双位点核酶细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的初步研究

构建针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ区基因（２０２９－３１及２０６３－６５位点）的双位点核酶的真核表达载体，以观察核酶在细胞内对ＨＢＶ基因表达的抑制作用。利用亚克隆技术，从质粒ｐＧＥＭＲｚ１２３切下ＥｃｏＲⅠ－ＢａｍＨⅠ片段，双粘端克隆于真核质粒ｐＢＢＳ２１２中，将该质粒与ｐ１．２Ⅱ（含ＨＢＶ全序列）共转染人肝癌细胞（ＨＨＣＣ）细胞株。结果：①在ＨＨＣＣ细胞中ｐ１．２Ⅱ可表达出ＨＢｓＡｇ及ＨＢｅＡｇ。②该核酶对ＨＢｅＡｇ的合成抑制率达６５％，而对ＨＢｓＡｇ无抑制作用。结论：该双位点核酶可能通过针对ＨＢＶＣ区基因的剪切作用，阻断Ｃ区基因的表达，抑制ＨＢｅＡｇ的合成。

双位点核酶对2.2.15细胞中HBV基因表达抑制作用

目的 :观察针对HBVC区双位点核酶在细胞内阻断C区基因表达的作用。方法 :采用亚克隆技术 ,从pGEM -Rz12 3(含针对HBVC区双位点核酶 )上切下双位点核酶的片段 ,定向克隆于真核表达载体pBBS2 12中。利用lipofectamine介导 ,将重组质粒pBBS2 12 -Rz及pBBS2 12转染 2 2 15细胞中 ,采用打点杂交技术观察核酶的表达 ,采用ELISA、免疫荧光、免疫组化、图象分析法、Westernblot分析HBe/HBcAg及HBsAg的表达。结果 :转染的 2 2 15细胞经潮霉素B和G418筛选 2周后 ,打点杂交证实可表达针对HBVC区双位点核酶。ELISA方法检测发现核酶抑制HBeAg表达 48 6 % ,用免疫荧光、免疫组化、图象分析法、Westernblot分析证实核酶可抑制HBV细胞内表达。结论 :该双位点核酶通过针对HBVC区基因的剪切作用 ,阻断C区基因表达 。