脱氢表雄酮增强双丁酰环磷酰苷促进细胞分化的作用及可能机制

目的 观察脱氢表雄酮 (DHEA)是否能增强cAMP的类似物双丁酰环磷酰苷 (DbcAMP)促进神经突起的形成和生长及可能的机制。方法 利用NG10 8 15细胞这一具有神经元形态和功能的细胞系 ,在药物处理后 ,倒置显微镜下观察突起的生长状况 ,并测定突起的长度和有突起的细胞数 ;明胶酶谱分析NG10 8 15细胞在药物处理后 ,上清的基质金属蛋白酶 (MMP)MMP 9和MMP 2的分泌和酶的活性的变化。结果 ①DHEA和DbcAMP可抑制NG10 8 15细胞的增殖 ;②DHEA可增强DbcAMP促进NG10 8突起生长的作用。Db cAMP可以诱导NG10 8细胞突起的形成和生长 ,而DHEA收稿日期 :2 0 0 4-0 2 -0 3 ,修回日期 :2 0 0 4-0 4-19作者简介 :廖 红 ( 1965 -) ,女 ,副教授 ,博士 ,研究方向 :分子药理、神经药理 ,Tel:0 2 5 83 5 93 3 74;E mail:liaohong5 6@hotmail.com与DbcAMP同时作用 ,NG10 8 15细胞突起的长度明显增加 ,而且有突起的细胞数也明显增多 ,DHEA的剂量越高 ,这种促NG10 8 15细胞突起生长的作用越明显。③基质金属蛋白酶参与神经元的分化。DbcAMP能诱导MMP 9和MMP 2的分泌 ,与之相比 ,DHEA +DbcAMP使NG10 8 15细胞的MMP 9和MMP 2的分泌明显增多 ,且具有剂量依赖关系。结论 DHEA具有增强DbcAMP促进NG10 8

双丁酰cAMP对大鼠烟雾吸入性肺损伤的防治作用

目的 :探讨细胞内第二信使分子 c AMP稳定的人工合成同系物双丁酰 c AMP对大鼠烟雾吸入性肺损伤的防治作用。方法 :分别采用干湿重法、伊文思兰荧光法、放射免疫分析法、过氧化氢还原法、TBA比色法测定肺组织含水量、肺微血管通透性 ( PMVP)、肺组织 c AMP水平、髓过氧化物酶 ( MPO)活性及脂质过氧化物MDA含量。结果 :大鼠吸入烟雾损伤后 2 h PMVP明显增大 ,6 h达高峰 ;同时肺含水量、MPO活性及 MDA含量显著升高 ,并出现呼吸衰竭的临床表现。与此相对应 ,肺组织 c AMP水平进行性下降 ,在时相上与 PMVP呈反相变化。双丁酰 c AMP( Db-c AMP)于伤后立即 ip能显著降低 PMVP、肺含水量 ,减少肺组织的白细胞浸润 ,减轻脂质过氧化损害 ,且呈剂量依赖性 ;能升高细胞内 c AMP的药物异丙肾上腺素 ( Iso)于伤后立即 ip,也具有类似作用。结论 :Db-c AMP对大鼠烟雾吸入性肺损伤具有防治作用 ,其机制与其减少肺组织白细胞浸润、减轻脂质过氧化损伤及降低吸入烟雾损伤大鼠 PMVP有关。

双丁酰环磷酸腺苷对人精子运动功能的影响

目的 :通过研究双丁酰环磷酸腺苷 (dbcAMP)对体外人精子的运动功能有无影响 ,了解环磷酸腺苷 /蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号传导通道是否参与人精子运动功能的调节。 方法 :10例健康生育男性手淫获得并经上游优化处理的精子与不同浓度的dbcAMP一起孵育 2 0、30、6 0min后 ,采用计算机辅助的精液分析系统 (CASA)检测精子的运动参数。 结果 :dbcAMP在体外能显著提高人精子的活率及前向性运动百分率 ,并且随浓度的增加 ,这种作用显著增强 ,而对精子的形态及直线速度 (VSL)和曲线速度 (VCL)无明显影响。 结论

双丁酰环腺苷酸对体外HT29细胞增殖的调节

采用酸性磷酸酶细胞原位计数及流式细胞仪（ＦＣＭ）技术，观察了双丁酰环腺苷酸（ｄｂ－ｃＡＭＰ）对体外人结肠腺癌细胞系（ＨＴ２９）增殖的影响。结果：ｄｂ－ｃＡＭＰ在１０－４～１０－９Ｍ范围内可促进细胞增殖，尤其在１０－６～１０－８Ｍ时，ｄｂ－ｃＡＭＰ组ＯＤ值分别为１．５０±０．１１，１．５８±０．０７，１．５７±０．１２，分别为对照组的１０．３０％，１６．１８％和１１．７６％，差异显著（Ｐ＜０．０５或０．０１）。ｄｂ－ｃＡＭＰ浓度为１０－３Ｍ时，则抑制细胞增殖，至培养第５天，ｄｂ－ｃＡＭＰ组ＯＤ为１．０５±０．１３，对照组为１．２３±０．１７，有显著差异（Ｐ＜０．０５）。ＦＣＭ结果提示，ｄｂ－ｃＡＭＰ对细胞的抑制作用，与延长细胞Ｇ１／Ｓ期有关。结果表明，ｄｂ－ｃＡＭＰ对ＨＴ２９细胞增殖有双向调节作用。作者还对其作用机制进行了探讨。

双丁酰环腺苷酸促进兔成骨细胞骨保护素OPG的表达

目的:探讨膜渗透型的cAMP类似物双丁酰环腺苷酸(dBcAMP)对兔成骨细胞骨保护素(OPG)表达的影响。方法:将体外培养的兔成骨细胞用dBcAMP处理6、24、48 h后,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察成骨细胞OPGm-RNA表达强度的变化。结果:dBcAMP显著增加兔成骨细胞OPGmRNA的表达,并使OPG表达量在作用后24 h达到峰值。结论:dBcAMP能够促进体外培养的兔成骨细胞OPGmRNA的表达,cAMP信号途径对于成骨细胞OPG表达的调控可能是重要的。

双丁酰cAMP对人体肺腺癌细胞表面凝集素受体及其侵袭能力的影响

着重观察双丁酰ｃＡＭＰ对培养的人肺腺癌细胞膜上多种凝集素受体表达的影响，并将体外经双丁酰ｃＡＭＰ处理的癌细胞接种于裸鼠皮下，观察移植瘤自发性生长状况。结果表明，经双丁酰ｃＡＭＰ处理的人肺腺癌细胞表面ＲＣＡ、ＷＧＡ、ＵＥＡ－１、ＤＢＡ、ＣｏｎＡ凝集素受体表达降低，同时伴有移植瘤成瘤潜伏期延长，侵袭能力下降。结果提示双丁酰ｃＡＭＰ导致的癌细胞表面数种凝集素受体的表达下降，可能是恢复癌细胞间粘附识别能力。

双丁酰环磷腺苷钙治疗冠心病的疗效

目的:观察双丁酰环磷腺苷钙治疗冠心病心绞痛的疗效。方法:选择冠心病心绞痛病人92例,随机分为治疗组及对照组,治疗组给于双丁酰环磷腺苷钙注射液治疗,对照组给于心血通注射液治疗,疗程均为两周;比较两组疗效。结果:治疗组总有效率为89．6％,明显优于对照组(有效率54．6％),P<0．05;无严重副作用。结论:双丁酰环磷腺苷钙治疗冠心病心绞痛安全有效。

胰高血糖素和双丁酰环腺苷酸对HepG2细胞分泌载脂蛋白AⅠ、AⅡ、B100、CⅢ及E的影响

为了解胰高血糖素和双丁酰环腺苷酸在肝脏载脂蛋白代谢中的作用 ,以培养的人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象 ,采用“冻干浓缩培养液载脂蛋白测定法” ,观察了胰高血糖素和双丁酰环腺苷酸对HepG2细胞分泌载脂蛋白AⅠ、AⅡ、CⅢ、B10 0及E的影响。结果表明 ,胰高血糖素浓度为 4× 10 -7mol/L时 ,载脂蛋白AⅠ、AⅡ、B10 0及E的分泌分别减少 47.7%、5 4.1%、32 .7%和 33.2 % (P <0 .0 1) ,载脂蛋白CⅢ的分泌增加 89.1% (P <0 .0 1) ;双丁酰环腺苷酸的浓度为 1× 10 -3mol/L时 ,载脂蛋白AⅠ、B10 0和E的分泌分别减少 12 .3 %、2 4.9%和 16 .1%(P <0 .0 1) ,载脂蛋白AⅡ和CⅢ的分泌分别增加 6 6 .1%和 142 .6 % (P <0 .0 1)。胰高血糖素和双丁酰环腺苷酸对HepG2细胞载脂蛋白分泌的影响基本一致。

双丁酰cAMP对癌细胞膜上凝集素受体的影响及其与侵袭能力的相关性

双丁酰ｃＡＭＰ是一种诱导分化剂，对体外培养的癌细胞具有一定诱导分化作用。本文着重观察了双丁酰ｃＡＭＰ对培养的人肺腺癌细胞膜上多种凝集素受体表达的影响，并将体外经双丁酰ｃＡＭＰ处理的癌细胞接种于裸鼠皮下，观察移植瘤自发性生长状况。结果表明，经双丁酰ｃＡＭＰ处理的人肺腺瘤细胞表面数种凝集素受体表达降低，同时伴有移植后成瘤潜伏期延长、侵袭能力下降。由于癌细胞膜结构和功能的改变与癌细胞的识别粘附及侵袭能力密切相关，这一结果提示双丁酰ｃＡＭＰ对癌细胞膜的影响可能是恢复癌细胞间粘附识别作用，降低其侵袭能力的机制之一。

双丁酰环腺苷酸通过蛋白激酶Wee1B调控小鼠1-细胞期受精卵的发育研究

目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbc AMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础。方法将2 mmol/L dbc AMP作用于小鼠1-细胞期受精卵1 h,并显微注射Wee1Bm RNAs,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Wee1B-WT/KD注射组、Wee1B-S15A/D注射组,继续在M16培养基中培养。相差显微镜下观察小鼠受精卵的形态变化和卵裂情况,放射自显影测定各期细胞有丝分裂促进因子(MPF)活性,Western blotting方法检测Wee1B蛋白的表达、CDC2-p Tyr15和Wee1B-p Ser15的磷酸化水平。结果小鼠受精卵在有dbc AMP存在时,G_1、S、G_2和M各细胞周期均检测到磷酸化的Wee1B表达,非磷酸化条带在G_2期和M期才能检测到;各组受精卵卵裂出现时间延迟,卵裂率显著降低;h CG注射后35 h内,MPF活性一直处于低水平,CDC2-p Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化趋势相一致。结论dbc AMP激活PKA后,PKA磷酸化Wee1B蛋白的S15位点,Wee1B活性增加,阻滞受精卵分裂,本研究提示Wee1B蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点,可以更好地认识早期胚胎发育的分子事件。

双丁酰环腺苷酸对肺腺癌细胞的诱导分化作用及对其表达的凝集素受体影响

目的：研究双丁酰环腺苷酸（ＤＢｃＡＭＰ）对人肺腺癌细胞的诱导分化作用，及其与癌细胞表达凝集素受体的关系。方法：用双丁酰ｃＡＭＰ作用人肺腺癌细胞ＡＧＺＹ－８３ａ，观察细胞的生长、形态、超微结构的变化；用凝集素组化方法检测双丁酰ｃＡＭＰ对细胞表达凝集素受体的影响。结果：０．３ｍｍｏｌ／Ｌ双丁酰ｃＡＭＰ对癌细胞的生长有明显抑制作用，使细胞间接抑制有所恢复，形态结构向成熟分化；同时使细胞表达的凝集素（ＤＢＡ、ＵＥＡ－１、ｃｏｎＡ、ＷＧＡ、ＲＣＡ）受体降低。结论：双丁酰ｃＡＭＰ对人肺腺癌细胞有诱导分化作用；双丁酰ｃＡＭＰ对癌细胞表达凝集素受体的影响可能在其抑制细胞，恢复细胞识别功能，诱导细胞分化过程中有重要意义。

咖啡因、双丁酰环磷腺苷调控体外猪嗜中性粒细胞对精子吞噬性的研究

实验旨在为提高家畜人工授精效率,寻找调控人工授精诱导子宫局部免疫反应的方法。通过添加不同浓度的咖啡因、双丁酰环磷腺苷(dbcAMP)检测嗜中性粒细胞(PMN)对精子或荧光beads的吞噬率。结果表明:1 mmol/L及以上浓度的咖啡因或0.1mmol/L dbcAMP明显地抑制PMNs对精子或荧光beads的吞噬性。咖啡因和dbcAMP抑制PMNs的吞噬性,可以作为降低子宫免疫反应的精液稀释液成分,提高人工授精的效率。

DBcAMP对大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨DBcAMP对大鼠移植肝脏在冷缺血再灌注损伤的保护作用。方法:应用SD大鼠原位肝移植(OLT)动物模型,根据保存液的不同,80只大鼠随机分为3个组:HC-A液对照组(A组,n=30);DBcAMP+HC-A液实验组(B组,n=30);UW液对照组(C组,n=20)。所有组在单纯低温保存8h再行原位肝移植术,测定肝组织ATP含量和肝细胞内游离Ca2+浓度变化情况、血清转氨酶,进行组化染色。结果:B组与A组相比,低温保存8h末ATP含量(μmol/g湿重)较高,分别为0.53±0.10,0.48±0.08组间有显著性差异(P<0.05)。B组与A组相比,门静脉开放6h后肝细胞内游离Ca2+浓度(nmol/L)低,分别为419.30±51.12,472.20±57.93,组间有显著性差异(P<0.05);血清ALT、AST(U/L)均较低,分别为3153±741.79,2208±450.34;3790±1029.82,2527±662.20组间有显著性差异(P<0.01)。PAS染色示门静脉开放后,B组较A组肝组织糖原含量少。HE染色及电镜下观察B组较A损伤明显减轻,但是仍比C组重。结论:DBcAMP对大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤具有保护作用。

不同浓度dbcAMP对SH-SY5Y细胞向γ-氨基丁酸能神经元分化潜能的影响

目的:建立具有分化成γ-氨基丁酸能神经元潜能的神经干细胞模型,为γ-氨基丁酸能神经元退行性疾病的研究提供适宜的研究载体。方法:应用双丁酰环腺苷酸(dbcAMP)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),分为0mmol·L-1 dbcAMP组(对照组)和0.3、0.6、1.0及2.0dbcAMP组,观察诱导后各组SH-SY5Y细胞的形态变化;采用Imge-Pro Plus 5.0软件测量神经元样细胞神经突起长度,计算神经突起>30μm细胞所占细胞总数的百分率;采用免疫荧光细胞化学技术检测γ-氨基丁酸能神经元标志性蛋白——谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的表达,并计算其免疫反应阳性率。结果:形态学观察,对照组SH-SY5Y细胞呈多边形、圆形或梭型,胞膜光滑,边界清晰;各浓度dbcAMP组随着dbcAMP浓度的增加和诱导时间的延长,SH-SY5Y细胞胞体变小、突起变长;1.0mmol·L-1 dbcAMP组细胞互相交织,表现出成熟神经元的表型。SH-SY5Y细胞诱导培养72h后,与对照组(31.4%±4.2%)比较,0.3、0.6、1.0和2.0dbcAMP组神经突起>30μm细胞所占细胞总数的百分率(40.1%±5.7%、47.5%±6.2%、73.1%±3.2%和74.3%±6.1%)明显升高(P<0.05或P<0.01)。SH-SY5Y细胞诱导培养72h后,与对照组(10.2%±2.1%)比较,0.3、0.6、1.0和2.0dbcAMP组GAD65阳性细胞表达率(22.1%±2.4%、46.9%±3.2%、70.7%±3.4%和72.3%±3.7%)明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:SH-SY5Y细胞具有分化为γ-氨基丁酸能神经元样细胞的潜能,1.0mmol·L-1是dbcAMP的最佳诱导浓度。

dBcAMP通过上皮生长因子受体间接激活诱导星形胶质细胞形态变化

目的探讨双丁酰环腺甘酸(dBcAMP)诱导星形胶质细胞形态变化的信号传导通路。方法原代培养星形胶质细胞,采用免疫细胞化学技术检测dBcAMP诱导的星形胶质细胞形态变化,并应用特定抑制剂进一步探讨其形态变化的信号传导机制。结果金属蛋白酶和上皮生长因子受体参与dBcAMP诱导的星形胶质细胞形态变化。结论 dBcAMP诱导的星形胶质细胞形态变化是通过上皮生长因子受体间接激活介导完成的。

db-cAMP对转化细胞增殖抑制及其对CaM水平和PKⅡ活性的影响

目的 探讨双丁酰 环核苷酸 (db cAMP)对转化细胞增殖及细胞表型作用的机理。 方法 以流式细胞光度术 (flowcytometry ,FCM)、软琼脂集落形成、放射免疫、Northern印迹和激酶活性分析等方法观察db cAMP对转化的C3H1 0 T1 2 小鼠成纤维细胞增殖、细胞表型、钙调素 (calmodulin ,CaM)表达及蛋白激酶Ⅱ (proteinkinaseⅡ ,PKⅡ )活性的影响。 结果 db cAMP(1mmol L)使C3H1 0 T1 2 转化细胞增殖及软琼脂集落形成能力受到显著抑制 ,转化细胞中CaM的表达及PKⅡ活性明显高于正常细胞 ,经db cAMP处理后也受到明显抑制。

组织工程化小口径血管在体移植的研究

我们通过体外构建、体内培养的方法构建组织工程化血管，然后植入动物的股动脉，探讨利用小口径组织工程化血管进行血管移植的可能性。一、材料和方法1．材料：血管内皮细胞生长因子（VEGF）、全转维甲酸（AT—RA）、双丁酰环磷酸腺苷（db—cAMP）、细胞外基质凝胶（ECMgel，美国Sigma公司）；兔抗人八因子相关抗原（vWF）多克隆抗体、兔抗人B肌动蛋白（B—actin）单克隆抗体、异氢酸荧光素（FITC）标记羊抗兔IgG、鼠抗Brdu抗体、FITC标记羊抗鼠IgG（武汉博士德生物工程有限公司）；