叉头转录因子O1在冬虫夏草预防糖尿病模型大鼠对比剂肾病中的机制

目的 探讨叉头转录因子(Fox)O1在冬虫夏草预防糖尿病模型大鼠对比剂肾病中的机制。方法 SD大鼠80只,随机选取20只为正常对照组(N组),其余60只腹腔注射链脲佐菌素(60mg/kg)建立糖尿病模型,造模成功后再随机分为对比剂肾病组(M组)、冬虫夏草组(D组)、普罗布考组(P组)。10w后,N组和M组给予生理盐水灌胃,D组和P组分别给予冬虫夏草(3.0g/kg)和普罗布考(500mg/kg)灌胃。7d后,麻醉状态下,除N组外,其他三组给予碘克沙醇320(2.0g/kg)。取血标本测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),取尿标本测尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤因子(KIM)-1、白细胞介素(IL)-18;肾脏标本用于肾脏病理研究、氧化应激指标检测、蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/P70核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)通路及FoxO1的研究。结果 与M组比较,D组Scr、BUN、NAGL、KIM-1、IL-18水平均明显降低(P<0.05),P组BUN、Scr、NAGL、IL-18含量明显降低(P<0.05),而KIM-1无明显变化(P>0.05)。与M组比较,D组丙二醛(MDA)含量明显降低,而一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)含量明显升高;P组MDA含量亦明显降低,NO、NOS和SOD含量明显升高(P<0.05),T-AOC无明显变化。与M组比较,D组和P组磷酸化(p-Akt)、p-mTOR、p-P70S6KmRNA及蛋白表达水平均明显升高,p-FoxO1mRNA水平和蛋白表达明显降低,p-FoxO1/FoxO1比值显著降低。结论 冬虫夏草可通过上调信号通路Akt/mTOR/P70S6K蛋白表达水平,进而促使FoxO1高表达,减少其磷酸化水平,减轻氧化应激和肾细胞凋亡,对糖尿病对比剂肾病大鼠的肾脏具有较好的保护作用。

叉头转录因子O1在高糖高脂诱导心肌细胞氧化损伤中作用

目的 探讨叉头转录因子O1(forkhead box O1,FoxO1)在高糖高脂诱导心肌细胞氧化损伤中的作用及其对氧化应激相关蛋白MsrA、Nox4表达的影响。方法 对数生长期大鼠H9c2心肌细胞随机分为对照组(正常培养基培养)、高糖高脂组(高糖高脂培养基培养)、FoxO1抑制剂组(高糖高脂培养基培养+FoxO1抑制剂AS1842856)。3组培养24 h后,采用CCK-8实验检测细胞存活率,ELISA法检测细胞上清液乳酸脱氢酶水平,DCFH-DA染色法检测细胞活性氧表达,JC-1荧光探针染色法检测细胞线粒体膜电位,Western blot法检测细胞p-FoxO1、FoxO1、MsrA、Nox4蛋白相对表达量。结果 高糖高脂组细胞存活率[(82.48±2.86)%]低于对照组[(100.00±2.79)%]、FoxO1抑制剂组[(95.95±1.65)%](P<0.05),乳酸脱氢酶水平[(147.20±13.67)u/L]高于对照组[(101.00±3.04)u/L]、FoxO1抑制剂组[(106.20±8.67)u/L](P<0.05);FoxO1抑制剂组细胞存活率、乳酸脱氢酶水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组和FoxO1抑制剂组比较,高糖高脂组细胞活性氧表达增多、线粒体膜电位降低。高糖高脂组细胞p-FoxO1/FoxO1(0.96±0.25)低于对照组(1.30±0.34)、FoxO1抑制剂组(1.25±0.24)(P<0.05),MsrA、Nox4蛋白相对表达量(1.05±0.26、1.23±0.15)均高于对照组(0.66±0.22、0.94±0.21)、FoxO1抑制剂组(0.65±0.24、1.00±0.19)(P<0.05);FoxO1抑制剂组细胞p-FoxO1/FoxO1及MsrA、Nox4蛋白相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FoxO1过度活化参与高糖高脂诱导的心肌细胞氧化损伤,其机制可能与氧化应激相关蛋白MsrA和Nox4表达上调有关。

Psammaplysene A诱导的叉头转录因子O1A蛋白表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨Psammaplysene A（PsA）诱导叉头转录因子O1A蛋白（FOXO1A）表达对人乳腺癌细胞株MCF-7及SKBR3增殖和凋亡的影响.方法 用PsA干预2株细胞后,激光共聚焦显微镜（CSM）观察FOXO1A蛋白在细胞中表达；噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖；流式细胞仪（FCM）分析细胞凋亡和周期变化；Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白家族促凋亡调节蛋白（Bim）表达.结果 FOXO 1A蛋白定位于胞核中,PsA诱导后其表达明显增加,细胞发生凋亡,生长减慢.分别用0.1 μmol/L和1.0 μmol/L的PsA干预2株细胞后,凋亡率分别为（16.3±1.4）％和（32.5±2.3）％；（13.7±1.9）％和（30.3±1.6）％；Bim蛋白增加,和阴性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 PsA通过诱导FOXO1A蛋白表达抑制了乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与Bim蛋白激活有关.FOXO1A基因有望成为乳腺癌基因治疗的有效靶点.

叉头盒转录因子O1基因多态性与中国重庆汉族人2型糖尿病相关性研究

目的 探讨叉头盒转录因子O1（FOXO1）基因单核苷酸多态性（SNPs）与中国重庆汉族人2型糖尿病（T2DM）的相关性.方法 （1）在无血缘关系的105名中国重庆汉族人中,采用PCR-RFLP和基因测序法,对FOXO1基因编码区和非编码区的15个SNPs进行筛查,连锁不平衡（LD）分析,构建单倍型.（2）选择重庆地区704名汉族人（414名T2DM患者,290名健康人）进行病例对照研究,对位于同一单倍域的5个SNPs进行基因型鉴定,分析SNPs及单倍型与T2DM的关联.结果 （1）共筛查到12个SNPs;外显子Thr488Asn在该人群中未发现多态现象.LD分析提示rs17592236、rs9577066、rs7986407、rs4581585和rs4325426位于同一单倍域内（D＇＞0.7）.（2）rs7986407、rs4581585与T2DM发病相关：rs7986407位点AA基因型个体T2DM患病风险是GG基因型的1.42倍（additive模式OR=1.420,95％CI：0.783～2.577,P=0.011）;rs4581585位点CC基因型个体T2DM患病风险是TT基因型的2.57倍（additive模式OR=2.571,95％CI：1.404～4.695,P=0.002）.年龄、体质量指数、血糖、血脂、胰岛素、Homa-IR和Homa-β等在不同基因型间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 FOXO1基因可能是中国重庆汉族人T2DM的易感基因.

血清叉头转录因子O1与妊娠期糖尿病的相关性研究

目的 探讨血清叉头转录因子O1(FoxO1)与GDM的相关性。方法 选取2020年6月至2021年1月于泰州市人民医院产科门诊行产前检查的GDM患者(GDM组)50例和正常妊娠者(NGT组)50名,比较两组FoxO1、血糖、血脂等。结果 GDM组血清FoxO1高于NGT组(4.35 vs3.92 ng/ml,P=0.000)。Pearson相关分析显示,血清FoxO1与FPG、1 hPG及HOMA-IR呈正相关(P<0.05),与HOMA-β呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,FPG是FoxO1的影响因素。Logistic回归分析显示,FoxO1是GDM的影响因素。结论 GDM患者血清FoxO1水平升高,是GDM的危险因素,FoxO1可能参与GDM发生发展。

叉头框转录因子O1在肾纤维化中的作用及其调控

慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)已成为全球不可忽视的一种慢性疾病,而肾的纤维化是CKD的最终结果和关键性病理特征。在CKD的整个过程中均伴随着肾损伤的修复与愈合,且长期慢性刺激会促使肾纤维化逐渐步向肾衰竭,其主要特征是肌成纤维细胞持续活化及细胞外基质过度产生和沉积。肾的纤维化是一个由多种信号分子介导的多种信号通路参与的协同过程,而TGF-β/Smad和Wnt/β-Catenin信号通路是其中最经典的2个。FoxO1是人体中一个重要的转录因子,在多种细胞类型中表达,参与细胞多种生命活动并发挥重要调节作用。目前的研究已经表明,叉头框转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FoxO1)在肾纤维化病变中扮演着重要角色。FoxO1可通过STAT、SIRT1、Wnt/β-Catenin、PI-3K/Akt等多种信号通路调控肾纤维化的发生和发展,例如FoxO1/STAT信号可调节TIF和肾小管凋亡;SIRT1/FoxO1信号可调控氧化应激反应和脂肪毒性;FoxO1/β-Catenin可抑制Wnt/β-Catenin信号通路;PI-3K/Akt/FoxO1通路调节炎症反应及糖脂代谢等。另外,一些相关研究表明,FoxO1/Smad很可能在肾的纤维化中发挥了作用。本文综述了FoxO1在肾纤维化中的作用及其分子调控机制,旨在进一步明确肾纤维化的发病机制,从而为CKD的治疗提供新的方向与前景。

沉默FOXO1基因对人主动脉血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨叉头框转录因子O1(FOXO1)基因对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法:收集19例AAA患者动脉瘤组织(AAA组)及邻近正常主动脉组织(对照组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平,透射电镜观察2组研究对象动脉瘤组织中自噬溶酶体形成情况;Western blotting法检测2组研究对象动脉瘤组织中FOXO1及自噬相关蛋白卷曲螺旋肌球蛋白样B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3α(LC3)和P62蛋白表达水平。体外培养人主动脉血管平滑肌细胞(hVSMCs),并采用FOXO1 siRNA(si-FOXO1)及其阴性对照(si-NC)慢病毒感染hVSMCs,10μmol·L^(-1)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合自噬激活剂雷帕霉素(Rap)进行干预,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+si-NC组、AngⅡ+si-FOXO1组、AngⅡ+si-NC+Rap组和AngⅡ+si-FOXO1+Rap组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA法检测各组细胞上清中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,RT-qPCR法检测各组细胞中FOXO1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中FOXO1、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、Beclin1、LC3和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AAA组动脉瘤组织中FOXO1 mRNA表达水平升高(P<0.05),自噬溶酶体数量增多(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,AngⅡ组hVSMCs增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平降低(P<0.05);与AngⅡ+si-NC组比较,AngⅡ+si-FOXO1组hVSMCs增殖活性升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平降低(P<0.05),细胞中Bax、Cleaved-caspase-3和Beclin1蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),Bcl-2和P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。与AngⅡ+si-FOXO1组比较,AngⅡ+si-FOXO1+Rap组细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞上清中MMP-2和MMP-9水平升高(P<0.05),细胞中Beclin1蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05),P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:FOXO1基因沉默可能通过降低自噬水平来提高AngⅡ暴露下hVSMCs增殖活性,并抑制其凋亡,从而参与AAA的发病。

原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13 FOXO1表达水平及其临床意义

目的探究原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13、FOXO1表达水平及其临床意义。方法选取2019年1月至2022年12月在本院收治的183例原发性肾病综合征儿童作为研究组。另选取同时期在本院体检的185名体检健康的儿童作为对照组,苏木精-伊红(ELISA)法检测血清Apelin-13、FOX-O1水平;采用Pearson法分析Apelin-13、FOXO1水平与血脂指标的关系;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Apelin-13、FOXO1对原发性肾病综合征的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结果与对照组比较,研究组患儿血清Apelin-13水平降低,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白(apo)B、FOXO1水平升高(P<0.05);与研究组治疗前比较,治疗后血清Apelin-13水平升高,TG、TC、LDL-C、apoB、FOXO1水平降低(P<0.05);Pearson相关性分析表明,原发性肾病综合征患儿血清Apelin-13与TG、TC、LDL-C、apoB均呈负相关,FOXO1与TG、TC、LDL-C、apoB均呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析表明,Apelin-13、FOXO1诊断原发性肾病综合征发生的曲线下面积(AUC)为0.795、0.734,二者联合诊断的AUC为0.920;多因素Logistic回归分析显示,Apelin-13与FOX-O1是影响原发性肾病综合征发生的危险因素。结论原发性肾病综合征儿童血清Apelin-13呈低表达、FOXO1呈高表达,二者与血脂水平有关,并且对原发性肾病综合征具有一定的诊断价值。

转录因子FoxO1与miR-142-3p在口腔鳞癌中的表达关系及意义

目的探讨转录因子叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)与微小RNA-142-3p(miR-142-3p)在口腔鳞癌(OSCC)中的表达关系及意义。方法选取2016年5月~2018年6月于本院手术中留取的OSCC组织72份为观察组,选取50份形态学正常的癌旁口腔黏膜组织为对照组,比较两组FoxO1、miR-142-3p表达与OSCC临床病理特征的关系及二者的相关性,并采用COX回归模型分析OSCC患者预后不良事件的影响因素。结果观察组较对照组FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);高分化、中分化、低分化相比,FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均依次降低(P<0.05);与Ⅰ~Ⅱ期相比,Ⅲ~Ⅳ期FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05);与无淋巴结转移相比,淋巴结转移者FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低(P<0.05)。Spearman结果显示,观察组FoxO1、miR-142-3p表达呈正相关(P<0.05)。单因素分析显示,性别、年龄、BMI、病理分级均与OSCC患者不良预后无关(P>0.05),临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是OSCC患者不良预后的影响因素(P<0.05)。多因素分析显示,临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是影响OSCC患者预后发生不良事件的独立危险因素(P<0.05)。结论FoxO1、miR-142-3p与OSCC的发生、发展及预后密切相关,FoxO1可能受miR-142-3p的靶向调控,这一结果可为病情评估及治疗靶点提供临床参考依据。

组织内TRIM3及FoxO1表达与原发性肝癌患者病理特征及预后间的关系分析

目的探讨组织内三重基序蛋白3(TRIM3)及叉头转录因子O家族1(FoxO1)表达与原发性肝癌(PHC)患者病理特征及预后间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2019年12月南京医科大学附属淮安第一医院收治的119例PHC患者的临床资料。比较PHC患者肝癌组织与癌旁组织中的TRIM3、FoxO1表达,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的病理特征,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的预后。结果PHC患者肝癌组织中TRIM3、FoxO1阳性率(46.22%、42.02%)显著低于癌旁组织(75.63%、79.83%)(P<0.05)。TRIM3阳性患者肿瘤大小<5 cm、高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于TRIM3阴性患者(P<0.05),FoxO1阳性患者肿瘤大小<5 cm、单发、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于FoxO1阴性患者(P<0.05)。肝癌组织内TRIM3阳性患者、TRIM3阴性患者3年生存率分别为61.82%、31.25%,差异有统计学意义(Log Rank=10.242,P=0.001);FoxO1阳性患者、FoxO1阴性患者3年生存率分别为60.00%、34.78%,差异有统计学意义(Log Rank=6.978,P=0.008)。结论组织内TRIM3及FoxO1表达与PHC患者病理特征及预后显著相关,可作为评估PHC患者病情及预后的重要指标。

狼疮性肾炎患者血清TRIM27和FOXO1表达水平及其与自身免疫抗体和疾病活动的相关性分析

目的分析狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者血清三结构域蛋白27(tripartite motif-containing 27,TRIM27)和叉头转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FOXO1)表达水平及其与自身免疫抗体和疾病活动的相关性。方法选取宝鸡市人民医院2020年6月~2021年12月收治的系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者95例,根据是否并发LN将其分为LN组(n=39)和非LN组(n=56),另选取同期20例体检健康者作为对照组;测定三组血清TRIM27,FOXO1水平;对LN组、非LN组血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体进行定性检测。根据肾脏病变活动性指数(activity index,AI)将LN患者分为LN活动组(AI评分≥6分)和LN非活动组(AI评分<6分),比较两组血清TRIM27,FOXO1水平、血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性情况及AI评分;Spearman法分析LN患者血清TRIM27,FOXO1水平与自身免疫抗体阳性率、AI评分的相关性;ROC曲线分析血清TRIM27和FOXO1水平对LN患者的诊断价值。结果LN组血清TRIM27水平高于非LN组、对照组(87.63±5.28pg/ml vs 78.82±5.43pg/ml,42.56±5.19pg/ml),血清FOXO1水平低于非LN组、对照组(348.36±12.36ng/μl vs 367.15±12.19ng/μl,396.28±12.82ng/μl),差异有统计学意义(F=492.090,100.024,均P<0.05);LN组血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性率高于非LN组(56.41%vs 35.71%,48.72%vs 28.57%,38.46%vs19.64%),差异均有统计学意义(χ^(2)=3.992,4.010,4.096,均P<0.05)。LN活动组血清TRIM27水平、AI评分高于LN非活动组(92.51±8.92pg/ml vs 85.19±3.46pg/ml,9.50±2.26分vs 3.00±1.15分),血清FOXO1水平低于LN非活动组(341.52±12.78ng/μl vs 351.78±12.15ng/μl),血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性率高于LN非活动组(84.62%vs 42.31%,76.92%vs 34.62%,61.54%vs 26.92%),差异均有统计学意义(t=3.701,11.983,2.444;χ^(2)=0.012,0.013,0.036,均P<0.05)。LN患者血清TRIM27水平与血清抗ds-DNA抗体、抗C1q抗体和抗Sm抗体阳性率和AI评分均呈正相关(r=0.516,0.426,0.458,0.697,均P<0.05),而血清FOXO1水平与之均呈负相关(r=-0.613,-0.572,-0.482,-0.503,均P<0.05)。ROC曲线显示,与血清TRIM27曲线下面积(area under curve,AUC)(AUC=0.822,95%CI:0.740~0.903),FOXO1(AUC=0.804,95%CI:0.716~0.893)单项诊断相比,二者联合检测(AUC=0.899,95%CI:0.840~0.958)对LN的诊断价值较高(Z=1.698,0.079,均P<0.05)。结论LN患者血清TRIM27高表达、FOXO1低表达均与自身免疫抗体阳性率和AI评分相关,对LN患者有一定诊断价值。

转录因子FoxO1在糖尿病心肌缺血再灌注损伤中作用的研究进展

叉头转录因子O亚型1(FoxO1)是人体内重要的转录因子之一,参与调节机体葡萄糖代谢、脂质代谢、氧化应激、凋亡、自噬和内质网应激等基因的表达,调控胰岛素信号通路等而发挥生物学功能。心肌缺血再灌注损伤(IRI)是临床上糖尿病患者常见的一种机体损伤,并可带来心肌顿抑等不良后果。近年来,越来越多的实验证明FoxO1参与糖尿病心肌IRI的过程,FoxO1通过磷酸化等途径活化,同时发现FoxO1过度活化会加剧心肌IRI。研究FoxO1在糖尿病心肌IRI中的具体作用机制,有助于为临床糖尿病心肌IRI保护治疗提供新的靶点与思路。

转录因子FoxO1在糖脂代谢及肥胖症中的研究进展

叉头框转录因子O亚型1(FoxO1)作为人体重要的转录因子,参与细胞代谢、生长、分化、氧化应激、衰老、自噬等多种生理和病理过程,其转录活性受多个上游通路翻译后修饰和细胞核-质异位调节。FoxO1基因突变或蛋白异常表达在糖脂代谢及肥胖症等代谢性疾病的发生发展中起重要作用。目前代谢性疾病发病率高且控制欠佳,除饮食及运动外,无特效药。FoxO1在改善胰岛β细胞功能、改善胰岛素抵抗以及纠正脂代谢紊乱、干预肥胖症等方面发挥作用。因此,FoxO1可能为糖脂代谢及肥胖症的治疗提供新思路。

蓝萼甲素对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡、自噬及SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法:体外培养AML U937细胞,取培养至对数生长期的U937细胞分为对照组(常规培养U937细胞)、三氧化二砷组(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L蓝萼甲素)、高(在含U937细胞的培养基中加入4μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养48 h后。四甲基偶氮唑蓝法检测U937细胞增殖率,流式细胞术检测U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察U937细胞自噬小体数量,荧光定量PCR法检测U937细胞SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测U937细胞SIRT1、FoxO1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组U937细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:蓝萼甲素能抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

卵巢癌组织中miR-581、FOXO1表达与患者病理特征和预后的关系

目的探讨卵巢癌组织中微小RNA-581(miR-581)、叉头框转录因子O1(FOXO1)的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法选取97例卵巢癌患者,采用RT-qPCR法检测癌组织与癌旁组织中miR-581、FOXO1mRNA表达。采用Pearson相关系数分析卵巢癌组织中miR-581与FOXO1 mRNA表达的相关性。根据卵巢癌组织中miR-581、FOXO1 mRNA表达均值分为高、低表达,采用Kaplan-Meier法绘制不同miR-581、FOXO1 mRNA表达卵巢癌患者生存曲线。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中miR-581表达高,FOXO1 mRNA表达低(P均<0.05)。Pearson相关系数分析显示,卵巢癌组织中miR-581与FOXO1 mRNA表达呈负相关(r=-0.728,P<0.05)。不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移卵巢癌组织中miR-581、FOXO1 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,死亡42例,3年累积生存率为56.70%(55/97)。K-M生存曲线分析显示,miR-581高表达者累积生存率低于miR-581低表达者,FOXO1 mRNA高表达者累积生存率低于FOXO1 mRNA低表达者(P均<0.05)。结论卵巢癌组织中miR-581高表达和FOXO1 mRNA低表达,二者表达与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关。

H_(2)S拮抗HUVEC衰老与促进SIRT1巯基化和减少FOXO1乙酰化有关

[目的]探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头转录因子O1(FOXO1)在H_(2)S拮抗H_(2)O_(2)诱导内皮细胞衰老过程中的作用。[方法]建立内皮细胞衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色在光学显微镜下观察到的蓝染细胞数(即衰老细胞)计算阳性细胞率。采用Western blot检测细胞P21、P53、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、叉头转录因子O1(FOXO1)、乙酰化FOXO1(ac-FOXO1)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)及过氧化氢酶的蛋白表达水平,采用生物素转换法测定S-巯基化SIRT1的表达,采用活性氧(ROS)检测定量评估细胞内ROS水平。[结果]经100μmol/L H_(2)O_(2)处理可显著提高SA-β-gal染色阳性细胞率和P21、P53、PAI-1的蛋白表达,提示衰老细胞模型成功建立,而100μmol/L NaHS可明显拮抗这一作用,SA-β-gal染色阳性细胞数明显下降(P<0.01),P21、P53、PAI-1的蛋白表达显著降低(P<0.01)。与对照组相比,H_(2)O_(2)组SIRT1、FOXO1、ac-FOXO1、MnSOD及过氧化氢酶的蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01),ac-FOXO1/FOXO1比值显著增加(P<0.01),ROS水平明显升高(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组相比,NaHS+H_(2)O_(2)组SIRT1、S-巯基化SIRT1、FOXO1、ac-FOXO1、MnSOD及过氧化氢酶的蛋白表达显著升高((P<0.05或P<0.01),ac-FOXO1/FOXO1比值显著下降(P<0.01),ROS水平明显降低(P<0.05)。[结论] H_(2)S可拮抗H_(2)O_(2)诱导的HUVEC衰老,其机制与促进SIRT1巯基化和减少FOXO1乙酰化有关。

转录因子FOXO1和干细胞标志物CD133与神经母细胞瘤临床病理因素相关性

目的探究叉头框转录因子O亚族(FOXO)1与干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤(NB)中的表达及其相关性分析。方法使用免疫组织化学方法检测53例NB组织(病例组)和27例癌旁正常组织(对照组)中FOXO1和CD133蛋白表达情况;应用Western印迹检测3例NB组织及3例癌旁组织FOXO1和CD133蛋白表达情况。结果FOXO1在病例组中阳性表达率显著低于对照组;CD133在病例组中阳性表达率显著高于对照组;FOXO1、CD133与临床分期、组织类型和病理分型存在相关性(P<0.05);FOXO1在NB组织显著低于癌旁组织,而CD133在NB组织显著高于癌旁组织;FOXO1和CD133在蛋白表达水平上有明显相关性(P<0.05)。结论FOXO1可能通过负性调节CD133表达来调节NB干细胞特性,是NB发生发展的重要机制。

氧化苦参碱调控FOXO1表达对TNF-α诱导HaCaT细胞炎症因子分泌的影响

目的探讨氧化苦参碱调控叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)表达对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度TNF-α对HaCaT细胞增殖活性的影响,筛选TNF-α诱导浓度和时间。将诱导后的HaCaT细胞分为模型组(25μg/L TNF-α)、氧化苦参碱组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,未转染)、氧化苦参碱+LV-NC-GFP组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染空载体)、氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染FOXO1过表达载体),另取正常培养的HaCaT细胞为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中FOXO1表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中炎性因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中AKT、TLR-4和FOXO1蛋白表达水平。结果本研究采用25μg/L TNF-α处理24 h诱导HaCaT细胞。与对照组相比,模型组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,氧化苦参碱组和氧化苦参碱+LV-NC-GFP组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与氧化苦参碱+LV-NC-GFP组相比,氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过靶向抑制FOXO1表达降低炎性因子分泌,并可促进HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖。

老年原发性肝癌患者癌组织中FoxO1、SREBP2及中心体蛋白55表达特点及意义

目的探讨老年原发性肝癌患者癌组织中叉头转录因子O家族(FoxO)1、胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)2及中心体蛋白55表达特点及意义。方法选取老年原发性肝癌患者75例,收集患者性别、年龄、肝硬化情况、肿瘤直径、分化程度、肿瘤数量、病理类型、TNM分期情况、门静脉侵袭情况;术中采集肝癌组织标本和距离肝癌病灶边缘约5 cm的癌旁正常组织标本,免疫组化法检测FoxO1、SREBP2及中心体蛋白55表达。出院后进行3年随访,记录患者生存情况。结果肝癌组织中FoxO1蛋白阳性率明显低于癌旁组织,SREBP2蛋白、中心体蛋白55阳性率明显高于癌旁组织(P<0.01)。FoxO1蛋白、SREBP2蛋白、中心体蛋白55阳性率在不同肿瘤直径、分化程度、肿瘤数量、病理类型、TNM分期、门静脉侵袭的老年原发性肝癌患者间比较差异有统计学意义(P<0.01)。FoxO1阴性者3年生存率明显高于FoxO1阳性者(P<0.01);SREBP2、中心体蛋白55阳性者3年生存率明显高于SREBP2、中心体蛋白55阴性者(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,FoxO1、SREBP2、中心体蛋白55单独和联合检测对老年原发性肝癌患者3年生存情况具有较高的预测价值(P<0.05);其中联合检测的预测价值最高,灵敏度、阳性预测值明显高于各指标单独检测。结论老年原发性肝癌患者癌组织中FoxO1低表达,SREBP2及中心体蛋白55高表达,与临床病理特征及预后相关,联合检测可用于预后评估。

MiR-486-5p/FOXO1轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞增殖和迁移的调节作用

目的探讨miR-486-5p/叉头框转录因子O亚族1(forkhead box transcription factor O subfamily 1,FOXO1)轴对深二度烧伤创面修复过程中角质形成细胞的增殖和迁移的调节机制。方法小鼠建立深二度烧伤模型,随机分为NC mimic+Vector组、FOXO1组、miR-486-5p mimic组和miR-486-5p mimic+FOXO1组。采用miR-486-5p mimic和(或)FOXO1处理伤面,观察伤面愈合情况。在烧伤后分别于不同时间点[止血(0 d)、炎症(1 d)和增殖(7 d和14 d)]采用原位杂交技术和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测伤面边缘组织中miR-486-5p表达部位和水平,免疫荧光染色法检测FOXO1表达。通过荧光素酶报告分析FOXO1与miR-486-5p结合关系。构建miR-486-5p过表达或敲低人永生化角质形成细胞(human HaCaTKeratinocytes,HaCaT)模型,通过EdU法和划痕试验考察细胞的增殖和迁移情况,Western blot法分析细胞中FOXO1蛋白表达。结果miR-486-5p在小鼠深二度烧伤伤面愈合过程中显著上调。体内模型显示,miR-486-5p通过抑制FOXO1表达促进伤面愈合。在HaCaT细胞中,miR-486-5p过表达增加了细胞的增殖和迁移,抑制miR-486-5p则具有相反的效果。FOXO1是角质形成细胞中miR-486-5p的直接靶标。FOXO1过表达导致HaCaT细胞的EdU阳性细胞的百分比和伤面愈合降低,并且逆转了miR-486-5p对EdU阳性细胞和伤面愈合的诱导作用。结论miR-486-5p是深二度烧伤创面修复的关键调节剂,通过抑制FOXO1表达促进角质形成细胞的增殖和迁移。