甲状腺乳头状癌组织中肿瘤转移相关基因1、叉头翼螺旋转录因子3水平变化与临床病理特征及淋巴转移的关系

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)、叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)淋巴转移患者中的作用及临床意义。方法:选取手术治疗的111例PTC患者为研究对象,收集患者的癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察组织中MTA1、FOXP3表达情况;采用多因素Logistic回归风险模型分析影响PTC淋巴转移的因素。结果:111例PTC组织标本中,MTA1的阳性表达率(MTA1阳性例数/癌组织总例数)为78.38%(87/111)高于癌旁组织17.12%(19/111),FOXP3在PTC组织中的阳性表达率(FOXP3阳性例数/癌组织总例数)为70.27%(78/111)高于癌旁组织13.51%(15/111),两组比较差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman等级相关分析结果显示MTA1与FOXP3表达呈正相关(r=0.532,P=0.000);PTC患者癌组织中MTA1与FOXP3表达与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);单因素分析结果显示淋巴转移患者与未转移患者在性别、病灶数、包膜侵犯、TNM分期、脉管侵犯、MTA1及FOXP3等病理特征方面比较有统计学差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示性别、病灶、TNM分期、包膜侵犯及MTA1、FOXP3表达均是影响PTC淋巴转移的危险因素(均P<0.05)。结论:MTA1、FOXP3在PTC患者癌组织中表达均升高,其表达水平与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关,可作为评估PTC淋巴转移的有效指标。

叉头翼状螺旋转录因子3及白细胞介素17在结肠癌中的表达及临床意义

目的 通过观察结肠癌患者肿瘤组织及癌旁组织中叉头翼状螺旋转录因子3（Foxp3）表达情况,以及检测结肠癌患者和健康人血清白细胞介素17 （IL-17）的水平,探讨调节性T细胞（Treg细胞）和Th17细胞在结肠癌发生和发展过程中的变化.方法 采用免疫组织化学SP法检测56例结肠癌组织及癌旁组织和15例正常结肠组织中Foxp3表达情况,采用酶联免疫吸附法检测其血清IL-17水平.结果 结肠癌患者血清IL-17明显高于健康对照者[（9.1 ±2.3） ng/L比（6.2±1.5）ng/L],差异有统计学意义（P=0.007）.结肠癌组织Foxp3阳性细胞数均显著多于正常对照组织和癌旁组织[（24.1±6.4）个比（2.7±1.1）个和（8.7±2.3）个],癌旁组织显著多于正常对照组织,差异均有统计学意义（P＜0.01）.TNM分期Ⅲ期结肠癌患者血清IL-17显著高于Ⅰ～Ⅱ期[（8.5±2.1） ng/L比（5.4±0.9） ng/L],结肠癌组织Foxp3显著多于Ⅰ～Ⅱ期[（25.8±6.2）个比（18.2±4.4）个],差异有统计学意义（P＜0.01）.病理分级中高分化腺癌血清IL-17与低分化腺癌[（9.4±1.1）ng/L比（8.9±1.8）ng/L]比较差异无统计学意义（P＞0.05）;中高分化结肠癌组织Foxp3显著多于低分化结肠癌组织[（26.8±5.5）个比（17.2±3.2）个],差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 结肠癌患者血清IL-17水平和结肠癌组织Foxp3阳性表达显著高于正常组织,且随TNM分期及病理分级增高而增高,提示IL-17以及Foxp3在结肠癌的生长和转移过程中发挥重要作用.IL-17水平和Foxp3表达与局部肿瘤组织的免疫状态密切相关,联合检测有助于进一步了解肿瘤患者的免疫状态,为肿瘤的免疫治疗提供基础资料.

包含SET和MYND结构域的蛋白3系别混合型白血病基因5对急性期川崎病叉头螺旋翼状转录因子3基因组蛋白甲基化的影响

目的探讨包含SET和MYND结构域的蛋白3/系别混合型白血病基因5（SMYD3/MLL5）对急性期川崎病叉头螺旋翼状转录因子3（Foxp3）基因组蛋白甲基化的影响及其在川崎病免疫发病机制中的作用。方法急性期川崎病患儿42例，正常同年龄对照组26例，川崎病患儿分别于免疫球蛋白（IVIG）治疗前、后直接取血备检。采用染色质免疫共沉淀-荧光定量PCR检测外周血CD4＋ T细胞Foxp3基因组蛋白H3K4me3、H3K27me3甲基化修饰及SMYD3、MLL5结合水平；流式细胞术检测外周血CD4＋CD25high Foxp3＋细胞（调节性T细胞）比例及Foxp3、细胞毒T淋巴细胞抗原4（CTLA-4）、Ⅱ型转移生长因子β受体（TGF-βRⅡ）、磷酸体SMAD家族成员3（pSmad3）蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测CD4＋ T细胞Foxp3、IL-10、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（GITR）、TGF-βRⅡ、RARα mRNA表达；ELISA检测外周血浆中TGF-β、RA浓度。采用t检验进行统计分析。结果①急性期川崎病患儿调节性T细胞比例、Foxp3和抑制功能相关分子（IL-10、GITR和CTLA4）表达及启动子、非编码保守序列1（CNS1）、CNS2 H3K4me3水平显著降低[启动子：（5.4±1.8）%和（9.1±2.2）%；CNS1：（2.6±0.9）%和（3.8±1.1）%；CNS2：（2.4±0.8）%和（4.2±1.0）%；t=5.50，6.02，9.56，7.92，7.97，4.76，7.73，5.01，8.66；P均〈0.05]，其中川崎病合并冠状动脉损伤组（川崎病-CAL＋）前述9项指标均低于无冠状动脉损伤组（川崎病-CAL-）[启动子：（4.1±1.4）%和（6.2±1.9）%；CNS1：（2.0±0.9）%和（3.0±1.1）%；CNS2：（1.8±0.6）%和（2.7±1.2）%；t=6.28，3.24，4.56，3.69，3.38，4.40，3.65，3.00，3.51；P均〈0.05]，经IVIG治疗后明显恢复[启动子：（7.2±2.1）%和（5.4±1.8）%；CNS1：（3.6±1.4）%和（2.6±0.9）%；CNS2：（3.6±1.4）%和（2.4±0.8）%；t=5.56，4.59，7.01，6.04，5.89，4.83，4.45，4.00，5.12；P均〈0.05]。各组Foxp3基因CNS3 H3K4me3及H3K27me3差异无统计学意义（t=1.03，0.91，1.48和0.79，0.82，1.53；P均〉0.05）。②急性期川崎病患儿CD4＋ T细胞组蛋白甲基化酶SMYD3、MLL5与Foxp3基因结合水平下调（t=6.63，6.15；P均〈0.05），且与Foxp3 mRNA表达水平呈正相关（r=0.62、0.45；P均〈0.05），经IVIG治疗后均有不同程度恢复（t=5.36，4.56；P均〈0.05）。其中川崎病-CAL＋组SMYD3、MLL5与Foxp3结合水平均低于川崎病-CAL-组（t=4.11，4.31；P均〈0.05）。③急性期川崎病患儿血浆TGF-β、RA浓度及CD4＋ T细胞TGF-βRⅡ、TGF-βRⅡ、pSmad3、RARα表达均显著下调（t=11.54，12.81，7.43，16.10，8.25，12.06；P均〈0.05），其中川崎病-CAL＋组前述6项指标均低于川崎病-CAL-组（t=3.58，3.30，3.82，5.27，4.71，3.78；P均〈0.05），经IVIG治疗后均明显增加（t=8.40，6.24，5.94，11.78，6.27，8.30；P均〈0.05）。结论SMYD3/MLL5结合水平不足所导致的Foxp3基因H3K4me3修饰异常可能与急性期川崎病患儿免疫功能紊乱有关。

叉头样／翼状螺旋转录因子3基因多态性与克罗恩病易感性和疾病表型的关系

目的 探讨浙江籍汉族人群叉头样/翼状螺旋转录因子（Foxp）3基因多态性与CD易感性和疾病表型的关系。 方法 纳入2007年1月至2015年12月确诊的268例CD患者和490名健康对照者，采用多重SNaPshot技术检测其Foxp3的rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548 4种单核苷酸多态性（SNP），评价其与英夫利西单克隆抗体疗效的关系，并进行连锁不平衡和单倍型分析。统计学方法采用非条件Logistic回归分析。 结果 31例接受英夫利西单克隆抗体治疗有效与19例无效患者比较，4个SNP的突变等位基因和基因型频率差异均无统计学意义（P均〉0.05）。连锁不平衡分析发现上述4个SNP彼此紧密连锁。男性CD组GCGC单倍型频率为29.20%（40/137），高于男性健康对照组的19.37%（43/222），差异有统计学意义（OR＝1.717，95%CI 1.045～2.820，P＝0.032）；女性CD组ACGA单倍型频率为13.36%（35/262），低于女性健康对照组的19.03%（102/536），差异有统计学意义（OR＝0.656，95%CI 0.433～0.995，P＝0.046）。男性结肠型（L2）ATAC单倍型频率为25.93%（7/27），低于回结肠型（L3）的75.38%（49/65），差异有统计学意义（OR＝0.114，95%CI 0.041～0.320，P〈0.01）；男性结肠型（L2）GCGC单倍型频率为51.85%（14/27），高于回结肠型（L3）的9.23%（6/65），差异有统计学意义（OR＝10.590，95%CI 3.423～32.758，P〈0.01）；男性狭窄型（B2）患者ATAC单倍型频率为73.21%（41/56），高于非狭窄、非穿透型（B1）的47.30%（35/74），差异有统计学意义（OR＝0.328，95%CI 0.156～0.693，P＝0.003）；男性狭窄型（B2）患者GCGC单倍型频率为17.86%（10/56），低于非狭窄、非穿透型（B1）的39.19%（29/74），差异有统计学意义（OR＝2.946，95%CI 1.295～6.784，P＝0.009）；男性穿透型（B3）患者ACGA单倍型频率为71.43%（5/7），高于非狭窄、非穿透型（B1）的12.16%（9/74），差异有统计学意义（OR＝0.055，95%CI 0.009～0.329，P〈0.01）。 结论 Foxp3（rs3761547、rs2232365、rs2294021、rs3761548）基因多态性与中国汉族CD易感性和疾病表型相关，但与英夫利西单克隆抗体的疗效无关。

PD-L1和FOXP3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的探讨程序性死亡配体1(PD-L1)和叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法收集2018年1月至2020年2月接受甲状腺切除术患者的组织标本160例,其中PTC 140例,结节性甲状腺肿20例。采用免疫组化染色法检测PTC和结节性甲状腺肿组织中PD-L1和FOXP3的表达情况,分析两者表达与PTC临床病理特征的关系以及两者表达的相关性。结果纳入的140例PTC病例中,86例PD-L1阳性表达,其中低表达37例、中表达26例、高表达16例、极高表达7例,PD-L1表达阳性率为61.4%;84例FOXP3阳性表达,其中低表达37例、中表达19例、高表达8例、极高表达20例,FOXP3的阳性表达率为60.0%。在结节性甲状腺肿组织中,PD-L1和FOXP3表达均为阴性,与两者在PTC组织中的表达水平比较,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.001)。PD-L1表达与TNM分期、包膜侵犯、腺外侵犯、远处转移和合并桥本氏甲状腺炎(HT)有关(P<0.05),与年龄、性别、T分期、中央区淋巴结转移、侧方淋巴结转移和肿瘤病灶无关(P>0.05)。FOXP3表达与年龄、包膜侵犯、腺外侵犯和TNM分期有关(P<0.05),而与性别、T分期、中央区淋巴结转移、侧方淋巴结转移、肿瘤病灶、远处转移和合并HT均无关(P>0.05)。在PTC组织中,PD-L1与FOXP3表达呈正相关(r=0.732,P=0.000)。结论PD-L1和FOXP3在PTC组织中表达上调,两者表达与TNM分期和肿瘤局部浸润有关,且两者表达呈正相关。

新血府逐瘀汤对动脉粥样硬化模型大鼠主动脉形态及免疫调节因子HMGB-1、Foxp3表达的影响

目的:观察新血府逐瘀汤对动脉粥样硬化模型大鼠主动脉HMGB-1、Foxp3表达及病理形态学影响,探讨其调节免疫因子抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:雄性SPF级Wistar大鼠48只,按随机数字表法分为空白对照组、模型组、立普妥组、新血府逐瘀汤(NXFZY)低剂量组、NXFZY高剂量组及NXFZY+立普妥组。除空白组外,其余各组复制动脉粥样硬化模型,NXFZY低剂量组新血府逐瘀汤9 g/(kg·d)、NXFZY高剂量组新血府逐瘀汤18g/(kg·d)灌胃,立普妥组给予阿托伐他汀钙2 mg/(kg·d)水溶液灌胃,对照组及模型组灌服等容积生理盐水,8周后HE染色后镜下观察胸主动脉病理学改变,免疫组织化学法检测胸主动脉HMGB-1、Foxp3表达并进行相关性分析。结果:与模型组比较,新血府逐瘀汤可显著降低HMGB-1表达,升高Foxp3表达,两者存在显著负相关性。结论:新血府逐瘀汤可通过下调促炎因子HMGB-1、上调抗炎因子Foxp3表达,调节AS过程中促炎与抗炎因子之间的平衡,发挥抗AS的作用。

西黄胶囊联合TP方案对晚期非小细胞肺癌患者血清Foxp3、Ang-2水平的影响

目的探讨西黄胶囊联合TP方案治疗晚期非小细胞肺癌患者的临床疗效。方法选取2017年6月—2019年6月期间新乡医学院第一附属医院收治的晚期非小细胞肺癌患者86例,采用随机摸球法分为对照组和治疗组,每组各43例。对照组采用TP方案化疗,治疗组在此基础上加用西黄胶囊治疗。两组患者均连续治疗42 d后,观察两组患者近期疗效及不良反应发生情况,同时观察两组患者治疗前后中医证候症状积分、血清叉头翼状螺旋转录因子3(Forkhead or winged helix transcription,Foxp3)、血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)、美国东部肿瘤协作组体能状况(Eastern cooperative oncology group performance status,ECOGPS)评分变化。结果治疗后治疗组有效率为46.51%、疾病控制率为83.72%,与对照组有效率25.38%、疾病控制率65.12%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者咳嗽、气短、胸闷、出汗、乏力、畏寒肢冷、腰膝酸软积分及总分较治疗前均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血清Foxp3、Ang-2水平较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组ECOGPS评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗组发热(30.23%)、恶心呕吐(30.23%)、血小板减少(34.88%)、白细胞减少(41.86%)及肝肾功能损伤(30.23%)发生率与对照组(53.49%、60.47%、55.81%、48.84%、44.19%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论西黄胶囊联合TP方案治疗NSCLC的效果显著,能明显改善患者临床症状及体能状况,减轻化疗毒副反应,并降低血清Foxp3、Ang-2表达水平发挥抗癌作用。

基于RORγt/FoxP3免疫失衡探讨定喘汤对呼吸道合胞病毒诱导肺炎性损伤幼鼠免疫微环境的影响

目的研究定喘汤对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导肺炎性损伤幼鼠转录因子孤核受体(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(FoxP3)及其相关细胞因子表达的影响,揭示定喘汤治疗RSV诱导肺炎性损伤的作用机制。方法将18只幼龄SD大鼠随机分为正常组、模型组、定喘汤组,每组6只。模型组、定喘汤组采用RSV滴鼻法建立肺炎性损伤模型。定喘汤组在第3天滴鼻2 h后给予定喘汤2 g/(kg·d)灌胃,1次/d,连续7 d。实验第8天取肺组织,观察肺损伤情况,计算肺湿干比,RT-PCR和Western blot法检测肺组织中RORγt、FoxP3 mRNA和蛋白表达情况,ELISA法检测肺泡灌洗液中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)含量。结果模型组幼鼠肺泡壁受损,肺间质大量炎性细胞浸润;定喘汤组幼鼠肺泡壁损伤和肺间质炎性细胞浸润较模型组轻。与正常组比较,模型组肺组织病理损伤评分、湿干比、肺组织中RORγt mRNA及蛋白相对表达量和肺泡灌洗液中IL-17、IL-23含量均明显增高(P均<0.05),肺组织中FoxP3 mRNA及蛋白相对表达量和肺泡灌洗液中TGF-β、IL-10含量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,定喘汤组肺组织病理损伤评分、湿干比、肺组织中RORγt mRNA及蛋白相对表达量和肺泡灌洗液中IL-17、IL-23含量均明显降低(P均<0.05),肺组织中FoxP3 mRNA及蛋白相对表达量和肺泡灌洗液中TGF-β、IL-10含量均明显升高(P均<0.05)。结论RSV诱导肺炎性损伤时RORγt/FoxP3及相关细胞因子表达异常,定喘汤可通过调控RORγt/FoxP3及相关细胞因子表达调节免疫微环境,减轻RSV诱导肺炎性损伤。

Foxp3/Treg与RORγt/Th17失衡在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染期间可见到广泛的免疫介导的肝损伤. HBV免疫清除的失败从而导致慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB),并大大增加肝硬化和肝细胞癌的风险. T淋巴细胞在HBV感染中的免疫反应起重要作用,尤其是调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)和辅助性T细胞17(helper T cell 17, Th17)失衡的问题,二者的平衡失调是HBV持续感染与肝脏炎性损伤的重要机制.为了更好地揭示潜在的机制,在本综述中,我们系统地回顾了Treg和Th17,讨论了在HBV感染后Treg与Th17两者之间的关系,并对特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt, RORγt)和叉头/翅膀状螺旋转录因子3(forkhead/winged helix family transcription factor 3, Foxp3)两者之间的变化,随着近几年对HBV免疫靶向治疗研究的不断深入,Foxp3/Treg与RORγt/Th17的平衡似乎对HBV的感染至关重要,以此为契机可以为CHB的治疗提供新的思路.

清肺通络敷胸方调控RORγt/Foxp3+干预呼吸道合胞病毒肺炎幼鼠炎性损伤的机制

目的 探讨清肺通络敷胸方调控转录因子维甲酸相关孤儿受体(RORγt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3+)干预呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎幼鼠炎性损伤的机制。方法 将36只SD幼鼠按随机数表法分为正常组、RSV肺炎组、清肺通络敷胸方组,每组12只。RSV肺炎组、清肺通络敷胸方组采用病毒液滴鼻法建立RSV感染模型,正常组给予不含病毒的生理盐水滴鼻,连续3 d。第3天滴鼻后,清肺通络敷胸方组给予清肺通络敷胸膏外敷幼鼠背部,1次/d,连续7 d。每组分别于干预第3天和干预第7天各处死6只幼鼠,HE染色观察肺组织病理学形态,Western blot法检测肺组织中RORγt、Foxp3+蛋白表达情况,RT-PCR法检测肺组织中RORγt、Foxp3+mRNA表达情况,ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)含量。结果 与正常组比较,RSV肺炎组干预第3天和干预第7天幼鼠肺间质增宽,淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞浸润;肺组织中RORγt蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-17含量均明显升高(P均<0.05),肺组织中Foxp3+蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-10含量均明显降低(P均<0.05)。与RSV肺炎组比较,清肺通络敷胸方组干预第3天和第7天肺间质增宽和淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞浸润现象得到明显改善,肺组织中RORγt蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-17含量均明显降低(P均<0.05),肺组织中Foxp3+蛋白及mRNA相对表达量和肺泡灌洗液中IL-10含量均明显升高(P均<0.05)。结论 清肺通络敷胸方能够明显减轻RSV肺炎损伤,其可能通过调控RORγt、Foxp3+的表达而起到抑制炎性反应,保护肺组织的作用。

胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3表达及与患者临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中类泛素样含环指域蛋白1(UHRF1)、Yes相关蛋白1(YAP1)和叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)表达及与患者临床病理特征的关系。方法收集2021年1至12月湖州市第一人民医院经手术切除的85例胃癌患者的癌组织与配对癌旁组织,采用免疫组化法测定UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。比较胃癌组织与癌旁组织及不同临床病理特征患者间UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。结果胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径胃癌患者UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率比较,差异均无统计意义(均P>0.05);低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者,淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移胃癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌组织UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率高,并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征有关。

孕晚期胎膜早破孕妇阴道内菌群变化、外周血单个核细胞FoxP3、STAT5表达及妊娠结局

目的:孕晚期胎膜早破(PROM)孕妇阴道内菌群变化、外周血单个核细胞叉头翼状螺旋转录因子3(FoxP3)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)表达及其妊娠结局分析。方法:收集2020年6月-2021年12月本院收治的PROM孕妇(PROM组)123例和正常妊娠晚期孕妇(对照组)120例临床资料,检测分娩前阴道分泌物微生物分布,外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平及血清IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10水平,分析两组阴道菌群分布与FoxP3、STAT5 mRNA表达水平的差异。结果:PROM组乳酸杆菌患者占比(51.2%)低于对照组(75.0%),革兰阳性杆菌(15.5%)、革兰阳性球菌(13.0%)、溶血性葡萄球菌(21.1%)、粪肠球菌(25.2%)、阴沟肠杆菌(17.9%)占比高于对照组(6.7%、5.0%、8.3%、10.0%、7.5%),外周血单个核细胞FoxP3(0.78±0.12)、STAT5 mRNA(1.04±0.22)表达水平均低于对照组(1.26±0.34、1.75±0.42)(均P<0.05);与对照组比较,PROM组血清IFN-γ、IL-12水平升高,IL-4、IL-10水平降低,且PROM组阴道微生态失调孕妇外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平低于阴道微生态正常孕妇,妊娠结局不良者外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平低于妊娠结局良好者(均P<0.05)。结论:PROM患者外周血单个核细胞FoxP3、STAT5 mRNA表达水平降低,与患者阴道内菌群变化和妊娠结局有关,可能是PROM发生的相关机制。

芪黄益气摄血方对免疫性血小板减少症模型小鼠Th17/Treg细胞因子及转录因子ROR-γt/Foxp3表达的影响

目的:研究芪黄益气摄血方对免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法:50只BALB/C小鼠随机分为5组,分别为正常对照组、模型对照组、芪黄益气摄血方30、60 g/kg组、强的松9.1 mg/kg组,每组10只。采用豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)腹腔注射方法,建立ITP小鼠模型;注射APS后的第8 d,各组分别灌胃给药,连续灌胃14 d。观察各组小鼠一般情况;检测外周血血小板计数(PLT)和血红蛋白(Hb)浓度变化;Elisa法检测血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-35、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;分离脾脏、胸腺组织,称质量,计算脏器指数;取胸骨做骨髓涂片,显微镜下进行骨髓巨核细胞分类;qRT-PCR法检测脾脏Foxp3、Ror-γt mRNA表达;Western Blot法检测脾脏Foxp3、ROR-γt蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠外周血PLT计数、Hb和血清IL-10、IL-35、TGF-β1含量、骨髓产板巨核细胞数以及脾脏Foxp3 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),而脾脏和胸腺指数、血清IL-6、IL-17A含量、以及脾脏Ror-γt mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,芪黄益气摄血方30、60 g/kg组及强的松9.1 mg/kg组PLT计数、血清IL-10、IL-35、TGF-β1含量、骨髓产板巨核细胞数以及脾脏Foxp3 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),血清IL-6、IL-17A含量均显著降低(P<0.05或P<0.01),芪黄益气摄血方60 g/kg组Hb浓度明显增加(P<0.05),芪黄益气摄血方30、60 g/kg组脾脏Ror-γt mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01);与芪黄益气摄血方30 g/kg组比较,芪黄益气摄血方60 g/kg组和强的松9.1 mg/kg组PLT计数均明显升高(P<0.05),芪黄益气摄血方60 g/kg组Foxp3 mRNA表达明显上调(P<0.05)。结论:芪黄益气摄血方能够明显改善ITP症状,增加PLT计数和骨髓产板巨核细胞数,其作用机制可能通过调控转录因子ROR-γt/Foxp3的表达,从而调节Th17/Treg细胞因子平衡,抑制炎症反应。

宫颈癌淋巴结转移患者PD-L1与TILs表达水平及其与预后的关系

目的探讨宫颈癌淋巴结转移患者程序性死亡配体-1(PD-L1)、肿瘤浸润淋巴细胞亚群(TILs)表达水平及其与患者预后的关系。方法选取2007年1月至2013年9月在梅州市人民医院诊治并接受宫颈癌根治性切除术后发生淋巴结转移的101例患者作为研究对象。采用免疫组织化学法检测PD-L1、CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、叉头翼螺旋转录因子3(Foxp3)^(+)TILs表达水平。比较不同PD-L1表达水平患者临床病理特征差异;采用Spearman相关对PD-L1表达水平与TILs密度的相关性进行分析;采用Kaplan-Meier生存分析法分析PD-L1表达水平、TILs密度及密度比值与累计生存率的关系;采用Cox比例风险模型分析患者预后的独立影响因素。结果PD-L1表达于肿瘤细胞的细胞质和(或)细胞膜,阳性表达率为34.65%(35/101);CD4^(+)TILs计数为94(45,190);CD8^(+)TILs计数为63(31,117);FoxP3^(+)TILs计数为6.0(2.5,13.5);FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs比值为0.109(0.036,0.193)。PD-L1阳性表达组与PD-L1阴性表达组CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs密度比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。PD-L1表达情况与CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs密度均呈正相关(r=0.305、0.222、0.222,P=0.002、0.026、0.026)。生存组与死亡组CD4^(+)TILs密度、CD8^(+)TILs密度和PD-L1表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。手术年龄<50岁、PD-L1阳性表达、CD4^(+)TILs高密度、CD8^(+)TILs高密度、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs低比值患者累计生存率均高于手术年龄≥50岁、PD-L1阴性表达、CD4^(+)TILs低密度、CD8^(+)TILs低密度、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs高比值患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,PD-L1阳性表达、CD8^(+)TILs高密度是患者预后的独立保护因素(P<0.05)。结论PD-L1、CD4^(+)TILs、CD8^(+)TILs、FoxP3^(+)TILs/CD8^(+)TILs比值与宫颈癌淋巴结转移患者预后均有关,其中PD-L1阳性表达、CD8^(+)TILs高密度是宫颈癌淋巴结转移患者预后的独立保护因素。

参附注射液对失血性休克大鼠肺损伤的影响

目的观察参附注射液对大鼠失血性休克(HS)致肺损伤的影响并探讨潜在机制。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠36只,16~17周龄,体重400~600 g。采用随机数字表法将大鼠分为三组:假手术组(SH组)、失血性休克组(HS组)和参附注射液组(SF组),每组12只。SH组麻醉后仅分离出右股静脉和股动脉,不行动静脉置管,HS组和SF组制备HS大鼠模型。HS组经静脉导管进行液体复苏,复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与生理盐水10 ml/kg,SF组复苏液为所失自体血加1.5倍失血量的复方氯化钠注射液与参附注射液10 ml/kg,灌注时间约60 min。于术后24、48 h随机处死6只大鼠,取肺组织检测湿重与干重比(W/D),采用ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)浓度,采用PCR法检测肺组织视黄酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA表达量,采用Western blot法检测RORγt、Foxp3、HIF-1α、水通道蛋白1(AQP1)和AQP5蛋白含量,肺组织行HE染色后在光镜下观察病理学改变并行肺损伤评分。结果与术后24 h比较,术后48 h SF组肺组织W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1蛋白含量均明显升高(P<0.05)。与SH组比较,术后24、48 h HS组和SF组W/D、IL-6、IL-17、IL-10和TGF-β浓度、RORγt、Foxp3和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分均明显升高(P<0.05),AQP1、AQP5蛋白含量明显降低(P<0.05),光镜下可见肺泡结构破坏,肺泡间质充满大量水肿液,其间浸润着大量炎性细胞。与HS组比较,术后24、48 h SF组W/D、IL-6和IL-17浓度、RORγt和HIF-1αmRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β浓度、Foxp3 mRNA表达量及蛋白含量、AQP1和AQP5蛋白含量均明显升高(P<0.05),光镜下可见肺泡结构紊乱改善,水肿程度减轻,炎性细胞数量减少。结论参附注射液可调节促炎因子IL-6、IL-17与抗炎因子IL-10、TGF-β平衡,升高肺组织AQP1、AQP5蛋白含量,降低肺组织W/D和肺损伤评分,减轻HS大鼠肺损伤,机制可能与调节HIF-1α-RORγt/Foxp3平衡有关。

前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞模型的构建及潜在耐药基因的初步筛选和验证

背景与目的去势抵抗性前列腺癌阶段的恩杂鲁胺耐药问题是临床上亟待解决的难题。本研究旨在建立一种可用于体外研究的人前列腺癌(prostate cancer,PCa)恩杂鲁胺(enzalutamide Enza)耐药细胞模型并筛选相关耐药基因。方法采用MTT法检测雄激素非依赖的人PCa细胞株C4-2B的IC_(50)值,确定Enza的初始处理浓度。然后,成倍增加Enza的初始浓度作用于C4-2B细胞,诱导建立PCa的Enza耐药细胞株(命名为C4-2B-ENZ)。应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、MTT法评估C4-2BENZ细胞株的耐药情况。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及蛋白质免疫印迹检测耐药细胞株mRNA和蛋白质的表达情况。在此基础上,通过裸鼠体内成瘤实验,ELISA法检测人前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)和人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平,免疫组化检测Ki67水平,进一步验证C4-2B-ENZ细胞的耐药性。最后,应用高通量芯片技术进一步筛选C4-2B与C4-2B-ENZ细胞差异表达的基因。结果C4-2B细胞的IC_(50)值为1.2μmol/L,C4-2B-ENZ细胞的IC_(50)为14.77μmol/L,其耐药指数为12.4,属于中度耐药。蛋白质免疫印迹和PCR结果显示,与C4-2B细胞相比,C4-2BENZ细胞中Enza耐药基因CXCR7、AKT、STAT3、FOXP3的mRNA及蛋白质高表达,而AR、Jagged1、Notch1低表达。与C4-2B细胞异质瘤相比,耐药细胞C4-2B-ENZ异质瘤Enza处理后,瘤体生长曲线(P=0.0296)、瘤体质量(P<0.0001)、VEGF水平(P=0.0003)、PSA水平(P<0.0001)、Ki67胞核染色阳性率(P=0.0007)均显著升高。芯片筛选结果显示,与C4-2B细胞相比,C4-2B-ENZ细胞中有653个基因表达显著差异,其中211个基因表达上调,443个基因表达下调。结论本研究建立了Enza耐药细胞模型并筛选出一些潜在的Enza耐药基因,为研究去势抵抗型前列腺癌耐药机制及药物靶点提供了研究线索。

益气养阴解毒方及其联合抗CTLA-4单抗对肺癌原位模型小鼠生存期及瘤体组织Foxp3、CTLA-4蛋白表达的影响

目的探讨益气养阴解毒方治疗肺癌的可能作用机制。方法将对数生长期的LLC-luc细胞于左肺注射建立C57BL/6小鼠肺癌原位模型。将造模成功的48只小鼠随机分为模型组,益气养阴解毒方低、中、高剂量组,单抗组,联合组,每组8只。模型组小鼠予生理盐水0.4ml灌胃及生理盐水0.3ml腹腔注射;益气养阴解毒方低、中、高剂量组分别给予益气养阴解毒方47、94、188g/(kg·d)灌胃及生理盐水0.3ml腹腔注射;单抗组予抗细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)单抗0.3ml腹腔注射及0.4ml生理盐水灌胃,共3次;联合组予益气养阴解毒方中剂量灌胃和抗CTLA-4单抗腹腔注射,用药剂量同上。各组均干预21天。活体成像动态监测小鼠的肿瘤生长并检测瘤体组织荧光强度,观察小鼠生存期。HE染色观察肿瘤细胞的形态,免疫组化法检测瘤体组织中叉头翼状螺旋转录因子P3(Foxp3)及CTLA-4蛋白表达。结果与模型组比较,益气养阴解毒方中、高剂量组及单抗组、联合组瘤体组织平均荧光强度均降低(P<0.05);联合组小鼠瘤体组织平均荧光强度低于益气养阴解毒方中、高剂量组和单抗组(P<0.05)。HE染色结果显示,模型组、益气养阴解毒方低剂量组小鼠瘤体组织见密集分布的低分化腺癌细胞,病理性核分裂象较多,益气养阴解毒方中、高剂量组和单抗组见病理性核分裂象减少,联合组见病理性核分裂象进一步减少。模型组,益气养阴解毒方低、中、高剂量组,单抗组和联合组小鼠的中位生存期分别为21、24、31、32、96、130天。与模型组比较,益气养阴解毒方中、高剂量组和单抗组、联合组均延长小鼠生存期,瘤体组织中Foxp3和CTLA-4蛋白表达均明显减少(P<0.05),且联合组较益气养阴解毒方中剂量组更能延长小鼠生存期(P<0.01),联合组小鼠瘤体组织Foxp3、CTLA-4蛋白表达较益气养阴解毒方高剂量组明显减少(P<0.05)。结论益气养阴解毒方及其联合抗CTLA-4单抗均可抑制小鼠肺癌原位模型的肿瘤生长,并延长生存期,且联合用药具有协同增效的作用,其机制可能与逆转肿瘤微环境免疫抑制状态有关。

CD4＋CD25＋调节性T细胞、Foxp3与多发性硬化的关联

调节性T细胞（regulatory Tcell，Treg）是一类具有免疫调节功能的T细胞亚群，它们在维持外周免疫耐受、预防自身免疫性疾病的发生过程中起着重要作用。CD4＋CD25＋Treg是Treg的主要组成部分．能特异性、成组性表达叉头翼状螺旋转录因子-3（forkhead winged helix transcription factor-3．Foxp3），Foxp3对CD4＋CD25＋Treg的发育和功能调控起着重要的作用。

乙肝病毒携带孕妇外周血单个核细胞Foxp3及Th17和Toll样受体的表达

目的研究叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)、辅助性T细胞17(Th17)、Toll样受体(TLR)在乙肝病毒携带孕妇外周血单个核细胞中的表达。方法选取2018年2月-2021年2月于南京医科大学附属妇产医院建册、产检且乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇60例为研究组,选取同时期进行建册、产检且HBsAg阴性孕妇60名为对照组,检测两组孕妇外周血T淋巴细胞、Foxp3、Th17和Toll样受体的表达情况。结果研究组CD_(4)^(+)水平较对照组降低,CD_(8)^(+)水平升高(P<0.05);研究组Foxp3、TLR4、TLR7表达水平高于对照组,Th17表达水平低于对照组(P<0.05);不同乙肝病毒载量Foxp3、Th17、TLR4、TLR7水平比较差异有统计学意义(P<0.05);高载量组孕妇Foxp3、TLR4、TLR7水平高于中、低载量组,Th17水平低于中、低载量组(P<0.05);Spearman秩相关分析结果显示,乙肝病毒载量与Foxp3、TLR4、TLR7水平均呈正相关,与Th17水平呈负相关(P<0.05)。结论乙肝病毒携带孕妇Foxp3、Th17、TLR4、TLR7表达异常,临床应重视高病毒载量孕妇上述指标的检测,有效控制病毒的复制及免疫的平衡。

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺组织RORγt/FOXP3及TGF-β、Smad3的影响

目的:探讨甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠保护作用的机制。方法:制作AIT大鼠模型,随机分为模型组、甲炎康泰组,每组10只。另选取10只为正常组。灌胃干预8周后,ELISA检测大鼠血清中甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)浓度,甲状腺组织进行HE染色、实时荧光定量PCR检测和免疫组化检测。结果:与模型组比较,甲炎康泰组TPOAb浓度显著降低(P<0.05),淋巴细胞浸润减轻;甲炎康泰组大鼠甲状腺组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),叉头翼状螺旋转录因子P3(FOXP3)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论:甲炎康泰可能通过增强甲状腺组织中TGF-β、FOXP3以及Smad3的表达和抑制RORγt的表达以缓解AIT的发生发展。