异体异位发育睾丸组织的蛋白质组图谱构建及差异蛋白分析

目的应用蛋白质组学实验方法对在异体异位生长发育的新生小鼠睾丸组织进行差异蛋白分析,从而对睾丸组织体外移植模型用于生精细胞发育研究的可行性提供进一步的理论依据。方法以新生小鼠睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植,移植8周后收集移植物组织,采用双向凝胶电泳(2-DE)分离移植物组织总蛋白,同时分离8周正常小鼠睾丸组织总蛋白作对比分析,运用Im ageM aster 2D E lite 5.0图像分析软件识别移植物组织与正常组织差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALD I-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点。结果正常睾丸组织和移植物组织双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为(1 326±15)个和(1 561±20)个,3次重复实验的蛋白质点位置重复性较好。通过比较两者的双向凝胶电泳图谱,得到表达差异量较大的蛋白质点21个。选取6个仅在正常睾丸组织中有表达的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定出的6种蛋白质,除血红蛋白α1链(Hbα-α1)外,其他5种蛋白均为在小鼠睾丸中有较高表达的蛋白质,包括A激酶锚定蛋白结合的精子蛋白(ASP)、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、精子蛋白(Sp17)、天门冬酰胺酶样蛋白(ASRGL1)和过氧化物氧化还原因子4(Prdx4)。结论在本实验中,从异体异位生长发育成熟的新生小鼠睾丸组织中检测到5种在睾丸中特异性高表达蛋白质的缺失,这些蛋白质主要在精子运动、精子顶体形成以及精子的受精等功能中发挥作用。

胆囊癌差异蛋白质组学分析

目的运用蛋白质组学经典技术,双向凝胶电泳、质谱鉴定及生物信息学分析在胆囊癌组、正常胆囊对照组中寻找差异蛋白,发现和鉴定胆囊癌相关的肿瘤标志物及潜在的治疗靶点。方法标本分两组:胆囊癌组-胆囊癌组标本59例;正常对照组-胆囊癌癌旁组织标本59例。组织样品通过洗涤、裂解、离心收集总蛋白样本,分装冻存。经过第一向等点聚焦、第二向SDS-PAGE电泳,凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,用Gs-800光密度仪获得凝胶图像。经PD-Quest凝胶图像分析软件进行分析后,找出有差异的蛋白点。通过蛋白指纹谱鉴定(PMF),基质辅助激光解吸附质谱技术(MALDI-TOF)获得差异蛋白碎片的二级质谱,利用Biotools软件采集肽碎片质荷比信息;利用Mascot搜索引擎对数据库进行检索,鉴定差异蛋白质的氨基酸序列,获得相应特异蛋白质信息。结果发现66个差异表达蛋白。其中在胆囊癌中上调表达蛋白21个,下调表达蛋白45个。21个差异蛋白得分大于56,在胆囊癌中上调表达的10个,下调表达的11个。主要包括膜联蛋白、膜突蛋白、热休克蛋白、波形蛋白、视黄醛脱氢酶1、半乳凝素等。结论上述蛋白可能在肿瘤的发生发展机制中起着重要的作用,是诊断、治疗的潜在靶点,值得后续进一步研究。

类风湿性关节炎患者关节滑膜组织蛋白质组学

背景:已有研究表明滑膜炎持久反复发作,最终导致关节内软骨和骨的破坏,国内关于类风湿性关节炎滑膜组织的蛋白质组学研究报道较少。目的:通过比较类风湿性关节炎患者和无关节滑膜损伤患者滑膜组织蛋白质表达的差异,探讨类风湿性关节炎可能的发病机制,寻找类风湿性关节炎致病相关蛋白。方法:选取6例无关节滑膜损伤患者及6例活动期类风湿性关节炎患者行关节镜手术得到的滑膜组织,提取总蛋白质后进行双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,PDQUEST软件分析,对差异蛋白质点采用基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行鉴定,并用Mascot软件在SwissProt和NCBInr数据库中进行同源比较和分析鉴定。结果与结论:建立了类风湿性关节炎组及对照组滑膜组织双向凝胶电泳图谱,获得130个差异在2倍以上的蛋白质点数,选取其中分辨清楚的39个点进行鉴定,初步鉴定出29个蛋白质,其中21个蛋白质点在类风湿性关节炎组中表达上调,8个表达下调,其功能涉及功能代谢、细胞信号传导、抗氧化、分子伴侣等。结果表明类风湿关节炎滑膜病变是一个多种蛋白质参与的复杂过程,这些表达差异蛋白质可能是类风湿性关节炎发病的内在因素。

中国实验小型猪冠心病模型的心肌组织蛋白质组学研究

目的研究中国小型猪冠心病模型心肌组织蛋白表达谱的改变情况。方法在建立中国小型猪冠心病模型基础上,应用双向电泳分离各组小型猪心肌组织总蛋白;通过图谱分析软件和基质辅助激光解析-飞行时间质谱技术分别进行差异比较和质谱鉴定及数据比对。结果小型猪冠心病模型组心肌组织与正常组相比共有14个差异蛋白点:13个上调点,1个特异表达点。这些差异点经胶内酶解、MAL-DI-TOF质谱分析及MASCOT搜索引擎检索,鉴定出HSPA8(Hsc70)、apolipoprotein A-IV(apoA-IV)、albumin及desmin4种蛋白。结论初步发现的差异蛋白可能与冠心病的发生、发展相关,但是还需要通过其它方法做进一步验证。

LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的定量蛋白质组学研究

间质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视.为寻找与鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)发生发展相关的特异性间质蛋白,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质,荧光差异双向凝胶电泳(fluorescent two-dimensional difference gel electrophoresis 2-D,DIGE)结合质谱技术分离鉴定间质相关蛋白.Westernblot及免疫组织化学技术验证了其中3个差异蛋白(CapG、L-plastin和S100A9),证实了2D-DIGE结果的可靠性.建立了LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的荧光差异蛋白表达图谱,高通量筛选与肿瘤发生相关的间质蛋白,共得到34个有统计学意义的蛋白质点,质谱鉴定得到20个差异蛋白.研究结果提示:这些差异表达的蛋白质将有助于阐明鼻咽癌细胞和周围间质的关系.对间质蛋白功能的进一步研究,将有助于解析间质在肿瘤发生中的作用机制,并为从间质途径寻找肿瘤治疗靶标提供新思路.

胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的筛选及鉴定

目的筛选胎衣不下奶牛胎盘组织中的差异表达蛋白,并对其鉴定,为研究奶牛胎衣不下的发生机理和治疗提供依据。方法收集胎衣不下奶牛及胎衣正常排出奶牛胎盘组织各5份,应用双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamidegel electrophoresis,2D-PAGE)技术对胎盘组织中蛋白进行分离,银染显色后获得差异表达蛋白点,并采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术对其进行鉴定。结果与胎衣正常排出组相比,胎衣不下组奶牛胎牛胎盘中差异表达蛋白点共240个,其中表达上调蛋白点212个,表达下调蛋白点28个;母体胎盘中差异表达蛋白点共214个,其中表达上调蛋白点134个,表达下调蛋白点80个,共鉴定出5种差异表达蛋白。与胎衣正常排出组相比,胎衣不下组奶牛胎牛胎盘中牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、α-烯醇化酶(Alpha enolase)表达下调,谷胱甘肽转移酶(glutathione transferases,GST)表达上调;母体胎盘中膜联蛋白V(Annexin V)、Alpha enolase和膜联蛋白A2(Annexin A2)表达均上调。结论发现的5种差异表达蛋白可能与奶牛胎衣不下的发生发展相关。

先天性弓形虫感染胎鼠脑组织蛋白差异分析

目的检测先天性弓形虫感染胎鼠脑组织差异蛋白并分析其功能,为先天性弓形虫病的发生机制研究提供理论基础。方法选取9~10周龄BALB/c孕鼠20只,随机分为正常对照组和感染组,每组10只。于妊娠第10d,感染组每只小鼠腹腔注射经胰酶消化的弓形虫速殖子40个/0.2ml;正常对照组腹腔注射无菌PBS溶液0.2ml/只(0.01mol/L,pH 7.3)。于妊娠第20d处死孕鼠,取胎鼠脑组织,采用Bradford法测定蛋白含量;采用双向凝胶电泳分离胎鼠脑组织蛋白,运用ImageMaster 2D软件分析差异蛋白,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析差异蛋白点的肽指纹谱(PMF),运用Mascot软件在SWISS-PROT数据库中对差异蛋白进行比较与评判,运用David软件对差异蛋白进行生物信息学分析。结果两组胎鼠脑组织均分离出约500个蛋白点,经蛋白质胶图分析鉴定出显著差异蛋白点15个,分子质量单位(Mr)多分布于(8~48)×103之间,等电点(pI)在3~10之间。在弓形虫感染胎鼠脑组织低表达的15个差异蛋白点经过鉴定和功能分析,主要是以下6种:结蛋白,肌动蛋白,血清白蛋白,葡萄糖调节蛋白,蛋白质二硫键异构酶和膜联蛋白。结论弓形虫感染胎鼠脑组织中有6种差异蛋白低表达,弓形虫可能通过降低这些蛋白的表达量来影响胎鼠脑组织的正常结构、物质转运和调节功能等,从而引发先天性弓形虫脑病。