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双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD在谷氨酸棒杆菌JNR中的功能
被引量:
2
1
作者
李静
徐美娟
+6 位作者
舒群峰
赵雅雯
唐蜜
张显
杨套伟
许正宏
饶志明
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期2206-2217,共12页
【目的】通过改造谷氨酸棒杆菌JNR中双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD,减弱尿苷酰去除酶的活性,增强NH4+的转运和利用,提高L-精氨酸的合成。【方法】本文对来源于谷氨酸棒杆菌的突变菌株JNR中的双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD进行整合突变,采...
【目的】通过改造谷氨酸棒杆菌JNR中双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD,减弱尿苷酰去除酶的活性,增强NH4+的转运和利用,提高L-精氨酸的合成。【方法】本文对来源于谷氨酸棒杆菌的突变菌株JNR中的双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD进行整合突变,采用同源重组的方法将H414和D415位点突变为两个丙氨酸AA,在此菌株的基础上过量表达PII蛋白GlnK,并对其进行尿苷酰化研究,离子色谱检测摇瓶发酵过程中NH4+的浓度,并对最终的改造菌株进行连续流加发酵分析。【结果】该双功能尿苷酰转移/去除酶在谷氨酸棒杆菌中成功进行整合突变,有效减弱了尿苷酰去除酶的活性;同时过表达PII蛋白GlnK,其酰基化程度明显增强。摇瓶发酵结果表明菌株L4消耗NH4+增加,L-精氨酸产量为36.2±1.2 g/L,比对照菌株L3高出22.7%。5-L发酵罐实验结果显示改造菌株L4的L-精氨酸的产量为52.2 g/L,较野生型菌株L0提高了25.3%。【结论】谷氨酸棒杆菌合成L-精氨酸的过程中氮源是必不可少的。减弱GlnD尿苷酰去除酶的活性后,胞内尿苷酰化的GlnK-UMP增加,GlnK-UMP与氮转录调控因子AmtR结合,转运至胞内的NH4+浓度提高,促使L-精氨酸产量显著提高。
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关键词
谷氨酸棒杆菌JNR
双功能尿苷酰转移/去除酶glnd
NH4+
L-精氨酸
整合突变
原文传递
题名
双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD在谷氨酸棒杆菌JNR中的功能
被引量:
2
1
作者
李静
徐美娟
舒群峰
赵雅雯
唐蜜
张显
杨套伟
许正宏
饶志明
机构
江南大学生物工程学院
江南大学(如皋)食品生物技术研究所
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期2206-2217,共12页
基金
国家自然科学基金(31770058,31570085)
江苏省自然科学基金(BK20181205)
+2 种基金
教育部重点研究项目(113033A)
中央高校基本科研业务费专项资金资助(JUSRP51708A)
国家双一流轻工业技术与工程一级学科计划(LITE2018-06)~~
文摘
【目的】通过改造谷氨酸棒杆菌JNR中双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD,减弱尿苷酰去除酶的活性,增强NH4+的转运和利用,提高L-精氨酸的合成。【方法】本文对来源于谷氨酸棒杆菌的突变菌株JNR中的双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD进行整合突变,采用同源重组的方法将H414和D415位点突变为两个丙氨酸AA,在此菌株的基础上过量表达PII蛋白GlnK,并对其进行尿苷酰化研究,离子色谱检测摇瓶发酵过程中NH4+的浓度,并对最终的改造菌株进行连续流加发酵分析。【结果】该双功能尿苷酰转移/去除酶在谷氨酸棒杆菌中成功进行整合突变,有效减弱了尿苷酰去除酶的活性;同时过表达PII蛋白GlnK,其酰基化程度明显增强。摇瓶发酵结果表明菌株L4消耗NH4+增加,L-精氨酸产量为36.2±1.2 g/L,比对照菌株L3高出22.7%。5-L发酵罐实验结果显示改造菌株L4的L-精氨酸的产量为52.2 g/L,较野生型菌株L0提高了25.3%。【结论】谷氨酸棒杆菌合成L-精氨酸的过程中氮源是必不可少的。减弱GlnD尿苷酰去除酶的活性后,胞内尿苷酰化的GlnK-UMP增加,GlnK-UMP与氮转录调控因子AmtR结合,转运至胞内的NH4+浓度提高,促使L-精氨酸产量显著提高。
关键词
谷氨酸棒杆菌JNR
双功能尿苷酰转移/去除酶glnd
NH4+
L-精氨酸
整合突变
Keywords
Corynebacterium glutamicum JNR
uridylyltransferase and uridylyl-removing enzyme
glnd
NH4+
L-arginine
integration mutation
分类号
TS2 [轻工技术与工程—食品科学与工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD在谷氨酸棒杆菌JNR中的功能
李静
徐美娟
舒群峰
赵雅雯
唐蜜
张显
杨套伟
许正宏
饶志明
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
原文传递
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