溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1、核因子-κΒmRNA表达与病情严重程度关系研究

目的:探究溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜组织叉头框转录因子M1(FoxM1)、核因子-κΒ(NF-κΒ)mRNA表达与病情严重程度的关系。方法:选取活动期UC患者128例为活动期UC组、缓解期UC患者81例为缓解期UC组、结肠单发息肉切除术后肠镜复查正常者88例为对照组。以改良Truelove和Witts分型标准将活动期UC患者按病情严重程度分成活动期轻度组(53例)和活动期中度组(46例)和活动期重度组(29例)。荧光定量PCR法检测受试者结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达。比较对照组、缓解期UC组、活动期UC组和不同病情严重程度活动期UC患者FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达及改良Mayo评分。分析UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分的相关性,影响活动期UC患者重度病情发生的因素,FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA预测活动期UC患者重度病情发生的价值。结果:与对照组和缓解期UC组比较,活动期UC组结肠黏膜组织FoxM1、NF-κΒmRNA表达水平升高(均P<0.05)。与缓解期UC组比较,活动期UC组改良Mayo评分升高(P<0.05)。活动期轻度组、活动期中度组、活动期重度组结肠黏膜组织FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA表达水平及改良Mayo评分依次升高(均P<0.05)。UC患者结肠黏膜组织FoxM1 mRNA与NF-κΒmRNA表达呈正相关(P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA与改良Mayo评分呈正相关(均P<0.05)。FoxM1 mRNA、NF-κΒmRNA、改良Mayo评分是活动期UC患者发生重度病情的危险因素(均P<0.05)。FoxM1、NF-κΒmRNA两项联合预测活动期UC患者发生重度病情的曲线下面积(AUC)高于FoxM1、NF-κΒmRNA各自单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:FoxM1、NF-κΒmRNA在活动期UC患者结肠黏膜组织中呈高表达,且病情越重两者升高趋势越明显,可用于预测活动期UC患者重度病情的发生。

辅助性T细胞17/调节性T细胞及维甲酸相关孤儿受体γt/叉头框转录因子P3失衡在妊娠相关疾病中的研究进展

在免疫学领域,妊娠相当于一次成功的半同种移植现象,母体对半异体胎儿的免疫耐受情况关乎妊娠的结局。辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)是最新发现的CD^(+)_(4)T淋巴细胞亚群,相关转录因子维甲酸相关孤儿受体γt和叉头框转录因子P3的表达水平与Th17/Treg之间的平衡密切相关。Th17/Treg免疫失衡会导致母体对胎儿的异常攻击,造成母胎耐受紊乱,并与复发性流产、先兆子痫、妊娠糖尿病等病理妊娠有关。

2型糖尿病病人血清沉默信息调节因子2相关酶1和叉头样转录因子O4表达与糖尿病视网膜病变的关系

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人血清沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)和叉头样转录因子O4(FOXO4)表达与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法采用随机数字表法将2021年8月至2022年8月在七台河市人民医院收治的142例T2DM病人纳入研究,按照国际临床DR严重程度量表分为无DR组62例、非增殖性(NPDR)组50例和增殖性(PDR)组30例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清SIRT1和FOXO4的表达水平;Pearson法分析血清中SIRT1和FOXO4表达水平的相关性;logistic回归分析影响T2DM病人DR发生的因素。ROC曲线分析血清中SIRT1和FOXO4对T2DM病人DR发生的诊断价值。结果PDR组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)[(1.22±0.15)mmol/L比(1.98±0.17)mmol/L、(1.64±0.18)mmol/L]、SIRT1水平[(3.82±0.50)μg/L比(5.36±0.56)μg/L、(4.65±0.52)μg/L]显著低于无DR组及NPDR组,NPDR组显著低于无DR组;PDR组收缩压(SBP)、三酰甘油(TG)、FOXO4[(14.63±1.48)μg/L比(12.62±1.45)μg/L、(13.74±1.46)μg/L]水平显著高于无DR组及NPDR组,NPDR组显著高于无DR组(P<0.05)。相关性分析显示,血清SIRT1和FOXO4表达水平呈负相关关系(r=−0.47,P<0.001)。logistic回归分析显示,HDL-C、SIRT1和FOXO4表达水平是影响T2DM病人DR发生的因素(P<0.05)。二者联合诊断DR发生的ROC曲线下面积(AUC)高于SIRT1和FOXO4单独诊断的AUC值(Z=32.22,P<0.001;Z=19.03,P<0.001)。结论T2DM病人血清中SIRT1表达水平显著降低,FOXO4表达水平显著升高,二者是影响T2DM病人DR发生的因素。

YTH结构域家族蛋白2和叉头蛋白转录因子3在肺腺癌中的表达关系研究

目的 分析YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)及叉头蛋白转录因子3(FOXO3)在肺腺癌病人中的表达及与预后的关系。方法 收集2020年1月至2021年5月在郑州大学第一附属医院行手术治疗的肺腺癌病人癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织5 cm以上)80对,收集病人临床病理资料;利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库查询YTHDF2、FOXO3基因在肺腺癌中的表达水平;采用免疫组织化学法检测YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的表达情况;分析YTHDF2、FOXO3蛋白水平与肺腺癌病人临床病理资料的关系;分析肺腺癌中YTHDF2与FOXO3基因表达水平的相关性;对病人进行为期3年的随访,分析病人3年累积生存率。结果 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的高表达率分别为34.00%、26.00%,明显低于癌旁正常组织中79.48%、61.54%(P<0.05)。YTHDF2蛋白表达情况与肺腺癌病人年龄、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);与TNM分期、性别无关(P>0.05);FOXO3蛋白表达情况与肺腺癌病人性别和分化程度相关(P<0.05);肺腺癌组织中YTHDF2蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为53.30%、14.00%,经log-rank比较,差异有统计学意义(P<0.05);FOXO3蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为64.50%、12.20%,经Log-Rank比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YTHDF2、FOXO3在肺腺癌组织中均低表达,与病人肿瘤分化程度及3年累积生存率有关,有望成为评估肺腺癌病人预后的生物标志物。

甲状腺乳头状癌组织中肿瘤转移相关基因1、叉头翼螺旋转录因子3水平变化与临床病理特征及淋巴转移的关系

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)、叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)淋巴转移患者中的作用及临床意义。方法:选取手术治疗的111例PTC患者为研究对象,收集患者的癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察组织中MTA1、FOXP3表达情况;采用多因素Logistic回归风险模型分析影响PTC淋巴转移的因素。结果:111例PTC组织标本中,MTA1的阳性表达率(MTA1阳性例数/癌组织总例数)为78.38%(87/111)高于癌旁组织17.12%(19/111),FOXP3在PTC组织中的阳性表达率(FOXP3阳性例数/癌组织总例数)为70.27%(78/111)高于癌旁组织13.51%(15/111),两组比较差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman等级相关分析结果显示MTA1与FOXP3表达呈正相关(r=0.532,P=0.000);PTC患者癌组织中MTA1与FOXP3表达与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);单因素分析结果显示淋巴转移患者与未转移患者在性别、病灶数、包膜侵犯、TNM分期、脉管侵犯、MTA1及FOXP3等病理特征方面比较有统计学差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示性别、病灶、TNM分期、包膜侵犯及MTA1、FOXP3表达均是影响PTC淋巴转移的危险因素(均P<0.05)。结论:MTA1、FOXP3在PTC患者癌组织中表达均升高,其表达水平与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关,可作为评估PTC淋巴转移的有效指标。

CC类趋化因子22、叉头框蛋白P1在急性髓系白血病外周血中的表达及对预后的预测价值

目的探讨急性髓系白血病(AML)病人外周血中CC类趋化因子22(CCL22)、叉头框蛋白P1(FOXP1)表达水平及其预后预测价值。方法选择2018年5月至2019年5月在孝感市中心医院、华中科技大学医学院附属同济医院及咸宁市中心医院确诊的68例AML病人设为观察组,另取同期健康体检者68例作为对照组,采用酶联免疫法测定外周血CCL22,FOXP1表达水平,分析其与临床特征的关系;采用Pearson法分析AML病人外周血中CCL22,FOXP1表达的相关性;采用Kaplan-Meier生存分析法分析CCL22,FOXP1表达与总体生存时间(OS)的关系;采用Cox比例风险回归模型分析病人预后死亡的影响因素。结果与对照组相比,观察组CCL22[(600.27±62.89)ng/L比(756.84±100.86)ng/L],FOXP1[(56.02±13.68)ng/L比(103.06±22.16)ng/L]表达均明显升高(t=10.86,14.90,均P<0.05);CCL22,FOXP1表达水平与AML病人年龄、性别、染色体预后、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)、FMS样酪氨酸激酶3-内部串联重复基因(FLT3-ITD)、核仁磷酸蛋白基因1(NPM1)突变无关(χ^(2)=0.06~2.95,均P>0.05),与脾肿大、白细胞计数(WBC)有关(χ^(2)=5.90~8.59,均P<0.05);Pearson法分析结果显示,AML病人外周血中CCL22与FOXP1表达呈正相关(r=0.27,P<0.05);Kaplan-Meier法分析结果显示,AML病人外周血CCL22,FOXP1高表达组3年生存率均低于低表达组(47.06%比70.59%,44.12%比73.53%)(χ^(2)=6.50,P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,CCL22,FOXP1是影响AML病人预后的独立危险因素(P<0.05)。结论CCL22,FOXP1在AML病人外周血中呈高表达,CCL22,FOXP1高表达组病人3年生存率均低于低表达组,二者有望成为AML病人预后评估的分子标志物。

沉默信息调节因子1/叉头框蛋白O1信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的影响实验研究

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮)。将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预)。RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达。Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平。ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe^(2+)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平降低,卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P<0.05)。结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡。

沉默信息调节因子1/叉头转录因子1通路上调微小RNA-203对慢性心力衰竭大鼠的干预实验研究

目的:探究沉默信息调节因子1/叉头转录因子1(Sirt1/Foxo1)通路上调微小RNA-203(miR-203)对慢性心力衰竭大鼠的干预效果。方法:选取45只SD健康大鼠,随机选中10只作为对照组,其余采用左冠状动脉结扎术建立慢性心力衰竭模型,共有30只大鼠建模成功,分为模型组、下调组、上调组,每组各10只,对照组只做穿线不结扎。对照组和模型组每天给予等量0.9%氯化钠溶液,下调组大鼠注射miR-203 inhibitor慢病毒注射,上调组大鼠注射miR-203 mimics慢病毒,观察大鼠的情况变化。结果:与对照组比较,模型组、下调组、上调组miR-203表达量均降低(均P<0.05);与模型组比较,下调组miR-203表达量降低,上调miR-203表达量升高(均P<0.05);与下调组比较,上调组miR-203表达量升高(P<0.05),说明转染成功。与对照组比较,经干预2、4周后模型组、下调组、上调组大鼠的心室射血分数(LVEF)、左心室短轴收缩率(LVFS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P X)、超氧化物歧化酶(SOD)水平均降低,左心室舒张末期内径(LVIDD)、左心室收缩末期内径(LVIDS)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、过氧化氢(H_(2)O_(2))、丙二醛(MDA)水平均升高(均P<0.05);与模型组比较,经干预2、4周后下调组大鼠的LVEF、LVFS、GSH-P X、SOD水平均降低,LVIDD、LVIDS、AngⅡ、ALD、TNF-α、IL-6、IL-1β、H_(2)O_(2)、MDA水平均升高,上调组大鼠的LVEF、LVFS、GSH-PX、SOD水平均升高,LVIDD、LVIDS、AngⅡ、ALD、TNF-α、IL-6、IL-1β、H_(2)O_(2)、MDA水平均降低(均P<0.05);与下调组比较,经干预2、4周后上调组大鼠的LVEF、LVFS、GSH-P X、SOD水平均升高,LVIDD、LVIDS、AngⅡ、ALD、TNF-α、IL-6、IL-1β、H_(2)O_(2)、MDA水平均降低(均P<0.05)。与对照组比较,模型组、下调组、上调组沉默信息调节因子1(Sirt1)表达量降低,叉头转录因子1(Foxo1)表达量均升高(均P<0.05);与模型组比较,下调组Sirt1表达量降低,Foxo1表达量均升高,上调组Sirt1表达量升高,Foxo1表达量均降低(均P<0.05);与下调组比较,上调组Sirt1表达量升高,Foxo1表达量均降低(均P<0.05)。结论:上调miR-203可降低氧化应激,减轻机体炎症反应,改善心脏功能,作用机制可能与Sirt1/Foxo1信号通路有关。

高脂肥胖大鼠肝脏组织中叉头状转录因子O1的表达及其与糖脂代谢的关系

目的:观察高脂肥胖大鼠肝脏组织中叉头状因子O1(FoxO1)的表达,探讨其与血糖、血脂代谢的关系。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为对照组(10只,给予常规饲料)和高脂组(20只,给予高脂饲料),共饲养10周。饲养期末取符合肥胖标准的16只大鼠定为肥胖组。检测2组大鼠空腹血糖(FBG)、胰岛素(Ins)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇指数(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;采用稳态模型指数(HO-MA-IR)评价胰岛素抵抗程度;实时荧光定量RT-PCR检测2组大鼠肝脏FoxO1mRNA的表达。结果:饲养10周后,肥胖组大鼠FBG、Ins、TG、TC、LDL-C和HOMA-IR水平均较对照组升高(t分别为1.952、25.566、8.642、5.845、9.922和23.234,P均<0.05)。与对照组的(19.3±5.1)相比,肥胖组大鼠肝脏FoxO1mRNA表达量(35.6±4.4)增加(t=8.649,P<0.001)。肥胖组大鼠肝脏FoxO1mRNA表达与FBG(r=0.565,P=0.004)、Ins(r=0.564,P=0.004)、TG(r=0.626,P=0.001)和HOMA-IR(r=0.578,P=0.003)呈正相关。结论:高脂肥胖大鼠肝脏组织中FoxO1的表达量升高,且其与血糖、血脂代谢有关,可能参与肥胖和胰岛素抵抗的发病。

叉头盒转录因子O1基因多态性与中国重庆汉族人2型糖尿病相关性研究

目的 探讨叉头盒转录因子O1（FOXO1）基因单核苷酸多态性（SNPs）与中国重庆汉族人2型糖尿病（T2DM）的相关性.方法 （1）在无血缘关系的105名中国重庆汉族人中,采用PCR-RFLP和基因测序法,对FOXO1基因编码区和非编码区的15个SNPs进行筛查,连锁不平衡（LD）分析,构建单倍型.（2）选择重庆地区704名汉族人（414名T2DM患者,290名健康人）进行病例对照研究,对位于同一单倍域的5个SNPs进行基因型鉴定,分析SNPs及单倍型与T2DM的关联.结果 （1）共筛查到12个SNPs;外显子Thr488Asn在该人群中未发现多态现象.LD分析提示rs17592236、rs9577066、rs7986407、rs4581585和rs4325426位于同一单倍域内（D＇＞0.7）.（2）rs7986407、rs4581585与T2DM发病相关：rs7986407位点AA基因型个体T2DM患病风险是GG基因型的1.42倍（additive模式OR=1.420,95％CI：0.783～2.577,P=0.011）;rs4581585位点CC基因型个体T2DM患病风险是TT基因型的2.57倍（additive模式OR=2.571,95％CI：1.404～4.695,P=0.002）.年龄、体质量指数、血糖、血脂、胰岛素、Homa-IR和Homa-β等在不同基因型间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 FOXO1基因可能是中国重庆汉族人T2DM的易感基因.

叉头框转录因子M1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

目的探讨叉头框转录因子M1(FoxM1)在人类甲状腺乳头状癌组织中的表达及其意义。方法利用实时荧光定量PCR、Western blot检测20例甲状腺乳头状癌组织及相应的20例癌旁正常甲状腺组织和20例甲状腺腺瘤组织中FoxM1mRNA和蛋白的表达水平并进行统计学分析。结果 FoxM1 mRNA及蛋白表达在甲状腺乳头状癌组织中显著高于癌旁正常甲状腺组织及甲状腺腺瘤组织(均P<0.01),癌旁正常甲状腺组织和甲状腺腺瘤组织比较差异无统计学意义(P>0.05),甲状腺乳头状癌有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.01),包膜侵犯组高于包膜无侵犯组(P<0.01)。FoxM1 mRNA及蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期均无关(P>0.05)。结论 FoxM1 mRNA及蛋白的异常表达可能与甲状腺乳头状癌的发生发展、淋巴结转移、包膜侵犯有关,有望成为甲状腺乳头状癌诊治中的一个新的标志物。

超音刺猬蛋白 转录因子叉头框转录因子M1及神经胶质瘤相关癌基因同源物1在宫颈癌中的表达与临床意义

目的探究刺猬因子(Hedgehog)信号通路分子超音速刺猬蛋白(Shh)及其下游转录因子叉头框转录因子M1(FoxM1)和神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)在宫颈癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法选取遂宁市中心医院2016年1月至2016年8月收治的50例宫颈癌患者宫颈黏膜组织作为观察组,选取30例同期收入的宫颈黏膜组织正常的阴道炎患者作为对照组,应用免疫组化检测两组对象宫颈黏膜组织中Shh、FoxM1、Gli1的表达情况,分析宫颈癌组织中Shh、FoxM1、Gli1蛋白表达与临床病理特征之间的关系。结果 Shh、FoxM1、Gli1蛋白在宫颈癌组织中的表达阳性率分别为86%、90%、92%,较正常宫颈组织升高,差异有统计学意义(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1蛋白与患者年龄、肿瘤大小、浸润深度均无显著相关性(P>0.05);Spearman相关性分析显示,Shh在宫颈癌中的表达与组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05);FoxM1只与淋巴结转移相关(P<0.05);Gli1的表达水平与宫颈癌组织的分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1三者之间互为正相关(P<0.05)。结论 Shh、FoxM1、Gli1在宫颈癌组织中呈高表达状态,Shh和Gli1蛋白与宫颈癌组织分化程度有关,而FoxM1蛋白只与宫颈癌是否发生淋巴结转移有关,此三者的检测,有助于宫颈癌的早期诊断,可作为预测宫颈癌发生发展的指标。

白细胞介素-35和叉头样转录因子3在大鼠根尖周炎中的表达

目的:观察大鼠实验性根尖周炎中白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)与叉头样转录因子3(foxhead box p3,Foxp3)的动态表达情况,探讨IL-35在根尖周炎中的作用。方法:选取40只SPF级SD大鼠,随机分为5组,单侧下颌第一磨牙开髓进行根尖周炎造模,分别于术后0、7、14、21、28 d各随机处死一组,下颌骨拍摄X线片,观察根尖周变化情况。取下颌第一磨牙根尖周组织进行苏木精-伊红染色(HE)观察其组织病理变化。实时荧光定量PCR反应(real-time qPCR,RT-qPCR)动态检测根尖周病损组织中IL-35和Foxp3 mRNA的表达情况。结果:X线和HE染色显示随着牙髓暴露时间的延长,根尖部炎症程度逐渐加重,待髓腔开放21~28 d时炎症则趋于稳定,从临床表现和组织病理学两方面证实了大鼠根尖周炎造模成功。RT-qPCR结果显示:IL-35和Foxp3 mRNA相对表达量在术后不同时期均呈波动性升高趋势(P<0.01),术后0~7 d迅速上升,7~21 d表达量呈下降趋势(P<0.05),21~28 d又呈上升趋势(P<0.05);Pearson相关分析显示:IL-35mRNA与Foxp3mRNA相对表达量呈正相关关系(r=0.609,P<0.05)。结论:IL-35在大鼠根尖周炎中的表达量与炎症程度成反比,可能通过调控Treg的表达参与根尖周炎的发生发展。

微小RNA在叉头转录因子M_1激活非小细胞肺癌上皮向间质转化中的作用

目的:探讨微小RNA(microRNA)在叉头转录因子M_1(Fox M_1)激活非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞上皮向间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)中的作用。方法:将Fox M_1过表达质粒,Fox M_1-shRNA,miR-539、miR-485-5p模拟物及其抑制物转染至人NSCLC细胞株中,应用Western印迹和real-time PCR检测细胞株中Fox M_1蛋白和mRNA及miR-539、miR-485-5p的表达。同时应用CCK-8和细胞迁移实验观察Fox M_1、miR-539和miR-485-5p对NSCLC细胞的增殖和侵袭功能的影响。应用荧光素酶报告基因实验检测miR-539和miR-485-5p与EMT调控蛋白ZEB_1和Snail_1的关系。结果:Fox M_1过表达下调NSCLC细胞中miR-539、miR-485-5p,转染Fox M_1-shRNA后NSCLC细胞中miR-539、miR-485-5p升高。MiR-539和miR-485-5p抑制Fox M_1对NSCLC细胞增殖和侵袭的促进作用。NSCLC细胞中miR-539对EMT调控蛋白ZEB_1,miR-485-5p对EMT调控蛋白Snail_1的表达有抑制作用。结论:miR-539和miR-485-5p能抑制NSCLC细胞中Fox M_1-EMT通路,从而影响NSCLC细胞的增殖和侵袭,抑制NSCLC的远处转移。

微小RNA-558靶向调控叉头框转录因子C1促进卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭力

目的探讨miR-558通过对叉头框转录因子C1(Forkhead box protein C1,FOXC1)的调控从而对人卵巢癌腺癌细胞(SKOV3)增殖和侵袭能力的影响。方法选择2014年1月至2017年12月郑州大学第三附属医院妇产科收治的上皮性卵巢癌病人25例、交界性卵巢上皮性肿瘤病人25例和良性卵巢上皮性肿瘤病人25例,三组病例均行手术治疗,取其部分经手术切除的卵巢组织标本,使用实时荧光定量PCR技术来分析微小RNA-558(miR-558)的表达水平。把卵巢癌SKOV3细胞分成三组,分别为miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组。通过靶基因预测网站来预测miR-558的靶基因(FOXC1基因),通过荧光素酶报告基因实验来验证miR-558对FOXC1基因表达的调控作用。通过实时荧光定量-PCR技术和蛋白印迹法来分析转染后各组细胞的miR-558和FOXC1的表达水平。通过细胞增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8法)检测三组细胞的增殖率。通过基质胶侵袭实验检测三组细胞的侵袭能力。结果实时荧光定量-PCR结果显示,在上皮性卵巢癌、交界性卵巢上皮性肿瘤和良性卵巢上皮性肿瘤病人的卵巢组织中,miR-558的相对表达水平分别为(3.43±0.42)、(2.47±0.35)、(1.37±0.31);在miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组中,SKOV3细胞miR-558的表达水平分别为(2.37±0.17)、(0.64±0.17)、(1.14±0.11)。在miR-558模拟物组、抑制物组和阴性对照组中,SKOV3细胞的FOXC1基因转录出的信使RNA(mRNA)表达水平分别为(0.51±0.10)、(2.27±0.12)、(0.99±0.11)。荧光素酶报告基因实验结果显示,SKOV3细胞被含miR-558的质粒以及含FOXC1基因的重组质粒共同转染后,的荧光素酶活性下降了49.50%(P<0.05)。蛋白印迹结果显示,上述三组SKOV3细胞中,FOXC1蛋白的表达水平分别为(0.83±0.07)、(2.17±0.15)、(1.47±0.21)。CCK-8检测结果显示,不同时间miR-558模拟物组SKOV3细胞的增殖率明显高于阴性对照组(P<0.05),不同时间miR-558抑制物组SKOV3细胞的增殖率明显低于阴性对照组(P<0.05)。基质胶侵袭实验结果显示,上述三组SKOV3细胞穿透基底膜的细胞数分别为(158.33±9.45)、(67.01±10.58)、(117.67±16.86)(P<0.05)。结论miR-558能够通过靶向调控FOXC1的表达,促进SKOV3细胞的增殖能力和侵袭能力,从而参与卵巢癌的发生发展。

叉头框转录因子M1对人肝癌细胞增殖和凋亡及侵袭的影响

目的探讨叉头框转录因子M1(FoxM1)对人肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法应用定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测6种常见人肝癌细胞系(HepG2、Huh-7、Hep3B、SMMC7721、QSG7701、BEL7402)及人正常肝细胞系LO-2中FoxM1的mRNA和蛋白表达水平。选取FoxM1高表达的肝癌细胞系,应用靶向FoxM1的短发卡RNA(shRNA)下调FoxM1表达,观察其对肝癌细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。观察下调FoxM1表达的肝癌细胞在裸鼠体内的成瘤情况。结果在6种常见肝癌细胞系及人正常肝细胞系中,HepG2及BEL7402的FoxM1的mRNA和蛋白表达水平最高,选取HepG2与BEL7402细胞系进行后续实验。应用靶向FoxM1的shRNA下调FoxM1的表达后,HepG2与BEL7402细胞系的shRNA组细胞凋亡率均高于对照组[(12.6±1.9)%比(4.6±0.5)%、(10.3±0.5)%比(3.9±1.9)%],G_(2)/M期细胞比例均低于对照组,细胞计数试剂盒-8实验96 h时450 nm处吸光度值均低于对照组,划痕实验中划痕愈合率均低于对照组,Transwell实验中穿膜细胞数均低于对照组(均P<0.05)。在动物体内实验中,HepG2细胞系shRNA组实验16、20 d肿瘤体积小于对照组,BEL7402细胞系shRNA组实验12、16、20 d肿瘤体积小于对照组,两细胞系shRNA组实验20 d时肿瘤质量均低于对照组(均P<0.05)。结论下调FoxM1能够促进肝癌细胞的凋亡,导致细胞周期发生停滞,抑制细胞增殖,降低细胞迁移、侵袭能力和体内成瘤能力。

生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1(FOXD1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法研究于2018年12月至2019年12月进行,通过体外培养PANC-1细胞,经过不同浓度(0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的生长抑素(SST)处理细胞,记为生长抑素各剂量组,其中0 mg/L和400 mg/L的生长抑素作为对照组(Control)和生长抑素组(SST);将过表达载体(pcDNA)和过表达FOXD1(FOXD1)转染至PANC-1细胞,经过400 mg/L的生长抑素及20 mol/L的PI3K抑制剂LY294002处理细胞,记为SST+pcDNA组、SST+FOXD1组和SST+FOXD1+LY294002组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、FOXD1和PI3K/AKT相关蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测FOXD1 mRNA的表达。结果与Control组相比,SST组可以抑制FOXD1 mRNA(0.47±0.03)及蛋白表达(0.42±0.04)、增殖(0.52±0.05)、迁移(66.8±7.2)和侵袭(63.7±6.5)能力,下调p-PI3K(0.43±0.04)、p-AKT(0.39±0.03)蛋白表达;与SST+pcDNA组相比,SST+FOXD1组可以促进以抑制FOXD1 mRNA(0.67±0.05)及蛋白表达(0.64±0.06)、增殖(0.71±0.07)、迁移(86.9±8.5)和侵袭(81.5±7.3)能力,上调p-PI3K(0.62±0.05)、p-AKT(0.65±0.06)蛋白表达。与SST+FOXD1组相比,SST+FOXD1+LY294002组可以抑制FOXD1 mRNA(0.37±0.04)及蛋白表达(0.35±0.03)、增殖(0.53±0.05)、迁移(67.2±6.5)和侵袭(62.5±5.2)。结论生长抑素通过调控FOXD1的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

叉头状转录因子O1基因过表达慢病毒载体构建及其大鼠系膜细胞株的建立

目的构建含组成性激活突变型Fox O(CA-Fox O1 1)基因的过表达慢病毒载体,并建立其过表达的大鼠肾小球系膜细胞株。方法通过四质粒合成法构建包含CA-Fox O1编码序列的过表达慢病毒载体(LV-CA-Fox O1)。实验分为3组:空白对照组(NC组)、空慢病毒载体阴性对照组(LV-empty-Fox O1组)和过表达慢病毒载体组(LV-CA-Fox O1组)。培养系膜细胞(RMCs)72 h后,用流式细胞仪检测RMCs中绿色荧光蛋白(GFP)阳性率,并采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测Fox O1的m RNA及蛋白表达情况。结果成功构建LV-CA-Fox O1,其病毒滴度为1×108TU/ml。LV-empty-Fox O1组和LV-CA-Fox O1组GFP阳性率分别为84.5%和81.4%;与NC组相比,LV-CA-Fox O1组Fox O1的m RNA与蛋白表达量相当于NC组的27.92倍与5.41倍(均P<0.05);而NC组与LV-empty-Fox O1组Fox O1的m RNA及蛋白表达量差异均无统计学意义。结论成功构建了大鼠Fox O1基因的过表达慢病毒载体,并建立了稳定过表达Fox O1的大鼠肾小球系膜细胞株,为进一步研究Fox O1的功能和作用机制奠定了研究基础。

叉头转录因子1质粒标准品的构建

背景:研究表明叉头转录因子1是一种新的2型糖尿病易感基因,但2型糖尿病患者与健康人的叉头转录因子1基因在转录水平上差异性的研究不多。由于还没有商品化叉头转录因子1的质粒标准品,因此有必要构建其标准品。目的:构建应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测叉头转录因子1mRNA的质粒标准品。设计、时间及地点:单一样本重复实验,于2007-11/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成。材料:SYBRExScriptTM反转录-聚合酶链反应Kit试剂盒,SYBRPremixExTaqTM试剂盒,凝胶回收纯化DNA试剂盒,质粒DNA小量纯化试剂盒,PMD18-TVector试剂盒等。方法:从健康志愿者血标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板应用聚合酶链反应扩增出目的片段,对其回收纯化连接到PMD18-T载体及转化JM109,阳性克隆经测序分析,确认重组质粒正确。抽提重组质粒,用紫外分光光度仪测定其浓度,再根据公式换算成拷贝浓度,最后稀释成梯度标准品。主要观察指标:重组质粒聚合酶链反应和基因测序结果,标准品标准曲线的相关系数及标准品的重复性。结果:成功构建了叉头转录因子1质粒标准品,通过聚合酶链反应及基因测序鉴定其目的片段已成功插入载体。各稀释度的标准品经荧光定量-聚合酶链反应扩增后,其循环阈值与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性范围是2.39×(105～1012)copies/mL。各稀释度标准品的批内重复性好,其变异系数范围为0.29%～1.16%。结论:实验成功构建了具有较好灵敏度和重复性的叉头转录因子1质粒标准品。

子宫内膜癌组织叉头框转录因子O亚型3a与基质金属蛋白酶-14表达水平及相关性

目的检测子宫内膜癌中叉头框转录因子O亚型(FOXO)3a和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达。方法 63例行子宫内膜癌根治手术患者作为观察组,并留取术后组织,40例子宫内膜复杂性增生患者术后标本作为对照组,40例增生期子宫内膜诊刮标本作为正常对照组。采用免疫组化SP法检测3组中FOXO3a和MMP-14的表达。结果 FOXO3a和MMP-14在三组中的表达有统计学意义。观察组中FOXO3a和MMP-14的阳性率均与肌层浸润深度、淋巴结累犯密切相关,FOXO3a的阳性率与肿瘤的最大径密切相关。观察组中FOXO3a和MMP-14的表达呈负相关性。结论子宫内膜癌中FOXO3a低表达、MMP-14高表达对肿瘤的形成和进展可能有促进作用,二者具有负向协同作用。