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通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究 被引量:6
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作者 王勇 刘勤 +3 位作者 倪勇 魏泓 孙新民 赵永聚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第3期159-162,F0010,共5页
目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,... 目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。 展开更多
关键词 双原核显微注射 转基因技术 小鼠 动物模型 医学实验 胚胎发育
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双原核注射提高转基因的整合效率
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作者 卢一凡 邓继先 《Developmental and Reproductive Biology》 2001年第2期15-19,共5页
本文提出了受精卵双原核注射方法,利用共注射具有部分同源区的两个片段-鼠乳消酸蛋白基因(WAP)调控序列控制下的人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)(Fig.l),通过PCR和Southern Blot检测了8细胞期外源基因的整合(Fig.2)。结果表明,与... 本文提出了受精卵双原核注射方法,利用共注射具有部分同源区的两个片段-鼠乳消酸蛋白基因(WAP)调控序列控制下的人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)(Fig.l),通过PCR和Southern Blot检测了8细胞期外源基因的整合(Fig.2)。结果表明,与单一原核注射相比较。双原核注射转基因的整合率由单一原核注射的48.68%提高至62.65%(T able1)。这为转基因动物建立,提高外源基因整合率提供了新途径。 展开更多
关键词 动物 转基因 整合效率 双原核注射
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原核真核双表达加强型绿色荧光蛋白质粒的构建 被引量:9
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作者 张晓明 焦新安 +5 位作者 潘志明 张小荣 马丽 顾健 郭荣 刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 2003年第1期1-4,9,共5页
将原核启动子 Ptrc和加强型绿色荧光蛋白 ( EGFP)基因从 EGFP原核表达质粒 p YA3 3 3 4-EGFP上切下 ,然后将其插入至真核表达质粒 p VAX1真核启动子 Pcmv的下游 ,构建成具有真核和原核启动子的双表达杂合质粒 p VAXD-EGFP,其长度为 3 82... 将原核启动子 Ptrc和加强型绿色荧光蛋白 ( EGFP)基因从 EGFP原核表达质粒 p YA3 3 3 4-EGFP上切下 ,然后将其插入至真核表达质粒 p VAX1真核启动子 Pcmv的下游 ,构建成具有真核和原核启动子的双表达杂合质粒 p VAXD-EGFP,其长度为 3 82 3 bp。将 p VAXD-EGFP分别转化鼠伤寒沙门氏菌 X45 5 0和转染 COS-7细胞 ,应用流式细胞术、可见光谱扫描、SDS-PAGE测定 EGFP原核表达 ;应用荧光显微镜观察 EGFP在 COS-7细胞内的表达。重组鼠伤寒沙门氏菌 X45 5 0 ( p VAXD-EGFP)表达 EGFP的量与仅以原核方式表达 EGFP的 X45 5 0 ( p YA3 3 3 4-EGFP)相当 ;将质粒p VAXD-EGFP转染 COS-7细胞 ,EGFP可在 COS-7细胞核和胞浆表达 ,在荧光显微镜下发出强烈荧光。结果表明 :不仅成功地构建原核、真核表达集中于同一质粒的新型质粒 p VAXD-EGFP,而且原核、真核目的蛋白表达量达到很高水平 。 展开更多
关键词 沙门氏菌 原核真核表达质粒系统 加强型绿色荧光蛋白 重组细菌疫苗 DNA疫苗 运输载体
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晚裂胚胎性染色体及18号染色体非整倍体分析 被引量:4
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作者 石洁 杨清秀 +1 位作者 罗海宁 张云山 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2012年第4期265-267,I0002,共4页
目的:分析晚裂胚胎性染色体及18号染色体数目异常情况。方法:应用荧光原位杂交技术检测晚裂胚胎X、Y及18号染色体的非整倍体情况,并与低评分的双原核(2PN)胚胎进行比较。结果:共收集85个胚胎,其中晚裂胚胎45个(不考虑形态学评分),成功固... 目的:分析晚裂胚胎性染色体及18号染色体数目异常情况。方法:应用荧光原位杂交技术检测晚裂胚胎X、Y及18号染色体的非整倍体情况,并与低评分的双原核(2PN)胚胎进行比较。结果:共收集85个胚胎,其中晚裂胚胎45个(不考虑形态学评分),成功固定269个核;低形态学评分的2PN胚胎40个,成功固定243个核,用CEPX/Y、CEP18染色体探针对85个胚胎共512个核进行荧光原位杂交。晚裂胚胎组的染色体数目异常率为45.7%,其中性染色体异常率为34.5%,18号染色体异常率为38%;2PN胚胎组的染色体异常率为48.5%,其中性染色体异常率为32%,18号染色体异常率为39%。2组性染色体和18号染色体的异常率差异均无统计学意义。结论:晚裂胚胎性染色体及18号染色体数目有较高的异常发生率,与低形态学评分的2PN胚胎一样,均不适合宫腔内移植。 展开更多
关键词 原位杂交 荧光 性染色体 染色体 18对 非整倍性 双原核胚胎
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Dependence of Isoscaling Parameters on Nucleon-Nucleon Cross Section and Momentum-Dependent Interaction
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作者 邢永忠 郝焕锋 +2 位作者 刘晓斌 方玉田 刘保义 《Chinese Physics Letters》 SCIE CAS CSCD 2007年第8期2223-2226,共4页
Inltuences of the isospin dependence of the in-medium nucleon-nucleon cross section and the momentum-dependent interaction (MDI) on the isotope scaling are investigated by using the isospin-dependent quantum molecul... Inltuences of the isospin dependence of the in-medium nucleon-nucleon cross section and the momentum-dependent interaction (MDI) on the isotope scaling are investigated by using the isospin-dependent quantum molecular dynamics model (IQMD). The results show that both the isospin dependence of the in-medium nucleon-nucleon cross section and the momentum-dependent interaction affect the isoscaling parameters appreciably and indepen- dently. The inltuence caused by the isospin dependence of two-body collision is relatively larger than that from the MDI in the mean tield. Aiming at exploring the implication of isoscaling behaviour, which the statistical equilibrium in the reaction is reached, the statistical properties in the mass distribution and the kinetic energy distribution of the fragments simulated by IQMD are presented. 展开更多
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杂交猪IFN-γ和IL-18双基因在Rosetta TM大肠杆菌的表达 被引量:1
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作者 王金良 孙翠平 +4 位作者 谢金文 祖立闯 魏凤 董炳梅 沈志强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期689-692,共4页
依据已测的杂交猪IFN-γ、IL-18基因的核苷酸序列,设计4条引物,通过重叠PCR的方法将2个基因进行连接,并在两个基因连接处引入45bp的连接肽的核苷酸序列;融合基因通过pEGX-4T-1载体及RosettaTM表达菌实现了原核表达,蛋白可被GST标签多抗... 依据已测的杂交猪IFN-γ、IL-18基因的核苷酸序列,设计4条引物,通过重叠PCR的方法将2个基因进行连接,并在两个基因连接处引入45bp的连接肽的核苷酸序列;融合基因通过pEGX-4T-1载体及RosettaTM表达菌实现了原核表达,蛋白可被GST标签多抗识别。本研究的进行,为IFN-γ/IL-18融合蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 IFN-Γ基因 IL-18基因 基因 原核表达 杂交猪
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口服避孕药预处理在卵巢功能储备良好而前次IVF失败患者中的应用效果 被引量:3
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作者 王雪 张翠莲 +3 位作者 张少娣 郭海彬 耿嘉瑄 谷保霞 《生殖与避孕》 CAS CSCD 2012年第12期852-856,共5页
目的:评估口服避孕药(OC)预处理在卵巢储备良好、前次IVF失败患者中的应用效果。方法:回顾分析131例卵巢储备功能良好、前次IVF常规黄体中期降调节长方案失败再次行助孕治疗的患者资料,其中口服避孕药预处理后长方案治疗52例为研究组,... 目的:评估口服避孕药(OC)预处理在卵巢储备良好、前次IVF失败患者中的应用效果。方法:回顾分析131例卵巢储备功能良好、前次IVF常规黄体中期降调节长方案失败再次行助孕治疗的患者资料,其中口服避孕药预处理后长方案治疗52例为研究组,黄体中期长方案治疗79例为对照组。结果:研究组降调节后LH值明显低于对照组,双原核(2PN)率和卵裂率明显高于对照组,可利用胚胎数明显高于对照组(P<0.05);但Gn使用时间、Gn使用量、获卵数、MII卵数、移植日子宫内膜厚度、生化及临床妊娠率、因OHSS倾向取消移植率与对照组比较均无明显统计学差异(P>0.05)。结论:在有自发排卵的卵巢储备功能良好、前次IVF常规长方案失败、再次选用长方案超促排卵(COH)治疗的患者中,使用OC预处理能够降低降调节后LH值,改善正常受精率,增加可利用胚胎数,是值得推荐的治疗方案。 展开更多
关键词 口服避孕药(OC) 预处理 长方案 体外受精-胚胎移植(IVF-ET) 促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa) 双原核(2PN)率
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体外受精-胚胎移植技术中2PN及多PN发生率分析
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作者 蒲琳 曾湘晖 +2 位作者 李晓娜 潘迪 张振刚 《青海医药杂志》 CAS 2021年第11期14-16,共3页
目的:通过比较体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)与卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)两种不同受精方式下出现双原核(2PN)、多原核(多PN)的发生率,进一步探讨辅助生殖技术(ART)提高临床妊娠率的方法。方法:收集2018年6月—2019年3月我院生殖中... 目的:通过比较体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)与卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)两种不同受精方式下出现双原核(2PN)、多原核(多PN)的发生率,进一步探讨辅助生殖技术(ART)提高临床妊娠率的方法。方法:收集2018年6月—2019年3月我院生殖中心行ART助孕患者550例作为观察对象。按不同受精方式分为IVF-ET组和ICSI组,其中IVF-ET组443例,ICSI组107例。比较分析两组患者受精后出现的2PN及多PN的发生率。结果:IVF-ET组及ICSI组2PN发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组多PN发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在进行ART助孕技术过程中,IVF-ET受精方式下多PN发生率偏高,患者可以考虑下一周期助孕时改用ICSI技术,可一定程度降低异常受精(多PN)发生率,有效提高行ART技术后的妊娠率。 展开更多
关键词 体外受精-胎植胚移 卵胞浆内单精子 显微注射 双原核 原核
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