平、A值较感染组、sh-NC组均升高,差异有统计学意义(P<0.05);sh-SNHG14+miR-17-5p inhibitor组FOXK2 mRNA表达水平、细胞凋亡率、IL-6、TNF-α、IL-1β水平较sh-SNHG14+inhibitor NC组均升高,miR-17-5p表达水平、A值较sh-SNHG14+inhibitor NC组均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证结果显示,lncRNA SNHG14与miR-17-5p、miR-17-5p与FOXK2均存在靶向关系。结论干扰lncRNA SNHG14表达可上调miR-17-5p的表达,下调FOXK2的表达,从而使肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞的凋亡及炎症反应受到抑制,并促进其增殖。