1种用于检测抑制基因功能的酵母株系的建立(英文)

酵母被广泛用于分子生物学中基因功能的检测。为扩大酵母株系UCC419在抑制基因活性检测方面的应用,本研究通过向UCC419株系中导入用特殊引物扩增出的包含标记基因TRP1的PCR片段,利用同源重组将UCC419中的筛选标记基因LEU2敲除,并同时插入TRP1,新建立的株系命名为UCC419m(m:modi-fied)。UCC419m为TRP1筛选、leu2突变型菌株,其它基因型均同UCC419。给UCC419m中转入携带LEU2的质粒pDEST32检测是否能恢复其表现型,同时转入不携带LEU2的质粒pDEST22作为阴性对照,将转化子在不含LEU2与URA3的培养基中培养,结果显示,携带LEU2质粒pDEST32的转化子能够在LEU2与URA3缺陷型培养基上正常生长,而不携带LEU2质粒pDEST22的转化子不能生长。本研究结果表明,成功建立了一种适用于基于Invitrogen载体的抑制基因活性检测或从文库中筛选抑制基因的酵母菌株。