儿童和老年人群接种双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)安全性观察

目的评价双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)应用于6～15岁及60岁以上人群的接种安全性。方法对知情同意的6岁以上三个年龄组500名健康人群按2∶1∶2的比例非随机接种双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞),采用同一批疫苗接种16～60岁人群作为对照组,观察6～15岁及60岁以上人群试验疫苗接种反应。结果6～15岁儿童组、16～60岁成人组在初次疫苗接种后中度全身(体温)反应率均为1.00%,6～15岁儿童组在初次疫苗接种后中度局部(局部红肿)反应率为0.50%;6～15岁儿童组、16～60岁成人组在第二次疫苗接种后没有观察到中、强度(体温、局部红肿)反应;>60岁老人组在初次和第二次疫苗接种后均没有发现中、强度反应。三组的全身、局部反应发生率均差异无显著性(P>0.05)。结论双价肾综征出血热纯化疫苗(Vero细胞)在6～15岁儿童组和>60岁老人组人群接种具有良好的安全性。

应用β-丙内酯灭活双价Vero细胞肾综合征出血热病毒纯化疫苗

为探讨β-丙内酯灭活双价Vero细胞肾综合征出血热(HFRS)纯化疫苗的最佳条件,采用不同终浓度的β-丙内酯和不同的灭活时间对疫苗进行灭活,用细胞培养法进行病毒增殖试验,以确定灭活效果。采用高效液相色谱法检测和分析β-丙内酯的最佳水解条件,并测定了三批疫苗β-丙内酯残留量。结果显示,采用终浓度为1:4000β-丙内酯4℃灭活24h,然后再于37℃水浴中水解2h,可达到完全灭活HFRS纯化疫苗,且无β-丙内酯残留的目的。

双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)的纯化工艺

目的 研究肾综合征出血热抗原的纯化工艺。方法 用Vero细胞繁殖肾综合征出血热病毒 ,经过灭活、浓缩 ,Sepharose 4FF凝胶过滤纯化。结果 用Sepharose 4FF柱层析纯化时 ,2 80nm监测收集到 3个吸收峰 ,其中第 1峰为抗原峰 ,将第 1峰稀释配制后进行动物实验 ,表明按照该工艺制备的Vero细胞纯化疫苗安全有效。结论 本研究为肾综合征出血热纯化疫苗的研制奠定了基础。

肾综合征出血热双价纯化疫苗(Vero细胞)病毒株的筛选及其免疫原性研究

选用在Vero细胞上初步适应的LR1(I型 )、R2 2 (Ⅱ型 )株病毒 ,经乳鼠脑或腹腔接种 ,收剖感染鼠脑并在Vero细胞传代适应 ,此收获病毒与直接以Vero细胞传代的病毒比较表明 :抗原效价、毒力滴度有明显提高。用LR1、R2 2 株病毒感染的Vero细胞培养物制备单价粗制疫苗和双价精制纯化疫苗免疫家兔 ,经空斑减少中和试验检测中和抗体 ,结果表明经乳鼠和Vero细胞交替传代适应后的LR1、R2 2

双价纯化肾综合征出血热地鼠肾原代细胞疫苗的免疫效果

目的 考核双价肾综合征出血热地鼠肾原代细胞纯化疫苗 (汉滩型 +汉城型 )对人体的安全性及免疫原性。方法 分别选择南方和北方两个观察点 ,分别接种 5 18人和 6 5 0人 ,观察接种对象的副反应 ,并测定血清荧光抗体和中和抗体。结果 在观察中仅有 2人呈现度局部副反应 ,总反应率为 0 .5 0 %。IFA抗体阳转率为89.95 % ,ELISA抗体阳转率为 10 0 % ,GMT为 1735。中和抗体阳转率大于 87.38%。结论 该疫苗对人体安全 。

肾综合征出血热双价纯化疫苗(Vero细胞)安全性的研究

在肾综合征出血热 (HFRS)双价纯化疫苗 (Vero细胞 )的研制中 ,对病毒培养用Vero细胞致瘤性和试制疫苗的过敏原性进行了动物实验研究 ,结果表明 ,病毒培养用Vero细胞无致瘤性 ,三批试制疫苗无过敏原性。

肾综合征出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗纯化方法的研究

目的 建立简便、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。方法 采用超滤浓缩、醋酸锌沉淀和柱层析（亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析）等方法，对出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗进行提纯对比试验。结果 用超滤浓缩和Sepharose 4FF凝胶柱层析或用醋酸锌沉淀和凝胶柱层析，纯化的疫苗均可达到质量标准，而用 cellufine sulfate gel亲和层析和离子交换层析均不理想。结论 建立了经济、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。

肾综合征出血热双价纯化疫苗的研制

目的: 研制肾综合征出血热双价纯化疫苗。方法:肾综合征出血热病毒I型LR1 株和II型R22株分别在Vero细胞上接种培养。I、II型病毒培养液依次经β 丙内酯灭活、超滤浓缩、蔗糖区带离心纯化及层析脱糖等处理。将检定合格的I、II型单价病毒原液等量混合后, 用AI(OH)3 佐剂吸附,制备 3批双价纯化疫苗。结果: 该 3批疫苗已经自检和中国药品生物制品检定所复检合格, 并已进行临床试验。结论: 采用Vero细胞培养制备肾综合征出血热双价纯化疫苗方法可行。

双价肾综合征出血热纯化疫苗的研究

目的 研制包含Ⅰ型和Ⅱ型病毒抗原的肾综合征出血热纯化疫苗 ,以提高疫苗质量及临床应用效果。方法 用金黄地鼠肾细胞培养的PS 6株 (Ⅰ型 )病毒和L99株 (Ⅱ型 )病毒以体积比 1∶1的比例配制成双价疫苗 ,经醋酸锌沉淀、超滤浓缩、Sepharose 4FF柱层析制备成双价纯化疫苗。结果 双价纯化疫苗经中国药品生物制品检定所检测 ,各项指标全部合格。疫苗于 37℃放置 2周和 4℃放置 3年 ,效力试验均合格。临床观察血清中和抗体阳转率大于 85 % ,仅出现 0 .5 %的轻反应。结论 研制的出血热双价纯化疫苗 ,各项质量指标均符合《双价肾综合征出血热纯化疫苗试行规程》的要求 。

肾综合征出血热Vero传代细胞疫苗的研究

目的 研究肾综合征出血热 (HFRS)Vero传代细胞疫苗。方法 将HFRS双价沙鼠肾细胞灭活疫苗的生产疫苗株Z10 (Ⅰ型 )、Z3 7(Ⅱ型 )适应到Vero细胞上进行连续传代 ,并用不同代次的Vero细胞适应株制备Vero传代细胞疫苗。结果 Z10 、Z3 7株感染Vero细胞后第 1代即可达到较高病毒滴度 ,并且在Vero细胞中持续传代适应 ,病毒滴度分别维持在 6.2 5～ 6.75和 6.5 0～ 7.0 0logTCID50 /ml之间 ,较为稳定。用不同代次的Vero细胞适应株制备而成的HFRSVero细胞灭活疫苗抗原效价和疫苗的病毒滴度有较大提高 ,反向间接血凝效价从Z10 Cp1Vero细胞疫苗的阴性上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的 1∶64 ,从Z3 7Cp1Vero细胞疫苗的 1∶2上升到Z3 7Cp10 Vero细胞疫苗的 1∶64 ;疫苗病毒滴度(logTCID50 /ml)从Z10 Cp1Vero细胞疫苗的 4.2 5上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的 6.5 0 ,从Z3 7Cp1Vero细胞疫苗的 6.2 5上升到Z3 7Cp10 Vero细胞疫苗的 7.5 0。疫苗在抗原量和病毒滴度上基本符合中国生物制品的要求。结论 HFRSVero传代细胞疫苗的生产 ,疫苗株在Vero细胞中的连续传代适应起关键性作用。

地鼠肾原代细胞双价肾综合征出血热疫苗免疫效果的研究

对新近研制成功的地鼠肾原代细胞肾综合征出血热双价疫苗 (汉滩型 +汉城型 )进行了Ⅱ期临床扩大观察 ,考核其对人体的安全性和中和抗体反应。将观察人群分别选择在中国南方和北方两个点 ,每个点接种 5 89人和6 0 0人 ,观察其接种对象的副反应程度和采集血清样品测定其荧光抗体并以蚀斑减少中和法测定中和抗体 ,考核疫苗效果。观察结果显示 ,在观察的 2 5 3人中分别有 6人呈现轻度局部副反应和 1人 37.5℃以下的低热全身反应 ,总反应率分别为 2 .77% (7/ 2 5 3)。IFAT抗体阳转率对Ⅰ型病毒为 94.85 % (184/ 194) ,对Ⅱ型病毒为 89.6 9% (174/194) ,ELISA抗体阳转率为 99.44 % (179/ 180 ) ,GMT132 5。PRNT抗体阳转率Ⅰ型为 92 .5 5 % (87/ 94) ,GMT10 .17,Ⅱ型为 93.6 2 % (88/ 94) ,GMT11.0 8。经过Ⅱ期临床人体观察结果显示 ,该双价疫苗仅有轻度局部反应和良好的中和抗体应答。证明该疫苗对人体安全 。

肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株在Vero细胞上的适应传代及其抗原性研究

〔目的〕将肾综合征出血热疫苗后备毒株适应于Vero细胞 ,观察病变情况 ,并对其抗原性和繁殖特性进行研究。〔方法〕将新分离的汉坦病毒ZJ2、ZJ4、ZJ7株和汉城病毒ZJ5株在Vero细胞上进行连续传代 ,采用间接免疫荧光法(IFA)、反向被动血凝试验 (RPHA) ,研究传代后毒株的病毒滴度、抗原量以及细胞的病变情况 ,同时将传代后的病毒接种敏感动物 ,观察动物的发病情况和毒株的繁殖特性。〔结果〕经过 5次连续传代 ,四株病毒在Vero细胞上均显示出良好的适应性 ,从第二代开始病毒滴度稳定在 6.0 0LgTCID5 0 ml以上 ,第五代时最高达 7.5 0LgTCID5 0 ml ,第三代毒株抗原量均已达到 1:12 8,ZJ7株抗原量最高时达 1:768,四株毒株感染Vero细胞 ,连续观察 12d不见细胞产生病变 ,第五代细胞病毒液接种敏感动物 ,9d后动物发病甚至死亡。〔结论〕四株病毒已适应于Vero细胞 ,且具有病毒滴度高、毒力强和抗原性良好的特性 ,是Vero细胞肾综合征出血热灭活疫苗良好的后备筛选毒株。

肾综合征出血热双价纯化疫苗的稳定性试验

将检定合格的连续三批肾综合征出血热双价纯化疫苗(Vero细胞) 2～8℃放置3、6、1 2、1 8、2 4、30月和37℃放置7、1 4、2 1、2 8天,对其稳定性进行系统试验。从疫苗的外观、pH值变化及疫苗免疫家兔后的中和抗体水平检验疫苗的稳定性。结果表明三批疫苗具有良好的稳定性。

应用柱层析法纯制Vero细胞肾综合征出血热疫苗

从Vero细胞培养液中提纯培养的汉滩病毒 ,将细胞冻融后上清液过Sepharose 4FF凝胶层析柱 ,经紫外线2 80nm波长检测到三个吸收峰 ,RPHA证实仅第一峰为病毒抗原峰。另二个峰为杂蛋白。实验说明Sepharose4FF凝胶过滤对于提纯HFRS汉滩病毒是非常有效的 ,能去除

双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)细菌内毒素检查法

目的建立双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)细菌内毒素检查法。方法细菌内毒素检查的定量测定法与凝胶限量法两种方法进行干扰实验。结果通过样品进行适当的稀释,凝胶法:样品浓度为1.2×10-3mg/mL,使用灵敏度为0,06EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检查无干扰作用;定量测定:与凝胶法相同的样品浓度回收率好,无干扰作用。结论双价肾综合征出血热灭活疫苗(地鼠肾细胞)可以建立细菌内毒素检查法。

流行性出血热病毒传代细胞双价纯化疫苗研究

目的我国的流行性出血热主要由汉滩型(HTN)和汉城型(SEO)病毒引起,疫苗的免疫接种是控制和预防本病发生的关键之举。现有的疫苗虽有较好的近期防病效果,但副反应多、抗体水平低,而且由于需要大量的动物种群以提供原代细胞的来源,造成环境污染而疫苗质量又难以控制。本专题的主要研究内容和目的就是用Vero细胞作为生产疫苗的基质,同时用现代较先进的浓缩纯化技术和检测手段,研制成精制双价疫苗。方法两型病毒分别在Vero细胞传代适应至高滴度,大量培养收获上清作为疫苗原液,采用超滤技术浓缩50～100倍,然后通过Sepharose4 FF柱纯化。认真测定抗原和蛋白含量、牛血清含量、细胞DNA含量及必要的试验,精心配制成Vero双价疫苗。结果按我国“生物制品规程”和出血热灭活疫苗临床试验最低标准进行全面系统鉴定,完全符合质量要求。正待批准进行人体临床试验。结论本品有可能作为现有疫苗的替代品。

肾综合征出血热疫苗的研究进展

肾综合征出血热(HFRS)是以鼠类为主要传染源,由汉坦病毒(HV)引起的自然疫源性疾病。本病在欧亚大陆许多国家流行,并在世界其它地区不断出现,中国流行最为严重。

肾综合征出血热纯化疫苗候选毒株在Vero细胞上的适应传代及其免疫原性研究

目的 将肾综合征出血热纯化疫苗候选毒株适应于Vero细胞 ,并对其抗原性和免疫原性进行研究。方法 将汉滩病毒H82 0 7株和汉城病毒Y86 0 13株在Vero细胞上进行连续终末稀释传代 ,采用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验和空斑减少中和试验 ,研究传代后毒株的繁殖特性、病毒滴度、抗原量及免疫原性。结果 经过 5次终末稀释传代 ,两株病毒在Vero细胞上均显示出良好的适应性 ,从第六代开始病毒滴度稳定在 7 0LgTCID50 ml以上 ,第八代两毒株抗原量均已达到 1∶6 4 ,H82 0 7株抗原量继续升高 ,最高时达 1∶2 5 6。用两株病毒不同培养代次上清液制备的单价原液灭活疫苗免疫家兔二针 ,免疫血清对同型毒株的中和效价均达到 1∶10。结论 两株病毒已适应于Vero细胞 ,且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性 ,适合用作Vero细胞肾综合征出血热灭活纯化疫苗的候选毒株。