抗地高辛人源小分子抗体的获取

目的 从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗地高辛抗体，并构建双体抗体。方法 以固相化的地高辛对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选，3～4轮后挑取克隆用酶联免疫吸附测定方法鉴定其特异性，对抗地高辛阳性抗体克隆进行DNA指纹分析及测序分析。选取活性好的克隆进行改造，构建双体抗体。结果 在抗体库的筛选过程中可见到明显的富集现象，获得了4株可与地高辛特异性结合的人源抗体，经DNA指纹分析及测序分析证明为不同克隆基因，阳性克隆的可变区基因轻链均属于入第一亚群，重链分别属于第三和第四亚群。选取4号克隆进行基因改造，构建双体抗体表达载体，获得了活性较好的双体抗体。结论利用噬菌体抗体技术获得了人源性抗地高辛抗体，并改造成应用前景较好的双体抗体，可能为临床诊断及治疗洋地黄类药物中毒提供具有实用价值的人源抗体。

从大容量噬菌体抗体库获取人源性抗角蛋白抗体ScFv及Diabody的构建

目的从大容量噬菌体抗体库筛选人源性抗角蛋白抗体,并构建双体抗体(Diabody)。方法以固相化的角蛋白对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选,经3～4轮筛选后,挑取克隆,ELISA法鉴定其特异性,并对部分抗角蛋白阳性抗体克隆基因进行DNA序列分析。选取活性好的克隆基因进行改造,构建Diabody表达载体。结果在抗体库的筛选过程中可见明显的富集现象,获得了29株可与角蛋白特异性结合的人源单链抗体,选取4个克隆基因进行序列分析,结果表明,4个克隆的轻链基因均属于λ轻链第1亚群,1号和8号克隆的重链基因属于人IgG第2亚群,6号和29号克隆分别属于第1和第3亚群。从表达抗角蛋白抗体的集落中挑选一个进行基因改造,构建的Diabody表达载体所表达的Diabody活性较高。结论利用噬菌体抗体技术获得了人源性抗角蛋白抗体,并改造成应用前景较好的Diabody,为开发银屑病治疗性抗体奠定了基础。