高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对NIT-1细胞FOXO1、TSC2基因表达及细胞分泌功能的影响

目的:研究罗格列酮在不同浓度葡萄糖条件下,对胰岛β细胞增殖凋亡与胰岛素分泌以及叉头转录因子-1(FOXO1)和结节性硬化症-2(TSC2)表达的影响。方法:将NIT-1细胞按每孔5×104个放置于24孔细胞培养板,培养48h后随机分为各处理组:5.6、7.8、11.1、16.7、22.2和27.6mmol.L-1葡萄糖组,继续培养24h后再分别施加1×10-5mol.L-1罗格列酮,分别于干预24和48h后取细胞培养上清液,采用放射免疫法检测胰岛素水平和免疫荧光法检测细胞增殖情况,RT-PCR半定量法检测FOXO1和TSC2mRNA表达水平。结果:①1×10-6～1×10-5mol.L-1罗格列酮可以分别在不同浓度葡萄糖培养条件下使胰岛NIT-1细胞增殖(P<0.05),且这种变化趋势随剂量的增加而增加(即1×10-5mol.L-1罗格列酮组>1×10-6mol.L-1罗格列酮组>1×10-7mol.L-1罗格列酮组)。1×10-5mol.L-1的罗格列酮干预后,可见细胞凋亡百分率增加趋势随着葡萄糖浓度不断升高;②在同一浓度罗格列酮作用下,当葡萄糖浓度为11.1mmol.L-1时,胰岛素分泌水平最高,高于其他各组(均P<0.05),随着葡萄糖浓度增加,胰岛素分泌量逐渐下降(11.1mmol.L-1葡萄糖组>16.7mmol.L-1葡萄糖组>22.5mmol.L-1葡萄糖组>27.6mmol.L-1葡萄糖组),而葡萄糖为5.6mmol.L-1时,胰岛素分泌量最低;③在1×10-5mol.L-1罗格列酮干预后,FOXO1和TSC-2mRNA的表达水平均较未干预组明显下降,且呈现出5.6mmol.L-1组<11.1mmol.L-1组<16.7mmol.L-1组<22.5mmol.L-1组<27.6mmol.L-1组的变化趋势,而且葡萄糖浓度>16.7mmol.L-1的各组均较前面小剂量葡萄糖组(≤11.1mmol.L-1各组)表达明显。结论:罗格列酮可以通过直接影响胰岛β细胞内FOXO1和TSC2表达促进胰岛β细胞的增殖及影响细胞胰岛素分泌功能,提示通过调控FOXO1和TSC2表达,可以直接影响胰岛β细胞的生物学功能,如分泌功能、细胞的增殖与凋亡以及改善胰岛素抵抗状况。

红景天苷调控FoxO1/β-catenin通路对2型糖尿病骨质疏松大鼠的保护作用研究

目的探讨红景天苷(SDS)对2型糖尿病骨质疏松(DOP)大鼠的保护作用及叉头框转录因子O亚族1(Fox O1)/β-连环蛋白(β-catenin)通路的影响。方法高糖高脂饲养8周,8周后腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(STZ),第10周无菌条件下去除卵巢构建DOP大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、SDS组、Fox O1激动剂组,每组8只;正常组8只大鼠常规饲料正常饲养相同时间。造模成功后第2天予SDS组灌胃36 mg/(kg·d) SDS,Fox O1激动剂组灌胃40 mg/(kg·d)白藜芦醇(Res),连续11周。血糖仪检测空腹血糖水平;苏木精-伊红(HE)检测大鼠股骨组织形态;双能X射线吸收法测定股骨组织骨密度情况;活性氧(ROS)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒检测血清中ROS、SOD、MDA、GSH-Px水平;蛋白免疫印迹检测股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平。结果建模后给药前,与正常组相比,模型组、SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平升高(P<0.05)。给药后,模型组骨小梁出现明显断裂、破坏严重、数量减少;SDS组、Fox O1激动剂组骨小梁明显断裂,但空隙间隔有所缓解,数量有所增加。与正常组相比,模型组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平升高(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组相比,SDS组、Fox O1激动剂组空腹血糖水平,血清中ROS、MDA水平降低(P<0.05);股骨组织骨密度,血清中SOD、GSH-Px水平,股骨组织中Fox O1、β-catenin蛋白水平升高(P<0.05)。结论SDS可激活Fox O1/β-catenin通路,增强抗氧化应激作用,实现对DOP大鼠的保护。

蓝刺头多糖B通过miR-494-3p/FOXO1/PGC1α信号通路改善胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢紊乱

目的:探讨蓝刺头多糖B对棕榈酸诱导的HepG2胰岛素抵抗的抑制作用及可能机制。方法:MTT法检测蓝刺头多糖B对HepG2细胞增殖的影响;建立棕榈酸诱导HepG2胰岛素抵抗细胞模型;检测蓝刺头多糖对细胞葡萄糖的消耗量、糖原、游离脂肪酸、三酰甘油的含量;油红O染色观察细胞脂肪变性的程度;实时荧光定量PCR检测miR-494-3p、Foxo1、Pgc1a、Pck2、G6pase mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组葡萄糖消耗量和糖原合成量显著降低(P<0.01),游离脂肪酸和三酰甘油的含量显著升高(P<0.01),Foxo1、Pgc1α、Pck2、G6pase mRNA的表达显著上调(P<0.05);与模型对照组相比,蓝刺头多糖B 0.5、1.5、3 mg/mL组均能明显增加葡萄糖消耗量和糖原合成量(P<0.05或P<0.01),同时能明显降低细胞内游离脂肪酸和三酰甘油含量(P<0.05或P<0.01),蓝刺头多糖B 1.5、3 mg/mL能够显著改善细胞的脂肪变性(P<0.01),蓝刺头多糖B 3 mg/mL能够明显上调miR-494-3p的表达、明显下调Foxo1、Pgc1a、Pck2、G6pase mRNA表达(P<0.05)。结论:蓝刺头多糖B对棕榈酸诱导的HepG2细胞的胰岛素抵抗有抑制作用,其机制可能与调控miR-494-3p/Foxo1/Pgc1a信号通路有关。

脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制

目的:观察脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制。方法:构建局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,成模后随机分为模型对照组、阳性药物组、中药组、联合用药组,另选取健康斯泼累格·多雷(SD)大鼠作为假手术组。观察并评估各组大鼠的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比,免疫组织化学法检测脑组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的平均光密度值,蛋白质免疫印迹法、实时定量PCR(QT-PCR)检测脑组织叉头框转录因子3a(FoxO3a)基因、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核因子κB(NF-κB)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA的表达水平。结果:与假手术组比较,模型对照组NIHSS评分,脑组织含水量,脑组织缺血体积百分比,脑组织FoxO3a、HIF-1α、NF-κB、BDNF蛋白和mRNA的表达水平,Bax、Bcl-2平均光密度值以及Bax/Bcl-2值均显著升高(均P<0.05);与模型对照组比较,药物干预各组的NIHSS评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、Bax平均光密度值、Bax/Bcl-2值、脑组织NF-κB蛋白和mRNA的表达水平显著降低(均P<0.05),其中联合用药组的降低程度最大(均P<0.05),Bcl-2平均光密度值,脑组织FoxO3a、HIF-1α、BDNF蛋白和mRNA的表达水平显著升高(均P<0.05),其中联合用药组的升高程度最大(均P<0.05)。结论:脑泰通组方能有效保护局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织损伤,改善局部脑缺血,其作用机制可能与脑泰通组方调控FoxO3a/HIF-1α/NF-κB信号通路相关。

橄榄苦苷对糖尿病小鼠肝脏糖代谢的作用及机制

目的：通过观察橄榄苦苷（OL）对糖尿病小鼠肝脏糖代谢的作用并探讨其机制。方法：自发性糖尿病小鼠db/db小鼠40只,随机分为模型组,二甲双胍组（0.13 g·kg^-1）,橄榄苦苷高、低剂量组（0.05,0.025 g·kg^-1）,每组10只,另设同周龄C57BL/6J小鼠10只为正常组。治疗6周后,观察各组小鼠的空腹血糖（FBG）,胰岛素（Fins）水平,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,口服葡萄糖耐量实验（oral glucose tolerance test,OGTT）以及体质量,血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,肝糖原含量;采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测葡萄糖-6-磷酸酶（glucose-6-phosphatase,G-6-P）,磷酸化-烯醇式丙酮酸（phosphoenolpyruvate carboxykinase,p-EPCK）mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测叉头转录因子1（forehead box-containing protein of the O subfamily 1,Fox O1）,蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）蛋白表达。结果：与模型组比较,OL组体质量,FBG,Fins,HOMA-IR显著降低（P〈0.01）;肝糖原含量明显升高（P〈0.05,P〈0.01）;OGTT实验120 min血糖显著降低（P〈0.01）;小鼠肝脏p-EPCK,G-6-P mRNA表达显著降低（P〈0.01）,Akt,Fox O1磷酸化水平明显升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OL具有抑制糖异生发挥降糖、改善胰岛素抵抗作用,机制可能与其升高Akt-Fox O1磷酸化,减少p-EPCK,G-6-P转录有关。