双份脐血间CD34^+细胞与CD3^+细胞相互作用对分化增殖能力的影响

目的双份脐血移植的植入动力学机制目前尚无定论,推测双份脐血中的淋巴细胞与优势份脐血的产生相关,本实验将双份脐血的CD34+细胞与CD3+细胞混合培养,观察CD3+细胞对CD34+细胞的增殖分化有无影响。方法建立液体和半固体培养体系,将免疫磁珠分选纯化的双份脐血间的CD34+细胞和CD3+细胞混合培养6d和14d。以流式细胞计数观测CD34+细胞培养后的分化指标(CD33,CD41,CD71);计数集落形成单位(GM-CFU、BFU-E、GEMM-CFU)分析CD34+细胞的增殖情况。结果液体共培养后各份CD34+细胞表面分化指标的变化。脐血CD34+细胞分选富集的纯度为(98.70±0.72)%。3d实验组和对照组的各项分化指标无差异(P>0.05);6d的CD33、CD71实验组明显低于对照组,而CD41明显高于对照组(P<0.05)。半固体共培养后CD34+细胞增殖能力的变化。实验组的红系集落形成单位(BFU-E)及粒单细胞集落形成单位(GM-CFU)数低于对照组(P<0.05),而混合细胞集落形成数(GEMM-CFU)高于对照组(P<0.05)。结论将两份脐血的CD34+细胞和CD3+细胞体外混合培养对CD34+细胞的增殖分化能力有影响,推测双份脐血间的相互作用可部分地通过CD3+细胞介导。

成人双份脐血造血干细胞移植治疗血液病的临床研究

目的探讨减低剂量预处理（RIC）的成人双份脐血造血干细胞移植（CBT）治疗血液病的效果及相关毒性。方法观察并分析28例RIC的成人双份CBT治疗的耐受情况、移植相关并发症、总生存率及无病存活率。预处理方案：环磷酰胺＋氟达拉宾＋2 Gyγ射线全身照射。移植物抗宿主病（GVHD）的预防：环孢素（CsA）联合霉酚酸酯及抗胸腺细胞免疫球蛋白。回输的双份脐血所含有核细胞总数均≥3.5×10^7/kg。结果所有患者均完成移植治疗,多例次出现了轻、中度治疗相关的器官功能损伤。移植后造血重建的中位时间为＋42 d,1例植入失败。重度（Ⅲ～Ⅳ）急性GVHD发生率为12%。中位随访期21个月,预期5年总生存率为56%,无病存活率为48%。结论RIC的双份CBT治疗成人血液病是安全、有效的。致命性感染和血液病复发是导致移植失败的主要原因。

双份脐血移植后受者骨髓间充质干细胞嵌合情况

目的研究双份脐血移植（DCBT）受者骨髓间充质干细胞（MSC）的嵌合状态。方法急性粒细胞白血病M2a型男性患者1例，接受改良白消安环磷酰胺方案＋抗胸腺细胞球蛋白（ATG）预处理，输注5个抗原（5／6）相合和4个抗原（4／6）相合的非血源脐血各1份，移植后19d粒系造血重建。移植后87d，采用密度梯度离心法分离DCBT后受者及正常供者的骨髓单个核细胞，分别培养MSC，用流式细胞术检测细胞表面标志，诱导其向成脂肪细胞和成骨细胞分化，应用逆转录聚合酶链反应法检测MSC表面造血及免疫相关分子的表达，短串联重复序列聚合酶链反应检测受者MSC、外周血、骨髓中供者细胞嵌合率。结果移植后受者MSC与正常供者MSC具有相似的细胞形态、免疫表型以及分化潜能，均能表达白细胞介素6、干细胞因子、白血病抑制因子和粒一巨噬细胞集落刺激因子等造血及免疫相关分子的mRNA。DCBT后受者骨髓优势脐血嵌合度达96．4％，外周血嵌合度达95．7％，MSC的优势脐血嵌合度为5．4%，MSC中受者本身部分占94．6％。结论DCBT后，受者造血重建仅来自于其中1份脐血。移植后骨髓MSC大部分来源受者本身，部分嵌合的供者MSC来源于植入的单份脐血。

非血缘双份脐血造血干细胞移植研究进展

脐血移植（cord blood transplantation，CBT）已成为儿童和成人患者恶性及非恶性疾病的重要治疗手段。因为细胞数量是决定CBT成功的主要因素，所以有限的细胞数量限制了单份脐血在高体重儿童和成人患者中的应用。2005年以来，双份CBT的开展成功地扩大了CBT的应用范围。与单份CBT相比，双份CBT后急性移植物抗宿主病发生率轻度增高，但移植物抗白血病作用明显增强。因此，双份CBT成为高危恶性血液病患者更有吸引力的选择。本文就近年来双份CBT的研究进展，综述如下。

双份脐血造血干细胞移植的现状

异基因造血干细胞移植是治疗血液系统恶性及非恶性疾病的一种有效的根治方法。与骨髓和外周血干细胞移植相比，脐血干细胞移植以其来源丰富，取材方便，术后移植物抗宿主病发生率较低及程度较轻等优势而获得了越来越广泛的运用。但因单份脐血中所含有的有核细胞数较少等问题限制了脐血移植的适用范围。为此，人们尝试采用双份脐血造血干细胞移植。本文就其近年来的发展现状作一综述。

非血缘双份脐血移植植入规律及植入动力学研究

目的研究非血缘双份脐血移植（DUCBT）的植入规律及植入动力学。方法选择接受DUCBT的血液病患者29例，采用复合扩增荧光标记短串联重复序列结合聚合酶链反应（STR—PCR）方法对供受者16个特异性等位基因进行定量分析，了解造血细胞嵌合体动态变化，判断植入情况，研究DUCBT植入规律。同时，通过对两份脐血复苏后有核细胞总数（TNC）、CD^34＋细胞数、CD^3细胞数和NK细胞数、冷冻前集落形成单位（CFU）和粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU—GM）进行分析，研究植入份脐血的植入动力学和植入份脐血的特点。结果29例患者中，23例获得植入，其中22例为单份脐血的优势植入，1例为两份脐血的均势植入。22例单份脐血优势植入者中，20例移植后14d、另2例移植后21dSTR—PCR检测呈100％单份脐血嵌合体；6例未获得植入的患者，移植后14dSTR-PCR显示2例呈双份脐血嵌合体，4例呈双份脐血或单份脐血与受者混合嵌合体，移植后21d外周血和移植后30d骨髓均呈100％受者嵌合体。DUCBT后7dSTR—PCR检测结果与是否植入不一致（kappa=0．112，P=0．198），14、21d外周血和30d骨髓标本均一致（kappa=0．811，P=0．001；kappa=0．900，P=0．001；kappa=0．900，P=0．001）。DUCBT获得植入患者植入份与非植入份脐血相比，复苏后TNC、复苏后CD^34＋细胞数、冷冻前CFU、冷冻前CFU—GM、复苏后CD^3＋细胞数、复苏后NK细胞数差异均无统计学意义（P=0．783、0．455、0．615、0．534、0．114、0．463）。结论采用STR．PCR技术检测供受者16个特异性等位基因的定量分析方法确定DUCBT后的植入状态是敏感和特异的，DUCBT后14d可作为确定脐血是否植入的时间。DUCBT中优势植入份脐血的特点仍不清楚，需进一步研究。

单份与双份非亲缘脐血移植治疗血液疾病临床效果的比较

目的:分析比较单份与双份非亲缘脐血造血干细胞移植治疗血液疾病的临床效果。方法:回顾性分析2006年至2016年国内8家移植中心185例单份脐血干细胞移植(single-unit umbilical cord blood transplantation,SU-UCBT)与66例双份脐血干细胞移植(double-unit umbilical cord blood transplantation,DU-UCBT)病例临床资料,比较SU-UCBT和DU-UCBT 2种移植方式的植入率、中性粒细胞和血小板植入时间,恶性和非恶性血液病患者接受SU-UCBT和DU-UCBT后急性移植物抗宿主病(acute graft vs host disease,a GVHD)发生情况和受者生存率。结果:SU-UCBT和DU-UCBT受者植入率分别为78.9%和70.7%,其中恶性血液病患者植入率SU-UCBT为89.1%,DU-UCBT为82.5%。非恶性血液病患者SU-UCBT和DU-UCBT植入率分别为64.0%和53.8%,SU-UCBT和DU-UCBT的植入率相似(P>0.05)。SU-UCBT和DU-UCBT受者中性粒细胞植入时间中位数都为18 d,血小板植入时间中位数分别为40 d和27 d,无显著差异(P>0.05)。SU-UCBT和DU-UCBT受者Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ度a GVHD发生率分别为22.6%、22.6%、8.2%、12.3%和21.3%、14.9%、10.6%、10.6%,均无显著差异(均P>0.05)。SU-UCBT和DU-UCBT受者中位生存时间分别为1 460 d(17~2 200 d)和988 d(21~2 200 d),6年累积存活率分别为42.5%和40.4%,无显著差异(P>0.05)。结论:SU-UCBT和DU-UCBT植入成功患者的中性粒细胞和血小板植入时间、a GVHD发生率、存活时间及6年累积存活率均无显著差异,提示DU-UCBT是安全有效的移植选择。但仍需完善SU-UCBT和DU-UCBT评价体系及进一步探究DU-UCBT的植入机制,以便指导科学地选择UCBT方式。

非血缘异基因脐血造血干细胞移植现状、问题与对策

非血缘异基因脐血移植(UCBT)自1988年第一例发展至今已经经历了20年。全世界报道脐血移植的病例已经累积10 000例以上。大量的临床研究报告和统计学处理结果已有力地证实非血缘异基因脐血移植是有显效的,HLA0-1位点不合的UCBT的临床TRM、复发率和无复发生存率等数据和HLA全相合骨髓移植的相仿,但UCBT的重度GVHD发生率明显减少。已经公认:异基因脐血无疑是一个造血干细胞随时可取到的新来源,尤其当病人不能及时找到合适的HLA全相合非血缘骨髓供者,也没有单倍体相合的外周血供者时。近年来,异基因脐血移植的两大新发展,一是脐血双份移植,一是脐血移植用于非恶性的难治性疾病治疗(如重症免疫缺损、地中海贫血、骨髓衰竭综合症和代谢障碍病等等)。脐血双份移植用于大体重儿童或成人病例并获得成功报告越来越多,其发展势头超过了儿童单份UCBT病例。双份异基因脐血移植的临床成功实践给有关基础研究提出许多令人困惑而又饶有兴趣的问题,例如HLA互不相合的双份脐血在体内的'斗争'究竟是什么,为什么不破坏整个移植,反而提高了植入率?双份脐血有核细胞剂量之和并不高于单份脐血移植成功的剂量,而每单份的细胞剂量都低于单份脐血移植成功需要的剂量,这样反而提高了植入率,为什么?双份脐血之间,受者之间的HLA都互不相合,为什么受者可以在第一阶段容纳双份脐血同时植入,以后双份脐血中只有一份可长期植入,又为什么?那一份脐血细胞能优胜而长期植入的因素是什么?本文参考国际UCBT文献,就如何评价非血缘性异基因UCBT存在的问题,采取对策及其发展前景,加以讨论。

脐血造血干细胞移植治疗白血病的研究进展

人脐血中造血干细胞(HSCs)含量丰富,且免疫细胞功能不成熟,逐渐被用于治疗多种恶性、非恶性血液系统疾病;脐血在满足一定条件下(HLA配型、有核细胞及CD34细胞数),其治疗效果甚至优于骨髓移植(BMT)和外周血造血干细胞移植(PBSCT)。作者从HLA配型要求、有核细胞及CD34细胞含量的角度综述脐血HSCs移植的疗效。