胆碱酯酶及其抑制剂在心力衰竭中的作用研究进展

胆碱酯酶(ChE)是由肝脏合成的一种反映肝脏储备状态的关键酶,主要负责水解神经递质乙酰胆碱,并在体内的多种生理过程中发挥关键作用,尤其是在神经信号传导的过程中。近些年研究发现,胆碱酯酶抑制剂(ChEI)对神经系统疾病具有巨大的治疗潜力。心力衰竭患者常合并痴呆症等神经系统疾病,因此,ChE及其抑制剂在心力衰竭中的临床研究受到广泛关注。本文综述了ChE及其抑制剂在心力衰竭中的作用机制,以及血清ChE水平在评估心力衰竭患者预后中的价值,探讨ChEI治疗心力衰竭的临床应用现状及研究方向,旨在为心力衰竭的预后评估和治疗方案提供新的思路。

乙酰胆碱酯酶抑制剂与尼麦角林联合奥拉西坦治疗轻中型脑梗死患者的临床分析

目的:探讨乙酰胆碱酯酶抑制剂(多奈哌齐)与尼麦角林联合奥拉西坦治疗轻中型脑梗死患者的临床疗效。方法:以本院2019年9月~2021年11月收治的88例脑梗死患者为研究对象,根据就诊时间编号,应用电脑随机数字表分为两组,各44例。对照组予以奥拉西坦,实验组基于对照组加用多奈哌齐+尼麦角林,统计比较两组简易精神状态评价量表(MMSE)评分、日常生活能力(ADL)评分、脑部血流动力学指标[阻力指数(RI)、平均流速(Vmean)]及不良反应发生率。结果:治疗后,实验组MMSE评分高于对照组,ADL评分低于对照组(P<0.05);治疗后与对照组比较,实验组Vmean速度较快,RI速度较慢(P<0.05);治疗过程中,实验组不良反应发生率为4.55%,与对照组的9.09%比较,无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐与尼麦角林联合奥拉西坦治疗轻中型脑梗死患者,可改善患者认知功能,提高脑部血流速度,且安全性良好。

乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展

胆碱能假说为阿尔茨海默病的治疗提供了初步可行的方法,在增强胆碱能传递的不同治疗方法中,抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)是目前改善本病胆碱能缺陷与症状的最成功的方法。本文综述了乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)的研究进展,分别介绍了用于药物治疗的乙酰胆碱酯酶抑制剂,以及一些尚在实验阶段的新型乙酰胆碱酯酶抑制剂。

松材线虫乙酰胆碱酯酶1基因沉默及蛋白抑制剂

【目的】为提高苦参碱的杀虫效果,对松材线虫的药剂防治靶标乙酰胆碱酯酶1基因(Bx ACE1)进行研究。【方法】松材线虫采集自广东省内马尾松,贝曼漏斗法分离,灰葡萄孢菌苔上25℃避光培养扩繁线虫。克隆Bx ACE1基因全长并进行序列分析,通过基因沉默和蛋白抑制2种技术阻断该基因功能,研究苦参碱的杀虫效果,并应用Q-PCR技术鉴定RNAi效果。【结果】5'和3'序列拼接得到基因全长2 145 bp,命名为Bx ACE1。同源序列多序列比对表明线虫ACE的进化速度与线虫进化速度一致。蛋白质三维结构分析表明,Bx ACE1由14个α螺旋包围着13个β折叠,鉴于氢键数量越多结合越稳定,利用docking技术筛选出石杉碱甲是松材线虫乙酰胆碱酯酶1蛋白的较佳抑制剂。RNAi明显增加了苦参碱的杀虫效果,石杉碱甲本身对线虫毒性较小,共同施用RNAi和石杉碱甲对线虫毒性仍然较小,但RNAi处理组线虫与Inhibitor(0.03%苦参碱+1μmol·L-1石杉碱甲处理线虫)处理组线虫在24,48及72 h存活率差异不显著,表明石杉碱甲处理线虫和Bx ACE1基因RNAi处理效果相近。【结论与其他】通过基因沉默和蛋白抑制2种技术阻断Bx ACE1功能均可以提高苦参碱的杀虫效果,RNAi技术能够简单易行地证明若阻断Bx ACE1功能可以提苦参碱的杀虫效果,但dsRNA容易降解等因素限制了该技术在生产实践中的广泛应用。石杉碱甲可以与Bx ACE1稳定结合,鉴定表明石杉碱甲可以提高苦参碱的杀虫效果,具有生防药剂辅剂的开发潜力,可替代基因沉默技术实现抑制Bx ACE1的目的。因此,通过乙酰胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲可阻断Bx ACE1的功能,进而达到提高苦参碱等植物源药剂杀虫效果的目的。ACEIs通过抑制线虫体内的乙酰胆碱酯酶的活性,使线虫体内的胆碱水平短时间内大量提高,从而导致其中毒死亡。该类具有代表性的杀虫剂是有机磷类化合物和氨基甲酸酯类化合物,大多为非可逆型ACEIs。石杉碱甲是来源于石杉科植物蛇足石杉的一种半萜生物碱,是一种高效、高选择性、可逆性的ACEIs。本研究将石杉碱甲引入松材线虫研究,是对该植物源药剂的一个新尝试。

17种植物不同溶剂萃取物乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

采用乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选模型,对采自井冈山及周边地区的17种植物(21个部位)乙醇提取物的不同溶剂萃取物进行乙酰胆碱酯酶抑制活性研究。结果表明:在乙酸乙酯萃取物中,在供试质量浓度在1 mg/mL时,17种植物均具有明显的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中麦冬、东风菜、牡荆表现出较强的抑制活性,抑制率均大于80%,其余大部分植物的抑制率均大于50%。在供试质量浓度在0.025 mg/mL时,只有苍耳表现出较高的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其抑制率为(62.03±0.81)%,其余大部分植物的抑制活性均小于30%。在正丁醇萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,17种植物均具有明显的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中牡荆、牛蒡、一年蓬、紫茉莉、天目藜芦、凹叶厚朴皮的抑制率均大于80%,其余大部分植物的抑制率均大于50%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,仍有部分植物表现出较高的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中臭牡丹、牛蒡、凹叶厚朴皮的抑制率均大于60%。在石油醚萃取物中,在供试质量浓度在1 mg/mL时,大部分植物均具有明显的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中牛蒡、苍耳、一枝黄花的抑制率均大于90%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,仍有部分植物表现出较高的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中抑制率大于70%的有4种,分别是牡荆茎、台湾刘寄奴、荷花玉兰茎、深山含笑。另外,有些植物萃取物不仅对乙酰胆碱酯酶没有抑制活性,反而表现出一定的增强作用。

乙酰胆碱酯酶抑制剂微量筛选模型的比较研究

目的为新药发现阶段乙酰胆碱酯酶(acetylcholinest-erase,AChE)抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法。方法分别以电鳗AChE、大鼠大脑匀浆、蛇毒AChE为酶源,以96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间、显色剂浓度对酶反应速率的影响,确定酶反应最佳条件。在研究样品溶媒DMSO对酶反应的影响和SDS终止酶反应的效果后,最终确定筛选模型运行条件并对492种贵州民族药植物提取物进行筛选研究。结果采用上述3种酶源均成功构建了微量化的AChE抑制剂筛选模型。筛选结果表明,电鳗AChE有较高的筛选灵敏度,而蛇毒AChE的筛选结果则与大鼠大脑匀浆的筛选结果有较好的一致性。结论以上述3种具有代表性的酶源构建的AChE抑制剂微量筛选模型均具备了简便、快速、可靠、经济、灵活的优点。其中电鳗AChE最适合用于新药发现阶段粗提物样品的筛选,而高纯度的蛇毒AChE更适合用于从化合物库中大规模筛选AChE抑制剂。

药用植物中乙酰胆碱酯酶抑制剂研究进展

众多学者对植物中治疗老年性痴呆的化学成分进行了大量研究,发现了一些具有乙酰胆碱酯酶抑制的活性成分,主要为生物碱、萜、黄酮和香豆素等结构类型的化合物。其中生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂如石杉碱甲、加兰他敏等因活性高、选择性强而受到广泛的关注。进一步开展药用植物中乙酰胆碱酯酶抑制活性成分研究,寻找新作用机制的化合物对发现新的治疗老年性痴呆的药用成分有重要意义。

乙酰胆碱酯酶及其抑制剂的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)为一类比较复杂的认知功能障碍性疾病,是引起老年性痴呆和行为功能异常的主要原因.胆碱能假说为AD的治疗提供了第一个理论,即通过加强胆碱能传递速率来预防和治疗.在缓解胆碱能的缺损和改善病人症状方面,乙酰胆碱酯酶的抑制是目前最成功的方法.本文介绍乙酰胆碱酯酶的分子类型、基因结构、三维结构和作用机理,以及乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展.其中酶抑制剂可以按结构类型划分为:石杉碱类化合物、柳珊瑚酸类、毒扁豆碱类、他克林类和E2020组等化合物,并且有几种化合物已经应用于临床,如他克林、石杉碱甲等化合物,并取得良好疗效.随着乙酰胆碱酯酶抑制剂的进一步研究,将会有更多疗效佳、毒性小的药物应用于AD的治疗.

靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术快速筛选黄藤总生物碱中乙酰胆碱酯酶抑制剂

采用靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术(Target molecule affinity-LC-ESI-MS^n)快速筛选黄藤总生物碱中能够抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,共筛选出12种具有潜在抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分,并鉴定了6种成分,分别为黄藤素(Palmatine)、小檗碱(Berberine)、药根碱(Jatrorrhizine)、巴马汀红碱(Palmatrubine)、7,8-二氢-8-羟基小檗碱(7,8-Dihydro-8-hydroxyberberine)、Groenlandicine,结合体外酶学实验对这6种化合物进行了活性验证实验。结果表明,黄藤素抑制活性最强,其抑制作用强于阳性对照药盐酸多奈哌齐,说明黄藤素具有开发成抗阿尔茨海默症药物的潜力。本方法简单、快速、准确地从复杂的中药提取物中筛选出具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,适用于复杂体系中的高通量筛选。

乙酰胆碱酯酶抑制剂研究现状

概述了目前用来治疗阿尔茨海默病的几类乙酰胆碱酯酶抑制剂药物,同时提出了今后开发新药物的方向。

井冈山区63种植物不同溶剂萃取物乙酰胆碱酯酶抑制活性的初步研究

采用乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性筛选模型,对采自井冈山及周边地区的63种植物(67个部位)乙醇提取物的不同溶剂萃取物进行AChE抑制活性研究。结果表明:在乙酸乙酯萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,其中剪刀草和戟叶蓼表现出较强的AChE抑制活性,抑制率均大于90%,其余大部分植物均大于40%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,蛇莓等6种植物的抑制率大于60%,其余大部分植物小于30%;在正丁醇萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,紫萼变种、活血丹、菟丝子、剪刀草、冬青叶山茶叶、地念和车前草的抑制率大于80%,其余大部分植物的抑制率均大于40%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,秀丽四照花等22种植物抑制率均大于50%;在石油醚萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,紫萼变种、紫茎前胡、博落回、杠板归、地念、山橿、藤石松和车前草的抑制率大于90%,供试质量浓度在0.025 mg/mL时,紫茎前胡等17种植物抑制率大于70%。另外,有些植物萃取物不仅对AChE没有抑制活性,反而表现出一定的增强作用。

秦艽花中乙酰胆碱酯酶抑制剂的分离及结构鉴定

目的:从传统中药秦艽花(Gentiana purdomii)中提取分离具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的化合物。方法:秦艽花经乙醇提取、酸碱处理、氯仿萃取后得到浸膏,然后经过反复柱层析分离纯化,并结合1H-NMR和13C-NMR谱图分析鉴定单体化合物的结构,最后通过TLC生物自显影测定分离得到的单体化合物对乙酰胆碱酯酶的检测限。结果及结论:共分离得到2个化合物,运用超导核磁共振(NMR)技术,结合文献中已报道的波谱数据等,确定了它们的结构分别为:secostrychnosin(1)、(4R,4aS)-4-vinyl-4,4a,5,6-tetrahydro-3H-pyrano[3,4-c]pyran-1-one(2)。化合物1和化合物2对乙酰胆碱酯酶的最小抑制剂量分别为:0.5μg和1.0μg。

真菌来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂F01-2076A的研究

利用自建的乙酰胆碱酯酶抑制剂的高通量筛选模型,从大量真菌中筛选到1株阳性菌株F01-2076.该菌株的发酵液经有机溶剂提取、硅胶柱层析及HPLC ODS反相柱层析分离,得到1个活性化合物F01-2076A,该化合物对乙酰胆碱酯酶的IC50为23.4μmol/L.通过对该化合物的紫外、质谱、核磁等理化分析,得知该化合物与已知化合物Altenusin结构相同.

乙酰胆碱酯酶抑制剂定量构效关系的比较分子场分析

乙酸胆碱酯酶抑制剂是治疗早老性痴呆病的主要药物 ,为了给合成提供一些理论依据 ,可以利用 3 D-QSAR中的 Co MFA方法研究乙酰胆碱酯酶抑制剂定量构效关系 .研究表明 ,从 PL S分析的 rcv2 ,r2值看 ,模型有较强的预测能力 ;从立体与静电作用分数比看 ,立体因素占主要地位 。

新型乙酰胆碱酯酶抑制剂5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物的设计、合成与生物活性研究

目的寻找作为乙酰胆碱酯酶抑制剂的具有新化学结构类型的化合物。方法采用分子对接的虚拟筛选方法寻找新型乙酰胆碱酯酶抑制剂,设计了10个5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物。以芳醛、硫脲等为起始原料,通过Biginelli反应生成二氢嘧啶类化合物,再与氯代苯乙酮作用经Hantzsch环合反应制得目标化合物,其结构经红外光谱、质谱、核磁共振氢谱和碳谱确证。采用Ellman方法进行体外抑制乙酰胆碱酯酶活性测试。结果合成了10个5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物,体外抑制乙酰胆碱酯酶活性测试结果显示,所有目标化合物均具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中3个目标化合物在10μmol.L-1时抑制活性均超过50%。结论5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物是潜在的乙酰胆碱酯酶抑制剂。将计算机辅助药物分子设计、有机合成和生物活性测试相结合是发现和设计新型乙酰胆碱酯酶抑制剂的有效途径。

乙酰胆碱酯酶抑制剂他克林和多奈哌齐抗星形孢菌素致凋亡作用的比较

目的 用星形孢菌素 (STS)诱导NG10 8 15和HeLa细胞凋亡 ,观察他克林和多奈哌齐是否具有抗凋亡作用。方法 MTT测定分析细胞损伤状况 ;相差显微镜和Hoechst 33342染色观察细胞及胞核形态 ;DNA提取及琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性梯带 ;免疫印迹分析Bcl 2和Bax的表达水平。结果 经 0 1mmol·L- 1 他克林预处理后 ,由STS诱导的NG10 8 15细胞凋亡受到明显抑制。多奈哌齐预处理无保护作用。免疫印迹表明他克林可显著抑制Bax的表达 ,同时还可促进Bcl 2的表达。多奈哌齐和他克林预处理对STS诱导的HeLa细胞损伤无明显的保护作用。结论他克林的抗凋亡作用与AChE抑制作用似乎没有明显关联。

豆豉中乙酰胆碱酯酶抑制剂的提取与富集工艺研究

研究单因素实验优化豆豉中乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂的提取工艺。粗提液依次采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取,并对石油醚萃取相选用七种不同型号的大孔吸附树脂富集,通过Ellman法对豆豉提取物体外AchE抑制能力进行测定。结果表明,最佳提取工艺为:提取时间60min,乙醇浓度80%,温度70℃,固液比1∶10时,1.0mg/mL的豆豉提取液对AchE的抑制率为52.33%;各有机溶剂的萃取组分在1.0mg/mL时的AchE抑制率分别为:石油醚组分75.52%、二氯甲烷组分61.00%,乙酸乙酯组分70.84%和正丁醇组分26.73%;HZ-801型大孔树脂具有较好的吸附性能,最佳富集工艺为:静态吸附3.0h,吸附饱和的树脂以80%乙醇动态洗脱,洗脱流速1.0mL/min,富集后的洗脱液对AchE抑制率达83.67%。

不同品系蚊虫乙酰胆碱酯酶的活性及其对抑制剂敏感性的研究

目的:本研究根据乙酰硫代胆碱—二硫双硝基苯甲酸法的原理,检测不同品系单个蚊虫的乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性,并且应用残杀威杀虫剂作为抑制剂对各品系蚊虫的敏感性进行探讨;方法:采用微板法;结果:敏感品系和抗性品系蚊虫的AchE活性有较大差别,敏感品系蚊虫的AchE可被一定量的杀虫剂抑制,而抗性品系的AchE则不被抑制;结论:测定单个蚊虫AchE的活性及其对抑制剂的敏感性,能够区分敏感蚊虫和抗性蚊虫,对于抗性蚊虫个体的生物化学检测具有重要意义。

基于固定化酶的乙酰胆碱酯酶抑制剂体外筛选模型的建立

以可重复使用的固定化酶代替游离态酶,建立一种基于比色分析的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂体外筛选新模型.采用以氨基化硅胶为载体固定的AChE优化了实验条件,用AChE抑制剂阳性对照物他克林和毒扁豆碱对该模型进行验证,还对模型技术参数进行评价,并将新模型用于单体化合物及天然产物粗提物AChE抑制活性评价.结果表明,最佳实验条件为:固定化酶用量55μL,底物浓度5 mmol/L,甲醇、乙醇及体积分数不高于6%的二甲基亚砜水溶液均可作为样品溶剂;模型验证及模型技术参数评价结果良好,该模型对AChE抑制剂筛选有较好的特异性和灵敏度,可用于筛选AChE抑制剂.该模型具有适用性强、固定化酶可重复使用及结果可靠等优点,是单体化合物及天然产物粗提物AChE抑制剂活性评价的有效方法.