双向电泳指纹图谱分析法鉴别鲜乳和复原乳

为选择鲜乳和复原乳鉴别方法,采用双向电泳指纹图谱分析技术分析鲜乳和复原乳总蛋白。通过不同胶条比对分析发现,pH4.7~5.9的17 cm胶条等电聚焦后能够有效区分蛋白点,最适合牛乳蛋白电泳;选用pH4.7~5.9的17 cm胶条,对市场上购买的巴氏乳以及巴氏处理的复原乳进行电泳分析,发现电泳图谱与自制参照乳图谱基本一致。结果表明,该方法是一种行之有效的区分鲜乳和复原乳的检测方法,具有分辨能力强、重现性好等优点。

家蚕精巢蛋白质的双向电泳及质谱分析

精巢是雄性家蚕Bombyxmori的生殖腺,它的主要功能是产生精子,全面检测和鉴定精巢器官的蛋白分布将为分析家蚕雄性个体的发育和繁殖奠定基础。本研究利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白硝酸银染色技术对家蚕5龄第5天幼虫的精巢组织进行了蛋白检测,利用基质辅助激光解析质量飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对表达量较高的蛋白点进行了肽质量指纹图谱鉴定。结果表明：家蚕精巢蛋白质可以检测出1000个以上的蛋白点,这些蛋白点主要集中在分子量为15~90kD区域,等电点3.5~9之间,其中60个蛋白点得到了成功鉴定,按照已知或推测的蛋白功能,将其分为8类,包括：细胞骨架和细胞结构蛋白,膜蛋白或信号相关蛋白,大量应激反应蛋白（伴侣蛋白）,线粒体和能量产生相关蛋白,转录调控和翻译及DNA/RNA结合相关蛋白,酶和少量血液组成蛋白。其中很多蛋白可能在鞭毛形成、能量代谢及减数分裂过程中有重要作用。这些结果为进一步认识家蚕精子形成过程提供了重要的生物学信息。

鱼腥草注射液指纹图谱分析方法的建立

目的 研究建立鱼腥草注射液指纹图谱的检测方法。方法 采用气相色谱法测定鱼腥草注射液挥发性成分。挥发性成分采用水蒸气蒸馏法提取。结果 建立了鱼腥草注射液指纹图谱的分析检测方法,并验证了方法的可行性。结论 本法重现性好,稳定性佳,可用于鱼腥草注射液指纹图谱研究。

五味子的HPLC指纹图谱分析方法研究

目的:建立五味子的HPLC指纹图谱分析方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为ODS柱,以甲醇-水梯度洗脱,检测波长254nm,柱温30％℃。结果:标示出14个共有峰。结论:此法简便准确、重显性好,为提高五味子质量控制标准提供了参考依据。

一种适用于质谱分析的简化胶内酶解方法

在常规方法的基础上,设计了一种适于质谱分析的简化胶内酶解方法。改进的步骤包括:(1)通过加大洗涤所用超纯水量、延长涡混时间来强化凝胶洗涤的环节;(2)加入酸化处理来提高胰蛋白酶的活性;(3)在预酶解时不加CaCl_2,减少了酶的自切作用;(4)省略了蛋白质样品脱盐、脱SDS的步骤;(5)直接吸取酶解液进行质谱分析。系统比较该简化酶解法和最新报道的一种酶解方法的质谱鉴定效果,简化法能有效减少酶解后肽段的损失,增加质谱数据库搜索的信息量,得到更可靠的蛋白质鉴定结果。

桂竹糖芥HPLC指纹图谱建立与分析

目的 :建立桂竹糖芥的指纹图谱。方法 :以黑龙江省牡丹江地产的桂竹糖芥为分析对象 ,选择适宜的条件 ,建立了桂竹糖芥的指纹图谱。结果 :考察表明 ,本研究建立的分析方法有比较好的重现性。结论 :指纹图谱分析方法可简便 ,快速的鉴别中药材。

扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法

摘要本发明涉及一种扶正化瘀丹参、桃仁及绞股蓝中间体指纹图谱质量检测方法，包括（1）丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体供试品制备；（2）梯度洗脱流动相；（3）标准指纹图谱的建立，选取10批不同批次的扶正化瘀药物组合物丹参、桃仁及绞股蓝水提中间体进行高效液相色谱指纹图谱分析，对HPLC指纹图谱中所有峰进行比较，确定了6个共有峰，并按出峰时间先后次序进行编号（图1）；

氧化苦参碱脂质体对大鼠肝星状细胞作用的差异蛋白电泳分析

目的应用比较蛋白质组学的方法分析氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)脂质体作用于体外培养的肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)后,其蛋白表达的差异,以进一步阐明OMT脂质体对肝纤维化治疗作用的分子机制。方法建立四氯化碳(CCl4)致慢性肝损伤纤维化的大鼠研究模型,灌流法分离获得大鼠HSCs,将P2代细胞分为A(模型组)、B(OMT脂质体处理组)、C(脂质体对照组)3组进行实验,以正常大鼠来源的HSCs作为正常对照组,作用7天后,分别提取实验组和正常对照组细胞的总蛋白质,进行等电聚焦双向电泳,建立应用OMT脂质体作用前后HSCs双向电泳差异表达谱;选取两个差异最明显的蛋白点,经肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,PMF)测定,确定差异蛋白结构和功能。结果 (1)总蛋白质点在OMT脂质体作用前后有所减少,分别为864和756个,匹配率为63%;(2)局部区域图像进行放大可得10种蛋白质在正常对照组和实验组之间具有表达差异;(3)经PMF分析和SWISS-PROT蛋白数据库检索可获得两个差异最显著蛋白点为分子量46.236kD的ATM和54.051kD的Miz1。结论 OMT脂质体作用于HSCs会造成其蛋白质表达的差异性,可能参与诱导其凋亡的信号途径。

关木通HPLC-DAD-ESI／MS指纹图谱研究

目的建立关木通HPLC-DAD-ESI/MS指纹图谱分析方法,可用于关木通质量的评价,为进一步开展关木通的肾毒性代谢研究提供药材质量依据。方法用75%甲醇对不同产地的关木通样品进行提取,经HPLC-DAD-ESI/MS联用技术分析,建立指纹图谱,确定共有指纹峰,并选用两种相似度计算方法进行比较。结果关木通中含有30个特征指标成分,初步建立了30个共有峰为特征指纹信息的HPLC-DAD-ESI/MS指纹图谱。24批被测样品的指纹图谱整体相似度在0.871～0.998,各产地关木通之间相似性良好。结论方法准确可靠,重现性好,可应用于关木通的品质评价和质量控制。

太子参HPLC指纹图谱的初步研究

目的研究建立太子参的HPLC指纹图谱分析方法,提供药材质控指标。方法采用梯度洗脱的方法进行色谱分离,使用指纹图谱相似度评价软件进行数据处理,比较分析太子参指纹图谱的相似度。结果初步建立了江苏地产太子参的指纹图谱;不同产地太子参指纹图谱相似度较好。结论HPLC指纹图谱法重现性好,用于太子参的质量评价切实可行。

蒙药森登HPCE法的指纹图谱研究

目的:建立蒙药材森登的高效毛细管电泳(HPCE)指纹图谱分析方法为蒙药材森登质量评价提供依据。方法:采用石英毛细管柱(内径75μm有效长度50cm)HPCE工作条件:分离电压20kv,柱温25℃,紫外检测器(UV)检测波长为254nm,缓冲溶液为50mmol·L^(-1)硼砂-100mmol·L^(-1)硼酸-乙腈(2:1:1)混合溶液(pH=8.6)。结果:对7种不同产地的森登进行了分析,初步建立了以6个共有峰为特征指纹信息的HPCE指纹图谱。结论:HPCE指纹图谱法可用于蒙药材森登的质量评价。

牛蒡子HPLC指纹图谱的研究

对不同市售地的牛蒡子药材进行指纹图谱的比较研究，以期建立牛蒡子药材的质量评价方法；采用HPLC法，建立了11个不同市售地牛蒡子药材样品的指纹图谱；方法学考察表明，本研究建立的分析方法有较好的重现性，不同市售地牛蒡子药材共有峰的峰面积比有一定的差异；HPLC指纹图谱分析方法可用于评价牛蒡子药材的内在质量。

γ射线照射前后IEC-6细胞蛋白质组的差异分析

目的 分析γ射线照射后肠上皮细胞系 (IEC 6)细胞蛋白质组的改变。方法 分别提取正常IEC 6细胞和经过 2 5Gy照射后细胞的蛋白样品 ,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离 ,考马斯亮蓝染色后经PDQuest软件分析双向电泳图谱 ,对部分差异的蛋白点进行胶内酶切、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定其肽质量指纹图谱 ,在网上检索数据库鉴定差异蛋白 ,并采用RT PCR间接证实其变化。结果 获得了较好的双向电泳图谱。图像分析显示 :在正常IEC 6细胞中检测到 ( 60 8± 3 9)个蛋白质点 ,细胞照射后的样品中检测到 ( 5 95± 3 1)个蛋白质点 ,其中匹配的蛋白点为 3 96个。对表达差异的 16个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析 ,经数据库检索后初步鉴定为一些与代谢、自由基清除、细胞骨架相关的蛋白。RT PCR证实了ERP2 9基因在照射后增强。结论 电离辐射可以诱导IEC 6细胞蛋白质组发生改变。

Bt Cry1Ac毒素筛选的粉纹夜蛾离体抗性细胞与敏感细胞蛋白质组的差异分析

采用双向电泳技术和肽质量指纹图谱技术分析了BtCry1Ac毒素筛选的粉纹夜蛾Trichoplusiani抗性BTI_Tn_5B1_4细胞与同源敏感细胞的蛋白质组的差异。用MelanieViewerⅡ软件在抗性细胞的双向电泳图谱上检测到的平均蛋白质点数为 70 7± 2 5个 (n =3) ,在敏感细胞的双向电泳图谱上检测到的平均蛋白质点数为 6 37± 19个 (n =3) ,其中分辨率高、重复性良好的显著差异点有 10余个。对其中的一个敏感细胞特有的显著差异斑点进行了肽质量指纹图谱分析 ,经数据库查询表明该蛋白质与胞质外周蛋白具有同源性。

高质量枣树基因组DNA提取方法的研究

主要针对枣树组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,本研究比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明:常规CTAB法提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质;TE3D法提取DNA多糖杂质少,但产率低、易降解、褐化严重;而改良CTAB法提取DNA量大(1000ng/滋l左右),产率高,可达120滋gDNA/g新鲜组织,无明显降解,杂质少,A260/A280比值1.80左右,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。并进一步对改良CTAB法的关键步骤作出具体分析讨论。

蚯蚓中平喘蛋白组分的提取分离及其作用机制的初探

目的初步研究蚯蚓平喘蛋白组分(Eisenia foetidaprotein,EP2)及其平喘活性。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过蛋白质的硫酸铵沉淀和离子交换色谱法,分离得到一组平喘活性蛋白成分(EP2)。采用经典的肺阻力(RL)和动态肺顺应性(Cdyn)指标评价EP2对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP2拮抗白三烯D4引起豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应;同时应用双向凝胶电泳-质谱技术对蛋白组分EP2进行了初步分析鉴定。结果在整体试验中,EP216.8mg.kg-1口含吞服预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的RL增加和Cdyn下降,作用稍弱于阳性对照药孟鲁司特;在离体试验中,EP2能明显拮抗白三烯D4收缩气管平滑肌的作用,作用强度与孟鲁司特接近;双向凝胶电泳-质谱技术分析证明蛋白组分EP2中含有蚯蚓种属中的蛋白F-I-0、F-I-1以及纤溶酶组分A,均为丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族成员。结论EP2具有平喘作用,作用靶点可能通过拮抗白三烯受体,提示EP2的有效成分可能是白三烯拮抗剂。

化学振荡反应在中药检测中的应用

化学振荡作为一种典型的非线性非平衡现象,在分析检测领域受到关注。中药是一个复杂体系,质量监控因多方面因素较难实现,常用的色谱分析方法有诸多的弊端。因此,需要一种简便、快捷,且能反映物质特性的分析方法。电化学指纹图谱克服了中药成分复杂的弊端,可以作为中药鉴定的有效手段。

气血并治方制剂中间体的质量控制

目的:建立气血并治方制剂中间体指纹图谱分析及有效成分含量测定方法,探讨中药复方制剂中间体质量控制的有效途径。方法:建立制剂中间体指纹图谱定性分析和多种有效成分定量分析HPLC法,定性、定量分析相结合控制制剂中间体的质量。结果:经方法学认证,含量测定和指纹图谱分析各项参数均符合要求;10批制剂中间体样品含量分析显示,芍药苷、柚皮苷及新橙皮苷的含量在12 .5 %～16 . 0 % ,8 4 %～12 .4 % ,12 . 8%～15. 3% ,平均含量分别为(14 7±1 .1) % ,(10 . 6±1 2 ) % ,(14 . 2±0 . 8) % (n =10 ) ;各批次样品指纹图谱分析都显示2 5个共有峰,与标准谱图比较,指纹图谱相似度在99.0 %以上。结论:该方法测定结果准确、重复性好,可对气血并治方制剂中间体进行有效质量控制。

《色谱定性与定量》（第二版）

该书主要介绍了色谱分析中常用的定性和定量方法。在定性分析中除了介绍经典的保留值定性的各种方法外，对近年来在色谱定性分析中使用的质谱和红外光谱的谱图解析作了较详细的介绍。定量分析中除了介绍各种定量分析方法外，对数据处理中的误差分析、定量结果的评价和表达方法作了详细介绍。该书还对色谱定性定量分析常用的积分仪和色谱工作站作了介绍，并对保证色谱定性和定量结果准确的优良实验室规范及实验室认可制度作了介绍。与第一版相比，该书的第二版增加了色谱峰纯度检验、色谱指纹图谱分析、实验室能力验证等新内容。