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题名优化噬热栖热菌的遗传转化体系
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作者
李海娟
徐玲玲
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机构
西安文理学院生物与环境工程学院
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出处
《生物技术》
CAS
2019年第1期63-68,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(31700059)
陕西省自然科学基金项目(2018JQ3037)
陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20180210)
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文摘
[目的]优化噬热栖热菌Thermus thermophilus的转化体系。[方法]将质粒DNA的形态、浓度及转化时间作为变量设计噬热栖热菌T.thermophilus的转化体系,以通过直接双交换同源重组法获取Δpyr E突变体的概率为依据判定转化效率。[结果]在转化时间为2 h,使用3.0μg/m L线性质粒DNA,获取表观Δpyr E的概率为3.44×10^(-5);而使用同样浓度的超螺旋质粒DNA,该概率可达1.03×10^(-3);说明超螺旋质粒的转化效率高于线状质粒。质粒DNA的使用浓度及转化反应时间对转化效率亦有影响,但并非完全成正相关。使用浓度为15μg/m L超螺旋质粒DNA,在转化时间为3 h时,获取表观Δpyr E的概率达到最大值(1.36×10^(-2));超过该阈值,转化效率降低。[结论]在T.thermophilus中,通过优化转化体系将基因无痕敲除突变体获取概率提高到10^(-2)。
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关键词
噬热栖热菌
遗传转化系统
双交换性同源重组法
基因无痕敲除突变体
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Keywords
Thermus thermophilus
genetic transformation system
double-crossover homologous recombination
gene clean deletion mutants
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分类号
Q93-31
[生物学—微生物学]
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