溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1、核因子-κΒmRNA表达与病情严重程度关系研究

目的:探究溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1(FoxM1)、核因子-κΒ(NF-κΒ)mRNA表达与病情严重程度的关系。方法:选取活动期UC患者128例为活动期UC组、缓解期UC患者81例为缓解期UC组、结肠单发息肉切除术后肠镜复查正常者88例为对照组。以改良Truelove和Witts分型标准将活动期UC患者按病情严重程度分成活动期轻度组(53例)和活动期中度组(46例)和活动期重度组(29例)。荧光定量PCR法检测受试者结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达。比较对照组、缓解期UC组、活动期UC组和不同病情严重程度活动期UC患者FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达及改良Mayo评分。分析UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分的相关性,影响活动期UC患者重度病情发生的因素,FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA预测活动期UC患者重度病情发生的价值。结果:与对照组和缓解期UC组比较,活动期UC组结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达水平升高(均P<0.05)。与缓解期UC组比较,活动期UC组改良Mayo评分升高(P<0.05)。活动期轻度组、活动期中度组、活动期重度组结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达水平及改良Mayo评分依次升高(均P<0.05)。UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA与NF-κΒmRNA表达呈正相关(P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA与改良Mayo评分呈正相关(均P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分是活动期UC患者发生重度病情的危险因素(均P<0.05)。FoxM1、NF-κΒmRNA两项联合预测活动期UC患者发生重度病情的曲线下面积(AUC)高于FoxM1、NF-κΒmRNA各自单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:FoxM1、NF-κΒmRNA在活动期UC患者结肠黏膜组织中呈高表达,且病情越重两者升高趋势越明显,可用于预测活动期UC患者重度病情的发生。

甲状腺乳头状癌组织中肿瘤转移相关基因1、叉头翼螺旋转录因子3水平变化与临床病理特征及淋巴转移的关系

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)、叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)淋巴转移患者中的作用及临床意义。方法:选取手术治疗的111例PTC患者为研究对象,收集患者的癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察组织中MTA1、FOXP3表达情况;采用多因素Logistic回归风险模型分析影响PTC淋巴转移的因素。结果:111例PTC组织标本中,MTA1的阳性表达率(MTA1阳性例数/癌组织总例数)为78.38%(87/111)高于癌旁组织17.12%(19/111),FOXP3在PTC组织中的阳性表达率(FOXP3阳性例数/癌组织总例数)为70.27%(78/111)高于癌旁组织13.51%(15/111),两组比较差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman等级相关分析结果显示MTA1与FOXP3表达呈正相关(r=0.532,P=0.000);PTC患者癌组织中MTA1与FOXP3表达与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);单因素分析结果显示淋巴转移患者与未转移患者在性别、病灶数、包膜侵犯、TNM分期、脉管侵犯、MTA1及FOXP3等病理特征方面比较有统计学差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示性别、病灶、TNM分期、包膜侵犯及MTA1、FOXP3表达均是影响PTC淋巴转移的危险因素(均P<0.05)。结论:MTA1、FOXP3在PTC患者癌组织中表达均升高,其表达水平与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关,可作为评估PTC淋巴转移的有效指标。

2型糖尿病病人血清沉默信息调节因子2相关酶1和叉头样转录因子O4表达与糖尿病视网膜病变的关系

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人血清沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)和叉头样转录因子O4(FOXO4)表达与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法采用随机数字表法将2021年8月至2022年8月在七台河市人民医院收治的142例T2DM病人纳入研究,按照国际临床DR严重程度量表分为无DR组62例、非增殖性(NPDR)组50例和增殖性(PDR)组30例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清SIRT1和FOXO4的表达水平;Pearson法分析血清中SIRT1和FOXO4表达水平的相关性;logistic回归分析影响T2DM病人DR发生的因素。ROC曲线分析血清中SIRT1和FOXO4对T2DM病人DR发生的诊断价值。结果PDR组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)[(1.22±0.15)mmol/L比(1.98±0.17)mmol/L、(1.64±0.18)mmol/L]、SIRT1水平[(3.82±0.50)μg/L比(5.36±0.56)μg/L、(4.65±0.52)μg/L]显著低于无DR组及NPDR组,NPDR组显著低于无DR组;PDR组收缩压(SBP)、三酰甘油(TG)、FOXO4[(14.63±1.48)μg/L比(12.62±1.45)μg/L、(13.74±1.46)μg/L]水平显著高于无DR组及NPDR组,NPDR组显著高于无DR组(P<0.05)。相关性分析显示,血清SIRT1和FOXO4表达水平呈负相关关系(r=−0.47,P<0.001)。logistic回归分析显示,HDL-C、SIRT1和FOXO4表达水平是影响T2DM病人DR发生的因素(P<0.05)。二者联合诊断DR发生的ROC曲线下面积(AUC)高于SIRT1和FOXO4单独诊断的AUC值(Z=32.22,P<0.001;Z=19.03,P<0.001)。结论T2DM病人血清中SIRT1表达水平显著降低,FOXO4表达水平显著升高,二者是影响T2DM病人DR发生的因素。

叉头盒转录因子O1基因多态性与中国重庆汉族人2型糖尿病相关性研究

目的 探讨叉头盒转录因子O1（FOXO1）基因单核苷酸多态性（SNPs）与中国重庆汉族人2型糖尿病（T2DM）的相关性.方法 （1）在无血缘关系的105名中国重庆汉族人中,采用PCR-RFLP和基因测序法,对FOXO1基因编码区和非编码区的15个SNPs进行筛查,连锁不平衡（LD）分析,构建单倍型.（2）选择重庆地区704名汉族人（414名T2DM患者,290名健康人）进行病例对照研究,对位于同一单倍域的5个SNPs进行基因型鉴定,分析SNPs及单倍型与T2DM的关联.结果 （1）共筛查到12个SNPs;外显子Thr488Asn在该人群中未发现多态现象.LD分析提示rs17592236、rs9577066、rs7986407、rs4581585和rs4325426位于同一单倍域内（D＇＞0.7）.（2）rs7986407、rs4581585与T2DM发病相关：rs7986407位点AA基因型个体T2DM患病风险是GG基因型的1.42倍（additive模式OR=1.420,95％CI：0.783～2.577,P=0.011）;rs4581585位点CC基因型个体T2DM患病风险是TT基因型的2.57倍（additive模式OR=2.571,95％CI：1.404～4.695,P=0.002）.年龄、体质量指数、血糖、血脂、胰岛素、Homa-IR和Homa-β等在不同基因型间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 FOXO1基因可能是中国重庆汉族人T2DM的易感基因.

超音刺猬蛋白 转录因子叉头框转录因子M1及神经胶质瘤相关癌基因同源物1在宫颈癌中的表达与临床意义

目的探究刺猬因子(Hedgehog)信号通路分子超音速刺猬蛋白(Shh)及其下游转录因子叉头框转录因子M1(FoxM1)和神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)在宫颈癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法选取遂宁市中心医院2016年1月至2016年8月收治的50例宫颈癌患者宫颈黏膜组织作为观察组,选取30例同期收入的宫颈黏膜组织正常的阴道炎患者作为对照组,应用免疫组化检测两组对象宫颈黏膜组织中Shh、FoxM1、Gli1的表达情况,分析宫颈癌组织中Shh、FoxM1、Gli1蛋白表达与临床病理特征之间的关系。结果 Shh、FoxM1、Gli1蛋白在宫颈癌组织中的表达阳性率分别为86%、90%、92%,较正常宫颈组织升高,差异有统计学意义(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1蛋白与患者年龄、肿瘤大小、浸润深度均无显著相关性(P>0.05);Spearman相关性分析显示,Shh在宫颈癌中的表达与组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05);FoxM1只与淋巴结转移相关(P<0.05);Gli1的表达水平与宫颈癌组织的分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1三者之间互为正相关(P<0.05)。结论 Shh、FoxM1、Gli1在宫颈癌组织中呈高表达状态,Shh和Gli1蛋白与宫颈癌组织分化程度有关,而FoxM1蛋白只与宫颈癌是否发生淋巴结转移有关,此三者的检测,有助于宫颈癌的早期诊断,可作为预测宫颈癌发生发展的指标。

卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1和胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1的表达与患者临床病理特征和预后的关系

目的探究卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1(forkhead box M1,FOXM1)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(glioma-associated oncogene homoglog-1,Gli-1蛋白)的表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选取2009年1月至2013年9月中国人民解放军中部战区总医院妇产科收治的经手术病理证实为卵巢高级别浆液性癌的82例患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测石蜡标本中FOXM1和Gli-1蛋白的表达情况;收集患者临床资料,分析FOXM1和Gli-1蛋白表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果临床分期Ⅲ~Ⅳ期、高中分化和伴腹水的卵巢高级别浆液性癌患者FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达率均显著升高(均P<0.05)。FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达患者的20、40、60个月生存率均显著低于阴性表达患者(均P<0.05),累计存活时间均显著短于阴性表达患者(均P<0.05)。结论临床分期Ⅲ~Ⅳ期、高中分化和伴腹水的卵巢高级别浆液性癌患者FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达率均显著升高,且FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达患者的生存率均下降。

肿瘤抑制候选基因-7、叉头框转录因子M1、鳞状细胞癌抗原在食管癌中的表达及意义分析

目的探讨长链非编码RNA肿瘤抑制候选基因-7(LncRNATUSC7)、叉头框转录因子M1(Foxm1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)在食管癌中的表达及意义。方法我院收治的78例食管癌患者,根据肿瘤分期分为早中期组(TNM分期Ⅰ~Ⅱ期)32例与中晚期组(TNM分期Ⅲ~Ⅳ期)46例,比较两组LncRNATUSC7、Foxm1、SCC-Ag表达水平,分析LncRNATUSC7、Foxm1、SCC-Ag表达水平与食管癌肿瘤分期的相关性以及对食管癌肿瘤分期评估效能。结果中晚期组LncRNATUSC7水平低于早中期组,Foxm1、SCC-Ag水平高于早中期组(P<0.05)。食管癌患者LncRNATUSC7水平与肿瘤分期呈负相关,Foxm1、SCC-Ag水平与肿瘤分期呈正相关(P<0.05);三项指标评估食管癌肿瘤分期的ROC曲线AUC分别为0.914、0.871、0.795,截断值分别为0.27、1.40、5.15 ng/ml。结论不同肿瘤分期的食管癌患者LncRNATUSC7、Foxm1、SCC-Ag表达水平存在明显差异,且三项指标可有效反映食管癌患者病情进展程度,可用于该病患者病情监测及治疗指导,临床应用价值较高。

天冬氨酸蛋白酶A、甲状腺转录因子-1、核苷酸切除修复交叉互补基因1检测在肺癌患者中的应用价值

目的探讨检测天冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的表达在肺癌患者中的应用价值.方法选取40例肺癌患者的手术切除肺癌病理标本,以40例癌旁正常组织作为对照,检测NapsinA、TTF-1、FERCC1表达.结果肺癌组织中NapsinA、TTF-1、ERCC1表达水平、阳性率显著高于癌旁正常组织(P<0.05);不同病理类型、分化程度者NapsinA表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);不同病理类型、TNM分期者TTF-1表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);NapsinA、TTF-1、ERCC1之间无显著相关性(P>0.05).结论临床可经检测NapsinA、TTF-1、FERCC1表达判断肺癌患者病情.

口腔扁平苔藓患者血清血管生成素-2水平与叉头翼状螺旋转录因子阳性调节性T细胞及疾病活动度的相关性分析

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者血清血管生成素-2(Ang-2)水平与叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)阳性调节性T淋巴细胞(Treg)及疾病活动度相关性分析。方法选取113例不同分型OLP患者为研究对象(试验组),其中网纹型45例,充血型36例,糜烂型32例。另选取健康志愿者76例设为对照组。血清Ang-2和Foxp3+Treg水平分别采用酶联免疫吸附法和流式细胞仪进行检测。统计OLP患者临床体征评分、OLP网纹-萎缩-糜烂(RAE)病损评分和疾病活动评分。采用Pearson相关性分析明确Ang-2水平与Foxp3+Treg及各评分的相关性。结果与对照组相比,不同分型OLP患者血清Ang-2、Foxp3+Treg水平均升高(P<0.05);与网纹型相比,糜烂型和充血型患者血清Ang-2、Foxp3+Treg水平升高(P<0.05);与充血型相比,糜烂型患者血清Ang-2、Foxp3+Treg水平升高(P<0.05)。糜烂型和充血型患者临床体征评分、RAE病损评分、疾病活动评分均高于网纹型(P<0.05);与充血型患者相比,糜烂型患者上述指标水平升高(P<0.05)。OLP患者血清Ang-2水平与Foxp3+Treg、临床体征评分、RAE病损评分、疾病活动评分均呈正相关(r值分别为0.531、0.548、0.554、0.528,P<0.001)。结论血清Ang-2水平在OLP患者体内异常升高,且其升高程度与患者Foxp3+Treg水平、临床体征、病损程度及疾病活动程度呈正相关。

子宫内膜癌组织叉头框转录因子O亚型3a与基质金属蛋白酶-14表达水平及相关性

目的检测子宫内膜癌中叉头框转录因子O亚型(FOXO)3a和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达。方法 63例行子宫内膜癌根治手术患者作为观察组,并留取术后组织,40例子宫内膜复杂性增生患者术后标本作为对照组,40例增生期子宫内膜诊刮标本作为正常对照组。采用免疫组化SP法检测3组中FOXO3a和MMP-14的表达。结果 FOXO3a和MMP-14在三组中的表达有统计学意义。观察组中FOXO3a和MMP-14的阳性率均与肌层浸润深度、淋巴结累犯密切相关,FOXO3a的阳性率与肿瘤的最大径密切相关。观察组中FOXO3a和MMP-14的表达呈负相关性。结论子宫内膜癌中FOXO3a低表达、MMP-14高表达对肿瘤的形成和进展可能有促进作用,二者具有负向协同作用。

恶性黑素瘤细胞miR-508-3p与叉头框转录因子C1的关系及对增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-508-3p与叉头框转录因子C1(forkhead box C1,FOXC1)的关系及其在恶性黑素瘤中的表达和作用机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测mi R-508-3p和FOXC1在HEM正常黑素细胞及A375恶性黑素瘤细胞中的表达;将体外培养的A375细胞分为mimics NC组、mi R-508-3p mimics组、inhibitor NC组和mi R-508-3p inhibitor组,RT-qPCR检测其沉默效果及对FOXC1 mRNA水平的影响;免疫印迹法(Western blot)分别检测FOXC1蛋白的表达量;MTT法检测A375细胞的增殖能力;Transwell实验检测转染后A375细胞侵袭及迁移能力的变化;荧光素酶报告基因技术检测FOXC1是否为mi R-508-3p的直接靶基因。结果与人正常黑素细胞相比,A375细胞中mi R-508-3p表达明显降低,而FOXC1表达明显升高;与inhibitor NC组相比,转染mi R-508-3p inhibitors的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显下调,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显升高;与mimics NC组相比,转染mi R-508-3p mimics的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显升高,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低;mi R-508-3p mimics可降低野生型FOXC1 3’-UTR的荧光素酶报告基因相对活性。结论 mi R-508-3p通过负向调控FOXC1抑制恶性黑素瘤的增殖、迁移和侵袭。

叉头翼状螺旋转录因子基因多态性与广西汉族妇女宫颈HPV感染的关联

目的探讨叉头翼状螺旋转录因子(FOXP3)基因多态性与广西汉族妇女宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法选取96例宫颈HPV感染患者,将其纳入感染组,选取同期69例非HPV感染者,将其纳入对照组,采用基因测序法检测两组人群中FOXP3基因rs3761548和rs2232365位点基因多态性,并评估其相关性。结果感染组和对照组FOXP3基因rs3761548和rs2232365位点基因型频率分布无统计学意义,均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。FOXP3基因rs3761548位点CC基因型、AC+AA基因型和A/C等位基因频率在感染组和对照组中整体比较,差异有统计学意义(P<0.05);FOXP3基因rs2232365位点AA基因型、AG+GG基因型和A/G等位基因频率在感染组和对照组中整体比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FOXP3基因rs3761548位点A等位基因和rs2232365位点G等位基因可能会增加广西汉族妇女宫颈HPV感染的发生风险。

敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1调控微小RNA-194-5p/叉头框蛋白A1通路对脂多糖诱导的人肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的观察敲降长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录因子1(lncRNA-MALAT1)调控微小RNA-194-5p(miR-194-5p)/叉头框蛋白A1(FOXA1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响.方法采用1 mg/L LPS处理HPAEpiC复制脓毒症急性肺损伤(ALI)体外模型.采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测HPAEpiC细胞中MALAT1、miR-194-5p的表达水平,构建MALAT1敲降载体、miR-194-5p抑制剂及FOXA1抑制剂转染HPAEpiC,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、LPS+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂组、LPS+MALAT1抑制剂+生理盐水组、LPS+MALAT1抑制剂+miR-194-5p抑制剂组和LPS+FOXA1抑制剂组.采用CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒、流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测MALAT1或其敲降后对LPS诱导的HPAEpiC增殖及凋亡和FOXA1表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测lncRNA-MALAT1、miR-194-5p及FOXA1的靶向调控关系.结果与空白对照组比较,LPS可上调HPAEpiC-MALAT1的表达,促进HPAEpiC凋亡并抑制其增殖〔MALAT1(2^(-ΔΔCt)):0.83±0.09比0.15±0.02,HPAEpiC凋亡率:(21.31±2.31)%比(5.41±0.42)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.42±0.03比0.54±0.02,均P<0.05〕;与LPS+生理盐水组比较,敲降MALAT1可抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔细胞凋亡率:(6.40±0.40)%比(21.38±2.31)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.53±0.03比0.40±0.02,均P<0.05〕,降低MALAT1的表达(2-ΔΔCt:0.20±0.03比1.02±0.09,P<0.05).双荧光素酶报告基因及Western Blot证实,敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p从而抑制FOXA1在LPS诱导的HPAEpiC中的表达〔miR-194-5p(2^(-ΔΔCt)):5.27±0.15比1.21±0.09,FOXA1蛋白表达(灰度值):0.36±0.05比1.00±0.07,均P<0.05〕,miR-194-5p抑制剂能逆转MALAT1敲降在LPS诱导的HPAEpiC中对FOXA1的作用〔FOXA1蛋白表达(灰度值):2.76±0.20比1.00±0.07,P<0.05〕,抑制FOXA1表达能减轻LPS诱导的HPAEpiC凋亡并促进其增殖〔FOXA1蛋白表达(灰度值):0.28±0.03比1.00±0.03,HPAEpiC凋亡率:(6.78±0.38)%比(19.21±0.70)%,24 h HPAEpiC增殖活性(A值):0.59±0.20比0.41±0.02,均P<0.05〕.结论敲降MALAT1通过靶向上调miR-194-5p抑制FOXA1的表达,进而抑制LPS诱导的HPAEpiC凋亡,为脓毒症ALI的诊断和治疗提供了潜在的分子靶点.

叉头框转录因子M1和转移相关基因1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与临床特征和预后的相关性分析

目的探讨叉头框转录因子M1(crosshead box transcription factor M1,FOXM1)和转移相关基因1蛋白(transfer related gene 1 protein,MTA1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其与临床特征和预后的相关性。方法选取2012年6月—2014年2月收治的行手术治疗的86例NSCLC作为研究对象,记录患者的临床资料,检测FOXM1、MTA1表达情况,观察疾病转移、预后情况,分析FOXM1、MTA1表达与NSCLC患者临床特征的关系,采用多因素logistic回归分析观察影响NSCLC患者预后的危险因素。结果FOXM1阳性表达76例,阴性表达10例,阳性率为88.37%;MTA1高表达68例,低表达18例,高表达率为79.07%。34例生存,52例死亡,生存率39.53%。是否吸烟、肿瘤分化程度、是否发生远处转移的NSCLC患者FOXM1表达情况比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),是否吸烟、不同TNM分期、不同肿瘤直径、不同肿瘤分化程度、是否发生远处转移的NSCLC患者MTA1表达情况比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。单因素分析显示,年龄、是否吸烟、TNM分期、肿瘤直径、肿瘤分化程度、是否发生远处转移、FOXM1及MTA1表达情况是影响NSCLC患者预后的相关因素(P<0.05或P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,年龄≤60岁、吸烟、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径>3 cm、肿瘤分化程度低分化、发生远处转移、FOXM1表达阳性、MTA1高表达为影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05或P<0.01)。结论FOXM1表达阳性、MTA1高表达为影响NSCLC患者预后的不良因素,临床应提高警惕。

miR-4539通过靶向作用于叉头盒转录因子1抑制胶质瘤细胞生长的实验研究

目的 探讨miR-4539抑制胶质瘤细胞生长的效应及相关机制。方法 采用RT-PCR法检测脑胶质瘤标本和7株胶质瘤细胞株中miR-4539的表达水平。采用CCK-8法、流式细胞法、Western blot法检测miR-4539在胶质瘤细胞中的作用。采用双荧光素酶实验验证叉头盒转录因子1(Foxp1)是否是miR-4539的直接靶点。构建小鼠移植瘤模型,探讨miR-4539转染对小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果 (1)miR-4539在胶质瘤组织中的表达水平显著低于正常脑组织(P<0.05)。miR-4539在7个常用的人脑胶质瘤细胞系(U87、U251、U373、T98G、LN18、LN229、SF295)中的表达量显著低于人正常脑胶质细胞株HEB(P<0.05)。(2)与miR-NC组相比,miR-4539转染72 h后,T98G细胞和LN18细胞中miR-4539的表达水平都显著增加(P<0.05)。CCK-8检测显示,外源性miR-4539过表达可显著抑制T98G和LN18细胞的增殖。同时可诱导T98G和LN18细胞周期阻滞,G0/G1期细胞百分率增加,S期细胞百分率降低,且细胞周期调控蛋白cyclinD1、cyclinE1和Ser780的表达水平也显著降低(P<0.05)。(3)荧光素酶报告显示,Foxp1是miR-4539的直接靶点,可被miR-4539直接调控。接种T98G细胞后6周,miR-4539转染组小鼠移植瘤平均体积、平均重量均显著小于miR-NC组(P<0.05)。(4)T98G和LN18细胞过表达miR-4539后,Foxp1mRNA和蛋白表达都显著降低,免疫荧光结果也确认,miR-4539降低了Foxp1在T98G细胞和LN18细胞中的表达。结论 miR-4539可通过靶向作用于Foxp1发挥抑癌因子效应,有望成为脑胶质瘤患者诊断和治疗的新靶点。

血清肺腺癌转移相关转录因子-1、叉头框转录因子M1和神经生长因子表达水平与肺癌患者临床病理特征及肿瘤转移的关系

目的探讨血清肺腺癌转移相关转录因子-1(MALAT-1)、叉头框转录因子M1(Fox M1)和神经生长因子(NGF表达水平与肺癌患者临床病理特征及肿瘤转移的关系。方法我院收治的152例肺癌患者(肺癌组),同期55例健康志愿者(对照组)。检测血清MALAT-1、Fox M1和NGF表达水平,分析血清MALAT-1、Fox M1、NGF高水平与低水平组的临床病理特征及肿瘤转移特征。随访至2021年4月,记录肺癌患者的总生存时间。结果肺癌组血清MALAT-1、Fox M1、NGF水平均高于对照组(P<0.05);MALAT-1高水平患者中腺癌、Ⅳ期、有区域淋巴结转移、有远处转移的比例高于MALAT-1低水平患者(P<0.05);Fox M1高水平患者中Ⅳ期、有区域淋巴结转移、有远处转移的比例高于Fox M1低水平患者(P<0.05);NGF高水平患者中Ⅳ期、肿瘤低分化、有区域淋巴结转移、有远处转移的比例高于NGF低水平患者(P<0.05)。血清MALAT-1水平与病理类型、临床分期、区域淋巴结转移、远处转移呈正相关;血清Fox M1水平与临床分期、区域淋巴结转移、远处转移呈正相关;血清NGF水平与临床分期、区域淋巴结转移、远处转移呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(P<0.05)。MALAT-1高、低水平患者的中位总生存期为27.3个月、37.9个月;Fox M1高、低水平患者的中位总生存期为31.8个月、38.6个月;NGF高、低水平患者的中位总生存期为31.8个月、37.9个月,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌患者血清MALAT-1、Fox M1和NGF表达水平与病理类型、临床分期、区域淋巴结转移、远处转移有关,高表达水平意味着预后不良。

过表达微小RNA-877-5p通过靶向叉头框转录因子M1调控胃癌细胞活力和凋亡

目的探讨微小RNA-877-5p(miR-877-5p)对胃癌细胞活力、凋亡的影响及其分子机制。方法本研究时间为2020年1—7月。胃癌和正常胃黏膜上皮细胞株购自美国典型培养物保藏中心。实时定量基因扩增荧光检测(qPCR)检测胃癌细胞株HGC-27、SUN-1、AGS和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中miR-877-5p和叉头框转录因子M1(FOXM1)信使核糖核酸(mRNA)表达。建立miR-877-5p过表达或抑制FOXM1表达细胞株,观察其在HGC-27细胞的活力、凋亡中的作用。MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测FOXM1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase 3)蛋白表达。TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR-877-5p和FOXM1的靶向关系。共转染miR877-5p模拟物和FOXM1过表达载体(pcDNA-FOXM1),研究FOXM1过表达对miR-877-5p过表达诱导的HGC-27细胞增殖和凋亡的影响。结果与正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,胃癌细胞HGC-27、SUN-1、AGS中的miR-877-5p表达下调(1.00±0.08比0.34±0.03,0.51±0.05,0.44±0.04,P<0.05),FOXM1 mRNA和蛋白表达上调(1.00±0.09比2.41±0.23,2.58±0.24,2.26±0.23,P<0.05)。miR-877-5p过表达显著降低HGC-27细胞48 h、72 h的细胞活力(P<0.05),明显提高细胞凋亡率、p21、p27、Bax、cleavedcaspase3蛋白的水平(P<0.05),显著减少cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)。抑制FOXM1表达显著降低48 h、72 h的细胞活力(P<0.05),提高细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平(P<0.05),减少cyclinD1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)。miR-877-5p靶向调控FOXM1的表达。FOXM1过表达后,miR-877-5p过表达对HGC-27细胞增殖、cyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用被逆转,其对细胞凋亡、p21、Bax蛋白表达的促进作用也被逆转。结论过表达miR-877-5p通过靶向调控FOXM1表达抑制胃癌细胞的活力,并诱导细胞凋亡。

B7-1与B7-2对调节人IL-2基因的转录因子NF-κB和AP-1的相同作用

为了解B7共刺激对细胞因子 ,特别是对IL 2mRNA及转录因子NF κB和AP 1的影响 ,探讨B7介导的IL 2调节的分子机制 ,在异基因混合淋巴细胞反应 (MLR)体系中分别或联合加入抗B7 1、抗B7 2单克隆抗体和CTLA 4Ig以阻断B7/CD2 8信号传导 ,通过竞争性PCR定量检测其对IL 2和IL 4mRNA的影响 ,并初步测定IFN γmRNA的改变 ,同时用转染MHCⅡ类分子及联合转染等量B7 1或B7 2的NIH3T3转基因细胞tDR7,tDR7/B7 1和tDR7/B7 2刺激CD2 8+ T细胞 ,通过DNA 蛋白结合实验观察B7对IL 2转录因子NF κB和AP 1的影响。结果表明 :抗B7 2单抗和CTLA 4Ig可明显抑制B7介导的IL 2和IL 4mRNA合成 ,而抗B7 1单抗仅有轻度抑制作用 ,2种或 3种抗体联合应用时抑制作用相加。MLR 1 - 6小时 ,单独tDR7即可诱导NF κB的表达 ,联合转染B7早期对其结合活力无明显影响 ,6小时后tDR7诱导作用减弱 ,B7却可显著延长tDR7的诱导作用至 72小时。tDR7早期同样可诱导AP 1的表达 ,联合转染B7分子在 2 4小时内对其有一定的抑制作用 ,而在反应后期可延长tDR7对AP 1的上调作用 ,B7 1与B7 2间作用未见明显不同。结论 :B7通过减少IL 2mRNA降解和影响基因转录而上调IL 2分泌 ,并可同时影响多种细胞因子分泌 ;在转录水平B7 1与B7 2作用未见明显不同 。

叉头框转录因子M1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

目的探讨叉头框转录因子M1(FoxM1)在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义。方法利用实时荧光定量PCR、Western blot检测20例甲状腺乳头状癌组织及相应的20例癌旁正常甲状腺组织和20例甲状腺腺瘤组织中FoxM1mRNA和蛋白的表达水平并进行统计学分析。结果 FoxM1 mRNA及蛋白表达在甲状腺乳头状癌组织中显著高于癌旁正常甲状腺组织及甲状腺腺瘤组织(均P<0.01),癌旁正常甲状腺组织和甲状腺腺瘤组织比较差异无统计学意义(P>0.05),甲状腺乳头状癌有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.01),包膜侵犯组高于包膜无侵犯组(P<0.01)。FoxM1 mRNA及蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期均无关(P>0.05)。结论 FoxM1 mRNA及蛋白的异常表达可能与甲状腺乳头状癌的发生发展、淋巴结转移、包膜侵犯有关,有望成为甲状腺乳头状癌诊治中的一个新的标志物。

甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞转化生长因子-β_1基因转录的影响

目的:探讨甲状旁腺激素(PTH)对大鼠成骨细胞(ROB)的转化生长因子-β1-(TGF-β1)基因转录的影响。方法:ROB被分成3组培养:(1)对照组,在每个培养周期(48h)的前6h和后42h的培养液中均不加PTH;(2)PTH间歇刺激组(间刺组),仅在前6h的培养液中加PTH;(3)PTH持续刺激组(持刺组),前6h和后42h的培养液中均加PTH。第3周期细胞内mRNA含量用RT-PCR测定。结果:第3周期细胞内mRNA含量变化情况为:第6小时以间刺组最高,其余二组相似;第24小时依次是间刺组>对照组>持刺组;第48小时间刺组与对照组相似,持刺组最低。结论:PTH间歇与持续刺激对TGF-β1基因转录均有明显影响,该基因转录增强可能是PTH间歇刺激促成骨机制之一。