乙型肝炎肝硬化患者辅助性T淋巴细胞17和调节性T淋巴细胞及维甲酸相关核孤儿受体γt和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3 mRNA表达水平的变化及其临床意义研究

目的通过对乙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17(Th17)、调节性T淋巴细胞(Treg)及其特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达水平的检测探讨其临床意义。方法选取2015年7—12月昆明医科大学第一附属医院诊治的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者64例,其中慢性乙型肝炎(CHB)患者21例(CHB组)、代偿期肝硬化(CLC)患者21例(CLC组)、失代偿期肝硬化(DCLC)患者22例(DCLC组)。同期选取本院体检健康者20例为对照组。收集研究对象一般资料〔性别、年龄及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)〕;应用流式细胞术检测研究对象外周血Th17、Treg表达率,计算Th17/Treg比值;应用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-q PCR)法测定外周血RORγt、Foxp3 mRNA表达水平。结果 4组年龄、ALT、AST、TBIL比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于对照组(P<0.05);DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于CHB组,Th17表达率及Th17/Treg比值均高于CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05);DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于CHB组、CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率与RORγt mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Treg表达率与Foxp3 mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率、RORγt mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组外周血Foxp3mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组RORγt mRNA表达水平、Foxp3 mRNA表达水平与AST、TBIL呈正相关(P<0.05)。结论 Th17、Treg及其特异性转录因子RORγt、Foxp3可能与乙型肝炎肝硬化患者的疾病进展与肝功能有关。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达

目的观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达,探讨Foxp3在狼疮性肾炎中可能的免疫耐受诱导作用及机制。方法选取8周龄及16周龄雄性BXSB小鼠各6只,以8周龄C57BL/6雄性小鼠6只为正常对照,用免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法,检测Foxp3在小鼠肾脏中的表达。结果正常对照组C57BL/6小鼠肾组织Foxp3阳性表达,细胞呈深棕色着色,广泛分布于肾小管;8周龄及16周龄BXSB小鼠肾脏组织Foxp3弱阳性表达,细胞呈浅棕色着色,分布于肾小管。8、16周龄BXSB组小鼠肾组织内Foxp3mRNA表达水平[(0.55±0.06),(0.51±0.07)]均较正常对照组(1.02±0.08)降低,差异有统计学意义(均P<0.01);16周龄BXSB组小鼠的Foxp3mRNA表达水平较8周龄BXSB组降低,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 BXSB小鼠狼疮肾炎的发病机制可能与调节性T细胞的Foxp3表达下调相关。

BXSB小鼠肝叉状头/翅膀状螺旋转录因子的表达

目的观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在BXSB狼疮小鼠肝脏的表达,探索调节性T细胞在狼疮肝损害中的可能作用机制。方法以8周龄正常C57BL/6雄性小鼠作对照,用免疫组织化学及实时PCR方法,检测Foxp3在8周、16周龄雄性BXSB小鼠肝脏的表达。结果正常组C57BL/6小鼠肝组织Foxp3阳性细胞呈深棕黄色,位于肝小叶的肝血窦和(或)窦周隙内,且分布较均匀;8周龄及16周龄BXSB小鼠肝组织内Foxp3染色呈浅棕黄色,明显弱于正常鼠,且分布在界板周边较明显。8周、16周BXSB组小鼠肝组织内Foxp3 mRNA表达水平(0.30±0.04、0.18±0.03)较正常对照组(1.08±0.08)明显降低,16周BXSB组的Foxp3 mRNA表达水平较8周BXSB组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论BXSB小鼠肝损害的发病机制可能与调节性T细胞的Foxp3分布和表达量下调有关。

布地奈德对支气管哮喘患儿外周血干扰素-γ、白细胞介素-4和叉状头状螺旋转录因子3的影响

目的探讨布地奈德对支气管哮喘患儿外周血干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)及叉状头状螺旋转录因子3(transcription factor FoxP3,FoxP3)表达的影响。方法筛选2010年6月至2013年10月在台州市中心医院就诊的哮喘患儿,将其分成轻、中、重度组,门诊正常体检儿童为正常对照组;采用酶联免疫分析法检测治疗前后IFN-γ、IL-4水平,采用流式细胞术检测表达FoxP3的CD4调节性T细胞及亚型比例。结果共纳入哮喘患儿68例。其中轻度哮喘组25例,平均年龄(6.3±4.1)岁;中度哮喘组28例,平均年龄(5.3±3.8)岁;重度哮喘组15例,平均年龄(5.8±4.5)岁。正常对照组25例,平均年龄(5.2±2.8)岁。治疗前3个哮喘组外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞比例[轻度(10.8±1.5)%,中度(11.4±1.4)%,重度(9.9±1.0)%]和CD4^+CD25^+FoxP3^+表达水平[轻度(4.7±0.4),中度(3.9±0.8),重度(3.5±0.7)]均低于对照组[CD4^+CD25^+调节性T细胞比例(13.7±2.0)%,CD4^+CD25^+FoxP3^+(5.4±0.6)],差异有统计学意义(P<0.05),且随病情加重表达下降;IL-4表达[轻度(22.7±2.7)ng/L,中度(29.0±5.6)ng/L,重度(31.5±3.3)ng/L]显著高于对照组[(17.8±1.6)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05),并随着疾病的加重表达增加。治疗前各哮喘组IFN-γ水平[轻度(21.9±2.8)ng/L,中度(20.5±3.4)ng/L,重度(16.1±3.2)ng/L]显著低于对照组[(25.8±3.4)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前各哮喘组外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞比例和CD4^+CD25^+FoxP3^+表达水平显著低于治疗后[CD4^+CD25^+调节性T细胞比例:轻度(13.9±2.2)%,中度(13.4±1.7)%,重度(13.5±2.0)%;CD4^+CD25^+FoxP3^+:轻度(5.6±0.8),中度(4.9±0.8),重度(5.2±0.9)],而IL-4表达高于治疗后[轻度(1 8.1±2.9)ng/L,中度(19.3±2.8)ng/L,重度(19.6±1.9)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前轻度哮喘组IFN-γ表达显著低于治疗后[(26.5±3.4)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05);中、高度与治疗后相比[中度(23.5±3.7)ng/L,重度(19.9±3.1)ng/L],差异无统计学意义(P>0.05);所有检测项目经治疗后与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论哮喘患儿体内存在辅助T细胞(T helper cell,Th)1/Th2失衡,可能是哮喘发病的重要原因,布地奈德能有效改善Th1/Th2失衡,并通过调节FoxP3的表达发挥治疗作用。

调节性T细胞和叉状头／翅膀状螺旋转录因子在胃癌患者中的表达变化

目的观察调节性T细胞和叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）在胃癌患者中的表达变化。方法随机选取2011年3月至2014年10月我院收治的胃癌患者80例为实验组，另选取同期来我院体检的80例健康人为对照组，应用流式细胞术对两组外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞的表达水平进行检测，运用免疫组织化学法对胃癌及癌旁组织中的Foxp3＋T细胞的表达水平进行检测，然后对两组患者的外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞的表达水平、胃癌组织中的Foxp3＋T细胞的表达水平、不同TNM分期、淋巴结转移患者外周血中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞的表达水平进行统计分析。结果实验组和对照组患者外周血中CD4‘CD25＋Foxp3＋T细胞比例分别为（6．99±1．24）％和（3．87±0．94）％，实验组显著高于对照组（P〈0．05）；实验组患者胃癌组织和癌旁组织中的Foxp3＋T细胞的表达水平分别为（71．44±15．64）／mm2和（21．56±9．43）／mm2，胃癌组织显著高于癌旁组织（P〈0．05）；不同TNM分期、淋巴结转移患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞的表达水平之间的差异均有统计学意义（P〈0．05），不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移患者胃癌组织中Foxp3＋T细胞的表达水平之间的差异均有统计学意义（P〈0．05）；外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞和胃癌组织Foxp3＋T细胞的表达呈显著正相关（r=0．786，P〈O．05）。结论调节性T细胞和Foxp3水平在胃癌患者体内的表达提高。

协同刺激分子B7-H1、B7-H4和叉状头/翅膀状螺旋转录因子阳性调节性T细胞在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨协同刺激分子B7-H1、B7-H4和转录因子叉状头/翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）在胃癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学染色法检测B7-H1、B7-H4和Foxp3在100例胃癌组织及癌旁组织中的表达,分析B7-H1、B7-H4和Foxp3的表达与临床病理参数的关系.结果 B7-H1、B7-H4在胃癌组织中高表达,阳性表达率分别为65.0％和71.0％,其表达水平与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关,差异有统计学意义（P＜0.05）.Foxp3＋调节性T细胞（Treg）在胃癌组织中高表达,并与淋巴结转移有关,差异有统计学意义（P＜0.05）.B7-H1、B7-H4的表达水平和Foxp3＋ Treg细胞数量呈正相关,相关系数分别为：r=0.437,P＜0.05;r=0.456,P＜0.05.B7-H1、B7-H4及Foxp3高表达患者的预后差于低表达者（P＜0.05）.结论 B7-H1、B7-H4和Foxp3＋ Treg细胞在胃癌组织中高表达,并与胃癌患者淋巴结转移和预后有关.

抑制转录共激活因子TAZ和叉状头／翅膀状螺旋转录因子3的表达与结直肠癌生物学行为的关系

目的检测抑制转录共激活因子TAZ和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3（FoxP3）在结直肠癌组织中的表达水平，探讨两者表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学法检测101例结直肠癌组织和结直肠癌癌旁组织中TAZ和FoxP3表达水平，结合临床资料进行相关分析。结果TAZ在结直肠癌组织的阳性表达率为75.25%（76/101），明显高于癌旁组织阳性表达率[31.68%（32/101）]，两者差异有统计学意义（t＝38.520，P＝0.000），TAZ表达水平与结直肠癌组织学分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移明显相关（分别为t＝5.840，P＝0.020；t＝4.120，P＝0.040；t＝4.860，P＝0.030；t＝4.590，P＝0.030）；FoxP3在结直肠癌组织的阳性表达率为80.20%（81/101），明显高于结直肠癌癌旁组织阳性表达率[34.6%（35/101）]，两者差异有统计学意义（t＝42.850，P＝0.000），FoxP3表达水平与结直肠癌TNM分期、浸润深度、淋巴结转移明显相关（分别为t＝4.240，P＝0.040；t＝5.870，P＝0.020；t＝4.650，P＝0.030）。结论同时检测结直肠癌组织中TAZ和FoxP3表达水平，有助于判断结直肠癌浸润转移潜能及评估结直肠癌患者预后。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在大鼠胃癌模型组织中的表达及其功能

目的 探讨在胃癌大鼠模型胃癌组织中叉状头/翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的表达及其功能.方法 将Wister大鼠46只分为两组,A组23只,采用肌氨酸乙酯盐酸盐及亚硝酸钠致癌剂对大鼠进行诱导处理6个月,制备胃癌大鼠模型.B组23只,为对照组.采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot、免疫组织化学染色等实验技术在不同水平上检测两组大鼠Foxp3在胃组织中的表达和定位;采用免疫组织化学方法观察Foxp3在胃癌组织中的表达和定位;分析Foxp3的表达与病变胃组织分级之间的关系.结果 A组大鼠4级病变的胃组织（Ⅰ级：增生性病变;Ⅱ级：癌前病变;Ⅲ级：早期癌;Ⅳ级：浸润性癌）中均存在不同程度Foxp3的转录.并且随着胃组织病变程度的加重,Foxp3转录程度也越来越高,而B组大鼠正常的胃组织中Foxp3无转录,通过免疫组织化学染色结果显示胃癌细胞中Foxp3蛋白的表达主要分布在肿瘤细胞核,少数分布在胞质内.A组中16例胃癌组织病理切片中10例（62.50％）呈Foxp3蛋白阳性染色,4例癌前病变胃组织中有2例（50.00％）呈Foxp3蛋白阳性染色,3例增生性病变中有1例（33.33％）呈Foxp3蛋白阳性染色.B组23例正常胃组织中无1例Foxp3蛋白阳性染色.Foxp3蛋白在胃组织中的表达与其病变分级呈线性相关（r =4.26,P＜0.01）.结论 胃癌细胞和组织中普遍存在Foxp3的表达,Foxp3可能在胃癌的发生发展过程中发挥重要功能.

自身免疫性肝炎肝脏叉状头/翅膀状螺旋转录因子基因甲基化调控调节性T细胞增殖和功能

目的 观察恒河猴轮状病毒（RRV）对BALB/c小鼠肝脏内调节性T（Treg）细胞的抑制作用是否与Treg细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）基因启动子CpG岛甲基化有关,探讨其在小鼠肝脏自身免疫炎症中的作用.方法 60只7～9周龄BALB/c小鼠随机分为3组（每组20只）腹腔注射空斑形成单位（PFU）=106 RRV感染24h和48 h,正常对照组腹腔注射相同容积生理盐水,Percoll非连续梯度分离单核细胞,利用流式细胞仪分选小鼠肝脏CD4＋ CD25＋ Foxp3＋ Treg细胞.应用重亚硫酸盐修饰后测序法（BSP）检测BALB/c小鼠脾脏组织中分选出的Treg细胞DNA Foxp3基因启动子CpG岛甲基化状态,Western blot检测Foxp3蛋白的表达.结果 Treg细胞在正常对照组和RRV24、48 h占CD4＋细胞比例分别为（5.26±0.21）％、（4.30±0.46）％、（3.60±0.19）％,RRV24、48 h的比例与正常对照组细胞比例差异有统计学意义（P＜0.05）;对照组和RRV组24、48 hCpG岛甲基化程度分别为（2.78±0.33）％、（26.70±1.87）％、（41.18±3.67）％,各时间点甲基化率均较正常组明显升高（P＜0.01）,Treg细胞Foxp3蛋白表达也明显下降,与RRV感染的时间呈正相关,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 RRV可以明显促进BALB/c小鼠肝脏中Treg细胞Foxp3基因启动子CpG岛甲基化抑制Treg细胞的增殖和正常的免疫功能,这一过程可能参与了小鼠自身免疫性肝炎的发生.

肝癌HepG2细胞来源外泌体通过环磷酸腺苷反应元件结合蛋白／叉状头／翅膀状螺旋转录因子3调控调节性T细胞的机制

目的探讨肝癌HepG2细胞来源外泌体是否通过环磷酸腺苷（cAMP）反应元件结合蛋白／叉状头／翅膀状螺旋转录因子3（CREB／Foxp3）途径调控调节性T细胞（Treg细胞）。方法超速离心法分离外泌体（Exsomes）；透射电镜及Westernblot对外泌体进行鉴定；将HepG2和L02细胞来源外泌体分别与人外周血单个核细胞共培养，流式细胞检测Treg细胞比例的变化，Westernblot检测CREB／Foxp3信号蛋白的表达。结果见外泌体直径约30-100nm，呈圆形或椭圆形的囊泡状结构，且富含CD81和CD63蛋白。与L02-exo组[（1．87±0．18）％]和空白对照组[（1．43±0．12）％]比较，HepG2-exo组[（6．87±0．87）％]Treg细胞的比例显著上调，P值分别为0．005和0．004。HepG2-exo组CREB磷酸化分别是对照组和L02-exo组的1．74倍和1．63倍，P值均为0．001；HepG2．exo组Foxp3磷酸化分别是对照组和L02-exo组的1．93倍和1．78倍，P值均为0．001。结论肝癌细胞HepG2来源的外泌体可能通过CREB／Foxp3信号上调Treg细胞比例参与肿瘤免疫逃逸。

肝外胆管癌组织叉状头/翅膀状螺旋转录因子3阳性调节性T细胞浸润及其临床意义

目的 观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子3（Foxp3）阳性调节性T细胞（Treg）在肝外胆管癌（EHCC）组织中的浸润,探讨环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达与Foxp3^＋ Treg细胞浸润的关系.方法 采用免疫组织化学法检测Foxp3^＋ Treg在94例胆管癌组织和COX-2蛋白在77例胆管癌组织中的表达,分析浸润细胞以及COX-2蛋白表达与临床和预后的关系,观察肝外胆管癌组织中COX-2蛋白表达对Foxp3^＋ Treg浸润的影响.结果 94例肝外胆管癌组织中均存在浸润的Foxp3^＋ Treg细胞,中位值为2.35个/高倍视野.Foxp3^＋ Treg细胞的浸润与肝外胆管癌患者的组织学分级、临床分期和淋巴结转移无明显相关（P＞0.05）.但Foxp3^＋ Treg细胞低计数组患者的生存时间明显高于高计数组（P＜0.05）.多因素分析表明Foxp3^＋Treg细胞浸润是肝外胆管癌预后的独立影响因素.77例胆管癌组织中COX-2表达阳性率为81.8％.COX-2蛋白的表达与组织学分级、临床分期和淋巴结转移无明显相关（P＞0.05）.COX-2蛋白表达与Foxp3^＋ Treg细胞浸润之间呈正相关（r=4.89,P ＜0.05）.结论 肝外胆管癌组织中Foxp3^＋ Treg细胞浸润与肝外胆管癌患者的预后负相关,是影响肝外胆管癌预后的独立影响因素.COX-2蛋白表达可能促进Foxp3^＋ Treg细胞的浸润.

清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌细胞免疫逃逸的影响

目的 研究清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌细胞(SiHa细胞)免疫逃逸的影响,探讨清毒栓提取物治疗宫颈人乳头瘤病毒感染的免疫机制。方法 选择均匀成团生长的jurkat细胞,使用SiHa上清液培养jurkat细胞48小时,采用染色质免疫沉淀技术检测SiHa细胞上清液处理后jurkat细胞中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead boxP3,Foxp3)含量。取Foxp3高表达的T细胞模型,用血清药理学方法制备的清毒栓含药血清和对照血清进行干预,采用染色质免疫沉淀技术、实时荧光定量PCR法、流式细胞术分别检测jurkat细胞中Foxp3蛋白表达水平、Foxp3转录水平,以及Foxp3阳性细胞比例。结果 SiHa上清液可以显著增加jurkat细胞中Foxp3含量(P<0.05),且处理48小时效果最为显著;jurkat细胞经清毒栓含药血清处理后,细胞中的Foxp3蛋白表达显著下调(P<0.05);在含药血清浓度为15%和20%时,Foxp3的蛋白表达量最低,但两者无明显差别(P>0.05);清毒栓含药血清可以显著降低jurkat细胞模型中Foxp3转录和蛋白水平以及Foxp3阳性细胞数(P<0.05)。结论 清毒栓含药血清通过抑制jurkat T细胞中的Foxp3转录和蛋白表达,降低Foxp3阳性细胞数及Treg细胞比例,从而抑制宫颈SiHa细胞的免疫逃逸,增加机体对宫颈SiHa细胞的免疫反应性。

Lumina B型乳腺癌与肿瘤浸润叉状头/翅膀状螺旋转录因子+调节性T淋巴细胞和CD8+细胞毒性T淋巴细胞预后的关系

目的检测叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FoxP3)和CD8在Lumina B型乳腺癌组织的表达,探讨FoxP3+调节性T淋巴细胞(Treg)和CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)与Lumina B型乳腺癌患者预后之间的关系。方法免疫组织化学方法检测乳腺癌组织石蜡切片中FoxP3和CD8在肿瘤间质的表达量;独立样本t检验分析FoxP3和CD8的表达水平与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结状态、组织病理分级的关系。Kaplan-Meier Log-rank法分析CD8和FoxP3的表达与乳腺癌患者总体生存率和无病生存率的关系。结果CD8的高表达与肿瘤病灶≤2 cm、淋巴结转移阴性以及较低的病理分级(Ⅰ/Ⅱ级)有关(P<0.05);FoxP3高表达与肿瘤病灶>2 cm、淋巴结转移阳性有关(P<0.01)。另外,FoxP3的高表达明显降低乳腺癌患者的无病生存率(P<0.05),而CD8的高表达提高患者的无病生存率(P<0.01)。结论肿瘤浸润的CD8+CTL与良好预后有关,而肿瘤浸润的FoxP3+Treg与不良预后明显相关。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子3对结直肠癌细胞凋亡的影响

目的 观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子3（Foxp3）在结直肠癌中的表达及其短发夹RNA（shRNA）对结直肠癌细胞凋亡的影响.方法 Western blot检测结直肠癌组织和对应的癌旁组织中Foxp3的表达水平.同时Western blot检测人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO及人肠黏膜细胞CCC-HIE-2中Foxp3的表达水平.转染靶向Foxp3基因的shRNA的表达载体Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2和对照序列载体shRNA control至人结直肠癌细胞中,分别命名为Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2、shRNA control组.同时设置未转染组,未转染组中只加入转染试剂.Western blot和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Foxp3水平,筛选出干扰效率较高的shRNA.流式细胞术检测48h细胞凋亡.结果 Foxp3在癌旁组织及结肠癌组织中表达水平依次为：0.24±0.05、0.78±0.08,差异有统计学意义（t=63.254,P=0.000）.Foxp3在人结直肠癌细胞HCT116、SW480、RKO中的表达水平均高于人肠黏膜细胞CCC-HIE-2,且Foxp3的表达水平由低到高依次为：RKO、HCT116、SW480,后期选用SW480继续研究.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA1、Foxp3 shRNA2 组细胞中Foxp3蛋白表达水平依次为：0.92±0.05、0.93±0.07、0.21±0.04、0.34±0.06,mRNA 表达水平依次为：1.00±0.07、1.01±0.08、0.53±0.06、0.79±0.08,后续选用Foxp3 shRNA2干扰Foxp3表达.未转染组、shRNA control、Foxp3 shRNA2组细胞凋亡率依次为（13.21±3.12）%、（12.98±3.54）%、（32.01±6.72）%.Foxp3 shRNA2组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）表达水平依次为：0.86±0.05、0.85±0.06、0.26±0.05,活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）表达水平依次为：0.38±0.09、0.39±0.08、0.88±0.06,磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）表达水平依次为：0.40±0.06、0.39±0.04、0.22±0.05.结论 Foxp3在结直肠癌组织及细胞中均表达上调,干扰Foxp3表达能促进人结直肠癌细胞凋亡,作用机制可能与STAT3信号通路有关.

宫颈癌患者癌组织与癌旁组织中程序性死亡分子-1、程序性死亡分子配体-1、叉状头/翅膀状螺旋转录因子的差异表达及其临床意义

目的探讨宫颈癌患者组织中程序性死亡分子-1(PD-1)、程序性死亡分子配体-1(PD-L1)、叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FOXP3)的表达及其临床意义。方法选取2018年6月-2020年1月本院收治的330例宫颈癌患者为研究对象,采用免疫组化法测定其癌组织及癌旁组织中PD-1、PD-L1、FOXP3表达情况,分析癌组织中PD-1、PD-L1、调节性T淋巴细胞FOXP3表达率与患者临床特征的相关性。结果宫颈癌组织中PD-1、PD-L1、调节性T淋巴细胞FOXP3阳性率均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中PD-1、PD-L1阳性率与患者国际妇产科联合会(FIGO)分期、分化程度、宫旁浸润、淋巴血管间隙侵犯及淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、肿瘤直径、HPV分型无关(P>0.05)。FOXP3阳性率与FIGO分期、分化程度、宫旁浸润、淋巴血管间隙侵犯相关(P<0.05),与年龄、肿瘤直径、HPV分型、淋巴结转移无关(P>0.05)。结论宫颈癌患者癌组织中存在PD-1、PD-L1、调节性T淋巴细胞FOXP3的高表达,且其表达水平与宫颈癌患者疾病分期、浸润与转移密切相关。

松果体及其褪黑素与大鼠乳腺癌Treg细胞和转录因子Foxp3表达的相关性

目的探讨松果体及其褪黑素(MLT)对乳腺癌大鼠外周血中调节性T(Treg)细胞产生及乳腺癌组织中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Fox) p3表达的影响。方法选用雌性清洁级SD大鼠150只,随机平均分为正常组、荷瘤对照组、松果体摘除并荷瘤+生理盐水组、松果体摘除并荷瘤+7. 5 mg·kg-1·d-1MLT组、松果体摘除并荷瘤+15 mg·kg-1·d-1MLT组,所有荷瘤组接种大鼠乳腺癌细胞,建立荷瘤大鼠模型,接种癌细胞后第10天采外周血并取瘤体,分别应用流式细胞术、免疫组织化学法检测乳腺癌大鼠外周血中CD4+CD25+Treg细胞比例及乳腺癌组织中Foxp3+Treg细胞数量的变化。结果松果体摘除使乳腺癌外周血中Treg细胞比例上升(P<0. 01),补充MLT后外周血Treg细胞比例下降(P<0. 05)且随剂量增加而下降(P<0. 01);松果体摘除使乳腺癌组织中Treg细胞数量上升(P<0. 01),补充MLT后Treg细胞数量下降(P<0. 05),但无剂量依赖性。结论松果体摘除增加乳腺癌外周血和组织中Treg细胞的产生,补充MLT能逆转上述作用,MLT抑制Treg细胞的产生可能具有拮抗乳腺癌发生发展的作用。

子痫前期患者蜕膜中CD_4^+CD_(25)^+调节性T细胞的Foxp3表达

目的初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞在子痫前期患者胎盘附着处蜕膜中表达及其临床意义。方法选择子痫前期30例和正常晚期妊娠30例,采用免疫组化法检测蜕膜CD4+CD25+调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3的阳性表达率,分析比较两组检测结果。结果蜕膜中Foxp3在子痫病例组及正常对照组的阳性表达率分别为16.67%和66.67%,子痫病例组Foxp3阳性表达率明显低于正常对照组(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3在子痫前期患者蜕膜组织中阳性表达率减低,其免疫抑制功能减弱,从而使母胎免疫耐受失衡、受损,免疫排斥作用增强,导致子痫前期的发生。

FOXP3与自身免疫性甲状腺疾病

叉状头/翅膀状螺旋转录因子(FOXP3)作为CD4+CD25+调节T(Treg)细胞表面的特征性标志,是Treg细胞发育和功能维持的关键因素,在维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面具有非常重要的作用。FOXP3基因突变可引发多种自身免疫性疾病,目前研究发现,FOXP3基因表达异常在自身免疫性甲状腺疾病的发病中发挥重要作用。

PM2.5暴露对哮喘大鼠气道形态及FOXP3基因DNA启动子区甲基化影响的实验研究

目的探讨PM2.5暴露对哮喘大鼠气道形态及FOXP3基因DNA启动子区甲基化的影响。方法选择50只SD大鼠,随机选择10只作为空白对照组,40只采用卵清蛋白激发、致敏构建哮喘模型,并根据PM2.5干预剂量的不同,进一步分为单纯哮喘组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,比较不同剂量PM2.5对哮喘大鼠的病程进展影响。结果(1)与对照组及单纯哮喘组相比,所有PM2.5干预组大鼠的体质量均明显较低(P<0.05),且左肺指数及心脏指数也显著较高(P<0.05),但脾脏指数无明显差异(P>0.05)。(2)与对照组相比,哮喘组肺泡灌洗液内细胞总数升高最显著,低、中剂量干预组也明显升高,但高剂量干预组无明显变化(P>0.05)。与对照组及哮喘组比较,随着PM2.5干预剂量的升高,大鼠BALF内的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞计数也呈逐渐上升趋势,巨噬细胞呈逐渐下降趋势,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)对照组、哮喘组、低剂量组、中剂量组、高中剂量组的FOXP3基因DNA启动子区的甲基化水平分别为(7.24±0.91)、(5.04±3.08)、(1.87±1.46)、(1.57±0.64)、(2.04±1.14),FOXP3 mRNA相对表达量分别为(1.02±0.18)、(0.81±0.19)、(0.62±0.15)、(0.53±0.14)、(0.32±0.04),随着PM2.5干预剂量的提高,大鼠的FOXP3基因DNA启动子区的甲基化水平及FOXP3 mRNA相对表达量均逐渐降低。结论PM 2.5对哮喘大鼠的损伤有一定的剂量依赖性,这可能与调低FOXP3基因DNA启动子区甲基化水平及FOXP3 mRNA相对表达量有关。

松果体褪黑素对大鼠胸腺CD4^+ CD25^+调节性T细胞发育及其相关基因Foxp3的影响

目的研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg细胞)产生、输出及其相关基因叉状头/翅膀状螺旋转录子(Foxp3)表达的影响。方法选用雄性清洁级SD大鼠120只,分为正常组、假手术组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素低剂量组[腹腔注射7.5mg/(kg·d)]和松果体摘除+褪黑素高剂量组[腹腔注射15mg/(kg·d)],术后4、8周取材。应用流式细胞检测技术、RT-PCR法及免疫组织化学染色法观察并分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺及外周血CD4、CD25双阳性细胞数量及胸腺Foxp3表达的变化。结果松果体摘除术后无论4周或者8周胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞数量均无明显变化,补充褪黑素后双阳性细胞数量呈时间、剂量依赖性明显增加;松果体摘除术后4周外周血CD4+ CD25+ Treg细胞数量明显增加,但补充褪黑素后恢复正常,而术后8周各组之间无显著性差异;半定量RT-PCR及免疫组织化学结果显示,松果体摘除后4周大鼠胸腺Foxp3表达水平明显升高,补充高低两种剂量褪黑素后均有所下降并达到正常水平,而松果体摘除后8周各组之间Foxp3的表达无明显差异。结论松果体摘除对胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的产生无明显影响,但导致大鼠胸腺Foxp3的转录和翻译明显增加,胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的输出增加,而补充外源性褪黑素后能逆转上述异常,长时间作用则其影响逐渐消失。