双向电泳联合免疫印迹技术分析日本血吸虫成虫可溶性抗原

目的建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳(2D-E)结合免疫印迹技术(Western blotting),获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱,应用PDQuest8.0双向电泳图像分析软件对图像进行分析比对,鉴别特异性抗原。结果血吸虫成虫可溶性蛋白经双向电泳后,考马斯亮蓝G250染色,电泳图谱显示约152个主要蛋白斑点。分子量(Mr)分布约为14～114kD;等电点(pI)主要集中在4.9～9.5。进一步的Western blotting鉴定结果显示:实验组图像可见的抗原抗体反应点数目约57个,对照组为0。结论双向电泳联合免疫印迹技术是成功分析蛋白质组学的技术关键,该技术为寻找日本血吸虫特异性抗原开辟了新途径。

双向电泳结合免疫印迹技术分析蜉蝣变应原

目的用双向电泳和免疫印迹技术(Western blot)对蜉蝣提取液蛋白质组分进行分析,寻找蜉蝣主要致敏蛋白质。方法提取蜉蝣总蛋白,应用双向电泳结合免疫印迹技术,获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱,免疫印迹一抗为蜉蝣过敏患者血清,二抗为鼠抗人IgE抗体。结果蜉蝣蛋白质提取液经双向电泳后,考马斯亮蓝染色,电泳图谱显示约805个主要蛋白点。相对分子质量约为20 000~130 000;等电点主要集中在4.0~9.5。免疫印迹结果显示,阳性患者组与对照组的差异蛋白点数约为27个。结论双向电泳联合免疫印迹技术对蜉蝣提取液蛋白质组分分析具有实用价值,并可进一步用于变应原致敏组分的研究。

双向电泳-免疫印迹技术分离白血病细胞核基质蛋白的初步研究

目的 :探讨急性髓系细胞白血病核基质蛋白 (NMPs)的变化。方法 :高盐抽提法制备白血病细胞NMPs ,免疫动物制备多克隆抗体 ,以此作为免疫学探针对正常WBC和白血病细胞NMPs进行双向电泳 ( 2DE)_免疫印迹 (Westernblot)检测。结果 :在急性髓系细胞白血病细胞和正常WBCNMPs之间 ,有 3个蛋白质表现出质和量上的差异。结论

肝片吸虫18.6kD蛋白抗原双向电泳及免疫印迹分析

从分子水平上研究了肝片吸虫的抗原组分 ,用制备性 SDS- PAGE纯化 ES18.6 k D蛋白抗原 ,并用它成功制备了单因子兔抗血清 ,用这种抗血清来分析肝片吸虫各部分抗原 ,证实各部分抗原的 18.6 k D多肽具有相同的抗原决定簇 ,而且这种抗原决定簇不存在于其它分子量的多肽中。体抗原 (BA)和分泌排泄抗原 (ES)的双向电泳(Two- dimention Electrophoresis,2 - D)分析研究表明 ,肝片吸虫同一种分子量的蛋白质大多由多种等电点不同的多肽组成 ;同时也显示了体抗原和分泌 -排泄抗原分子量相同的蛋白质所包含的多肽数量和性质是有差异的。

快速检测法与酶联免疫法(ELISA)、免疫印迹法(WB)的符合性探讨

目的探讨快速检测与酶联免疫、免疫印迹法的符合性。方法选取在本中心实验室自2008—2011年的初筛阳性并上送省疾病预防控制中心确证实验室确证阳性的样本,分析其三种方法的符合性,为艾滋病的防控提供参考。结果快速与ELISA阳性符合性较高,达98.9%;快速与WB阳性符合性92.2%,ELISA与WB阳性符合性93.3%,快速、ELISA与WB的符合性相近。结论在一些尚未具备建立筛查实验室的地方建立快检点是非常有必要的,也是可行的,因为快速检测与ELISA检测阳性符合性较高。

同位素标记结合免疫印迹-化学发光法鉴定小鼠神经元磷酸化蛋白质组

创建一套简单、实用、灵敏、高效的分析鉴定磷酸化蛋白质组的优化方案。采用同位素标记、双向电泳、放射自显影等技术建立小鼠神经元磷酸化蛋白质组图谱,再用免疫印迹-持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元磷酸化蛋白质——PI3Kr3、MEK1、PKCα。结果显示三种磷酸化蛋白质在双向电泳放射自显影图谱和双向电泳免疫印迹-化学发光图谱上的斑点基本匹配,提示本研究建立的以同位素标记和免疫印迹-化学发光法为核心的分析鉴定磷酸化蛋白质组的一整套优化方案灵敏度高、特异性强。

应用双向电泳和免疫印迹技术分析软叶针葵花粉变应原

目的：采用双向电泳和免疫印迹技术对软叶针葵花粉提取液蛋白质组分进行分析,寻找软叶针葵花粉的主要变应原。方法：提取软叶针葵花粉变应原,应用双向电泳（2-DE）结合免疫印迹技术,获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱。结果：软叶针葵花粉蛋白提取液经双向电泳后,用考马斯亮蓝染色,得到的电泳图显示约有601个主要蛋白斑点。分子量（Mr）分布约20～130kD;等电点（pI）主要集中在4.0～8.0。免疫印迹分析结果显示,阳性组与对照组的差异蛋白点数约为19个。结论：双向电泳联合免疫印迹技术对软叶针葵花粉提取液蛋白质组分分析,可寻找到其主要变应原,并可进一步用于变应原致敏组分的研究。

弓形虫强免疫原性排泄分泌抗原组分的鉴定

旨在筛选弓形虫排泄分泌抗原(ESA)中具有强抗原性的蛋白质组分。通过双向电泳和免疫印迹技术,对弓形虫ESA进行分析。结果共筛选到了18个免疫显性蛋白质点,并成功对其中6个具有代表性的蛋白质点进行了质谱鉴定,显示为微线体蛋白1、微线体蛋白4、包囊基质蛋白和14-3-3蛋白,共4种。本研究进一步为弓形虫病的诊断和疫苗研究提供新的实验依据。

国产2种静注人免疫球蛋白大肠杆菌O157∶H7的IgG抗体谱比较研究

目的利用本研究室建立的抗体谱检测方法,考察比较我国2家血液制品企业市售静注人免疫球蛋白p H4(IVIG)的抗体谱情况。方法以大肠杆菌O157:H7总蛋白为抗原,利用蛋白质双向电泳技术结合蛋白免疫印迹法进行检测。结果经本实验获得了较高质量的IVIG制品Ig G抗体谱图,厂家A IVIG制品中含有针对大肠杆菌O157:H7的Ig G抗体202个,厂家B IVIG制品含有针对大肠杆菌O157:H7的Ig G抗体130个,且二者识别的抗原种类不完全相同。结论检测的2个厂家IVIG制品中均具有针对大肠杆菌O157:H7的广谱抗体,但2者抗体谱不一致,反映出2个厂家IVIG制品的独特性。

免疫蛋白质组学及其在病原菌研究中的应用

以双向电泳、生物质谱及生物信息学为主要技术支撑的蛋白质组学与传统免疫印迹技术相结合,产生了一门新兴的学科——免疫蛋白质组学。本文主要从免疫蛋白质组学的产生、技术体系及在病原菌免疫原性蛋白质研究中的应用等3个方面对其进行综述。

三种幽门螺旋杆菌检测方法对临床消化道相关疾病的诊断价值评估

目的评价三种幽门螺旋杆菌检测方法对临床消化道相关疾病的临床应用价值。方法对2017年1~12月于北京地坛医院就诊的177例患者,采用C-尿素呼气试验(13C-UBT)法检测幽门螺旋杆菌,同时抽取静脉血采用快速胶体金法及免疫印迹法检测幽门螺旋杆菌,以13C-UBT检测方法作为金标准,对胶体金法和免疫印迹法的检测结果进行对比分析。结果 177例就诊患者13C-UBT检测阳性106例,阴性71例。其中106例13CUBT阳性患者中快速胶体金法检测阳性100例,阴性6例。其敏感度为94.3%,特异性为83.1%;阳性预测值为89.3%,阴性预测值为90.8%。106例13C-UBT阳性患者中免疫印迹法检测阳性102例,阴性4例。其敏感度为96.2%,特异性为84.5%;阳性预测值为90.3%,阴性预测值为93.8%。两种方法差异无统计学意义(P>0.05)。147例不同消化道疾病患者采用免疫印迹法检测,其中Ⅰ型66例(44.9%)、Ⅱ型20例(13.61%),两种分型差异有高度统计学意义(χ~2=34.778,P=0.000)。胃十二指肠溃疡、慢性胃炎患者幽门螺旋杆菌Ⅰ型、Ⅱ型比较,差异有统计学意义(P<0.05);反流性食管炎患者幽门螺旋杆菌Ⅰ型、Ⅱ型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论快速胶体金检测法与幽门螺旋杆菌现症感染高度相关,适用于幽门螺旋杆菌感染的初筛,而免疫印迹法可以进行毒力分型,更适用于临床药物治疗的选择。

草鱼过敏原蛋白质的分离及其免疫学特性初步鉴定

目的对草鱼过敏原蛋白质组分进行分离和分析,对其致敏蛋白质组分进行免疫学特性鉴定。方法采用超速离心法提取草鱼的总蛋白,双向电泳(2D)分离,银染法分析其总蛋白组成。收集草鱼过敏病人血清,采用免疫印迹(WB)法鉴定其粗提液蛋白质的免疫学特性。结果双向电泳图谱可分辨出草鱼蛋白质斑点数约388个,蛋白质相对分子质量在15~124kDa范围内,主要分布在15~55kDa之间;等电点约在pH 3~10范围内,主要分布在pH 5~8。免疫印迹结果显示草鱼中与病人血清IgE结合的蛋白质有22个,蛋白质相对分子质量在20~55kDa之间;等电点主要分布在pH 5~9。结论本研究成功构建了较为完整的草鱼蛋白质双向电泳图谱,为建立草鱼蛋白质组学数据库及其过敏原蛋白质组学数据库奠定了一定的基础,同时也为草鱼过敏的诊断和治疗提供了依据。

胶体金法与酶联免疫吸附法在AIDS高危人群HIV抗体筛查中的应用价值比较

目的比较胶体金法与酶联免疫吸附法(ELISA)在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)高危人群人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体筛查中的应用价值。方法选取2019年1月至2020年8月安阳市中心血站接收的144例AIDS高危者作为研究对象。采用蛋白印迹检测法明确其病情。采用ELISA、胶体金法检测HIV抗体。以蛋白印迹检测法作为"金标准",统计胶体金法、ELISA对HIV抗体的检查结果。比较胶体金法、ELISA对HIV抗体的诊断效能(灵敏度、特异度、准确度、漏诊率、误诊率、阳性预测值、阴性预测值)。结果144例AIDS高危者经蛋白印迹检测法证实65例HIV抗体阳性,79例阴性。经ELISA检出HIV抗体阳性64例,阴性80例。经胶体金法检出HIV抗体阳性63例,阴性81例。ELISA诊断HIV抗体的灵敏度、准确度、特异度、阳性预测值、阴性预测值高于胶体金法,漏诊率、误诊率低于胶体金法(P<0.05)。结论与胶体金法比较,采用ELISA筛查AIDS高危人群HIV抗体的灵敏度、准确度、特异度、阳性预测值、阴性预测值较高,漏诊率、误诊率较低。这有助于提高AIDS检出率。

丙型病毒性肝炎的血清标志检测

1988年,choo等根据C100—3抗原,成功地开发出抗体检测法,宣告发现HCV感染的特异性。 1.抗—HCV的检测: （1）HCVC100—3抗体是开发最早、应用最广泛的第一代抗—HCV试验,美国chiron公司将C100—3与人超氧化物歧化酶（SOD）基因融合起来,在重组的酵母菌中表达C100—3多肽,进一步将C100—3多肽纯化后,包被子塑料平板孔内。

HIV的检测和监控

应用HIV抗体筛选试验诊断HIV感染，监测病情进展及其治疗反应等方面，在过去10年中都取得了进展。

双向电泳分析链格孢霉过敏原提取液的致敏蛋白组分

目的利用双向电泳及其免疫印迹分析技术研究链格孢霉过敏原提取液的致敏组分。方法对经空气曝皿获得，经形态学和分子生物学鉴定为链格孢霉的真菌进行26％恒温下培养4周，提取新鲜菌苔总蛋白后，用双向电泳技术进行蛋白质分离，免疫印迹技术分析链格孢霉过敏原提取液致敏蛋白组分。结果链格孢霉过敏原提取液经双向电泳共发现1450±35个蛋白点，双向免疫印迹分析发现6种过敏原组分，它们的相对分子质量（M，）和等电点（PI）分别为：16．4×10^3，PI为7．0—8．0；26×10^3，PI为6．0～7．0；31×10^3，PI为7．5～8．5；34×10^3，PI为6．5～7．0；45×10^3，PI为7．0—8．0；57×10^3，PI为6．5～7．5。结论双向电泳可用于链格孢霉过敏原提取液致敏蛋白组分的分析。