幼畜腹泻双价基因工程苗的安全性及免疫保护试验

用幼畜腹泻ＣＰＢ－ＳＴ双价基因工程苗对１６２８头怀孕母牛，２３４３只怀孕母羊进行免疫接种，所有接受免疫接种的怀孕母畜均无任何不良反应，所产幼畜均发育正常。免疫母牛共产犊牛１６２８头，发生腹泻者８８头，发病率为５．４％，死亡２６头，死亡率为１．５９％，与对照组（发病率４６．７％、死亡率２８．９％）相比，两组的发病率和死亡率均呈极显著差异（Ｐ＜０．０１）。免疫母羊共产羔羊２３４７只，发生腹泻者１３６只，发病率为６．１％，死亡４９只，死亡率为２．１％，与对照组（发病率５０．４％，死亡率３０．８％）相比，两组的发病率和死亡率均呈极显著差异（Ｐ＜０．０１）。试验结果表明，用ＣＰＢ－ＳＴ双价基因工程苗对临产前的怀孕母畜（牛羊）进行免疫接种，可有效地预防新生幼畜（犊牛、羔羊）腹泻的发生，且安全性良好。

幼畜腹泻双价基因工程苗对牛和羊的攻毒保护试验

用幼畜腹泻双价基因工程苗以两种剂量（正常免疫剂量和1／2免疫剂量）分别免疫接种怀孕母牛和怀孕母羊，待其分娩并保证其所产幼畜（犊牛、羔羊）采食初乳后，经口灌服致幼畜腹泻的强毒活菌。结果，正常免疫剂量组，犊牛腹泻发病率为14．3％，死亡率为零；羔羊腹泻发病率为15．8％，死亡率为2．7％。1／2免疫剂量组，犊牛腹泻发病率为30．7％，死亡率为10．3％；羔羊腹泻发病率为24．4％，死亡率为12．2％。未接种疫苗的对照组，犊牛腹泻发病率为83．3％，死亡率为44．4％；；，羔羊腹泻发病率为78．9％，死亡率为57．8％。经统计学处理，三组之间犊牛和羔羊的发病率和死亡率均是极显著差异（P＜0．01）。

幼畜腹泻双价基因工程苗

一、主要技术内容 "幼畜腹泻双价基因工程苗"是一种能够预防由肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起的新生幼畜腹泻和由产气荚膜梭菌β-毒素引起的幼畜出血性坏死性肠炎(羔羊痢疾、犊牛肠毒血症等)的基因工程重组细菌毒素疫苗.该疫苗的研究工作历时10年,经过了"ST基因工程苗的研究"、"幼畜腹泻双价基因工程苗的研制"和"幼畜腹泻双价基因工程苗的中试研究",在国际上首次将产气荚膜梭菌的β-毒素基因与大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)的前体蛋白基因融合,成功构建了携带能表达β-毒素和(ST)肠毒素融合蛋白的CPB-ST融合基因的基因工程菌株BL21(DE3)(PECB-ST1).通过免疫原性试验、安全性试验、攻毒保护试验和应用示范试验,表明基因工程重组菌株BL21(DE3)(PECB-ST1)可以作为预防由产气荚膜梭菌的β-毒素和大肠杆菌ST肠毒素引起的幼畜腹泻的双价基因工程苗的生产菌株.该研究成果经宁夏回族自治区科技厅鉴定达到国际领先水平.