运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像软件分析TPA处理NIH3T3细胞前后的蛋白质表达谱差异

目的建立及优化聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,并应用图像软件分析伏波醇酯(TPA)刺激前后小鼠成纤维细胞NIH3T3系的蛋白质差异表达,为进一步鉴定与TPA生物学作用有关的蛋白质奠定基础。方法分别提取TPA处理前后的NIH3T3细胞总蛋白质,经双向电泳,硝酸银染色后用软件分析显示两者蛋白质的差异表达。结果软件分析显示TPA刺激前后的细胞蛋白质有明显的差异表达。结论高质量的双向电泳设备、熟练的电泳操作和图像处理技能是寻找稳定可信的功能蛋白质的必要条件。

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究进展

双向聚丙烯酰胺凝胶电泳按等电点和分子量对蛋白质进行分离，具有很高的分辨率，已经成为蛋白质组研究中的核心技术之一。本文对双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的原理、检测步骤进行介绍，并对其存在问题与发展进行简要介绍。

聚丙烯酰胺凝胶电泳直接化学发光成像法分离和检测血液红细胞中的HbA_0,HbA_1,HbA_2和HbF

建立了聚丙烯酰胺凝胶电泳直接化学发光成像分离和检测蛋白质的新方法 .应用本方法分离和检测了新生儿脐带血和正常成年人血液红细胞中的不同血红蛋白HbA0 ,HbA1,HbA2 和HbF ,并与传统的考马斯亮兰染色法进行了比较 ,结果表明 ,本方法灵敏度高、背景低 ,步骤简单、快速 ,可以在 10min内得到检测结果 .此外 ,我们还以血红蛋白作为探针 ,检测了人血清蛋白 ,研究了人血清白蛋白对血红蛋白电泳结果的影响 ,并优化了发光成像的各种条件 .

准确、简易的检测马铃薯纺锤块茎类病毒的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术

准确、简易的检测马铃薯纺锤块茎类病毒的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术姜成模，金顺福，崔哲官，崔永一（延边州农业科学研究所龙井市１３３４００）马铃薯纺锤块茎类病毒（ＰｏｔａｔｏＳｐｉｎ－ｄｌｅＴｕｂｅｒＶｉｒｏｉｄ．ＰＳＴＶ－ｄ）是危害我国马铃薯生产的重要...

聚丙烯酰胺凝胶电泳-化学发光成像技术检测血清中的蛋白与药物的结合

血清蛋白分析是临床检验的一项重要的任务，血清中各种蛋白的指认和分析对于疾病的治疗和药物的研究具有重要的意义。药物在人血清中的分布和药物与血清蛋白的结合程度，使得药物的最大作用强度、作用幅度以及作用时间不同，最终导致了药效的不同。SAL（Salbutamo）是一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂，临床用于治疗哮喘等疾病，对心脏有刺激作用，久用会导致严重的心率失常，甚至猝死。

双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2/NDPK B的表达

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D_5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectricpoint,pI)约7.1、分子量(molecularweight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D_5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix—assistedlaserdesorpion/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(PeptideMassFingerprint,PMF),经Mascot:PeptideMassFingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2/NDPKB。RT-PCR和免疫组织化学结果也显示D_5小鼠子宫内膜nm23-M2/NDPKBmRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2/NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。

双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析促癌剂TPA诱导NIH3T3细胞表达变化的蛋白质

[目的]寻找并鉴定在TPA处理后小鼠成纤维细胞NIH3T3中表达发生变化的蛋白质,为阐明TPA在诱导细胞发生生物学变化的作用机制提供线索。[方法]用TPA刺激NIH3T3细胞,分别提取实验组和对照组的NIH3T3细胞的总蛋白质,通过聚丙烯酰胺凝胶双向电泳,硝酸银染色后用软件分析寻找差异表达的蛋白质,并对差异蛋白质进行质谱鉴定。[结果]软件分析显示TPA处理后的NIH3T3细胞中有明显的差异表达蛋白质,质谱鉴定表明TPA处理后,表达上调的蛋白质有线粒体基质蛋白P1前体、微管蛋白beta-5链;TPA处理后明显表达下调的蛋白质有galectin-1、N-myc下游调节基因1蛋白。[结论]TPA刺激NIH3T3细胞后可以下调生长抑制基因的表达,同时上调与细胞增生相关基因的表达。因此,促癌剂TPA可能对NIH3T3细胞有促进增生的作用。

双向电泳技术分离燕窝水溶性蛋白

为研究燕窝功效成分以及建立燕窝真伪检测和质量分级体系,采用双向电泳技术分离了燕窝水溶性蛋白。以印度尼西亚苏门答腊岛毛燕为材料,从提取溶剂、提取条件、水化上样缓冲液和分离胶体积分数4个方面对燕窝蛋白双向电泳技术进行优化。结果表明:以超纯水作为提取溶剂,60℃静置提取6h,以8mol/L尿素、4g/100mL CHAPS、65mmol/L DTT、0.2%(体积分数)Bio-Lyte 4/6 Ampholyte、0.1%Bio-Lyte 5/8 Ampholyte、0.001g/100mL溴酚蓝组成的溶液作为水化上样缓冲液,采用8%的分离胶体积分数可获得高分离度、高重复性的燕窝蛋白双向电泳图谱。同时,采用4个不同的燕窝样品对所建立的方法进行验证,证实了方法的可靠性。

热胁迫下月季叶片蛋白双向电泳分析

采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和肽质量指纹谱,对耐热性不同的月季品种热激处理后进行蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后,差异蛋白质点主要集中在分子量10-30kDa、等电点5-6范围内, 对耐热品种在高温下特异表达的蛋白质点中选取3个进行肽质量指纹谱的分析,并检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测,初步认为这些蛋白质点分别是eIF-5A、LEA蛋白和Hsp17．5。同时结合已报道其他植物中这3种蛋白的功能,对月季耐高温生理机制进行初步探讨。

花生叶片蛋白质双向电泳的方法与优化

以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。

小麦叶片蛋白质双向电泳的改良方法

以普通小麦叶片为实验材料 ,在原有双向电泳基础上通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行改进和优化 ,在小麦叶片可溶性蛋白的分析中获得了满意的双向电泳图谱。

优化玉米CMS-S双向电泳体系与差异蛋白比较

利用自主创建的Rf3近等基因系不育群体(P)s和可育恢复系群体(Pf)为试材,采用改进的双向(二维)聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)技术,对苗期、成株期叶片细胞总蛋白进行分析,分离到在Pf遗传背景下一特异蛋白质RRPⅥ,分子量为30.8kD,等电点为5.0,该特异蛋白质点的出现与消失可能与玉米CMS-S的育性恢复有一定关系,对其纯化分离将为Rf3基因的克隆奠定基础和进一步了解玉米质核互作不育表达模式的分子机制。讨论了采用2D-PAGE技术在玉米分子生物学研究中的优化以及基因组学与蛋白组学研究的衔接。

《蛋白质双向电泳实验手册》出版发行

由北京大学人民医院妇科肿瘤中心编著的《蛋白质双向电泳实验手册》一书已于近日由北京大学医学出版社出版。本书是一本蛋白质双向电泳实验方法的工具书。从介绍双向电泳的原理、实验技术的发展和电泳设备及相关配件材料的使用人手，着眼于实践，着重阐述了固相pH梯度等电聚焦的实验操作和以垂直与水平两种方式进行第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的技术和具体应用。

两种分离人血清蛋白质电泳技术的比较研究

目的比较双向电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离人血清中蛋白质的效果。方法双向电泳直接分离人血清中的蛋白质;采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离去除白蛋白的人血清样品。结果双向电泳图谱显示,样品在分子量为10k^20kDa可以分离出较清晰的蛋白质点,但在8000 Da以下没有分离出清晰的蛋白质点,且在20kDa以上的蛋白质点,凝胶背景模糊不清。而采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示,可有效分离10kDa以下的小分子蛋白质。结论两种电泳技术各有所长,需根据目的蛋白的特点选择适合的方法。

急性冠状动脉综合征患者血清基质金属蛋白酶2水平的检测

目的检测急性冠状动脉综合征患者血清基质金属蛋白酶2的水平,探讨其与不稳定性斑块及临床危险度的内在联系。方法应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western免疫印迹法分别检测急性冠状动脉综合症患者血清基质金属蛋白酶2的水平。其中不稳定型心绞痛组28例,分属低、中、高危3个亚组,急性心肌梗死组50例,正常对照组50例,稳定型心绞痛组51例。结果对照组、稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组基质金属蛋白酶2水平分别为236±33 INT.mm2、224±23 INT.mm2、455±51 INT.mm2和503±45 INT.mm2。急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组分别与稳定型心绞痛组和对照组之间比较,基质金属蛋白酶2水平差异有显著性,对照组与稳定型心绞痛组之间基质金属蛋白酶2水平无统计学差异。4组之间血清基质金属蛋白酶原水平无明显差别。Western免疫印迹法也显示了类似的结果。不稳定型心绞痛低危、中危、高危3个亚组间比较,无论是酶原还是活性酶的水平均未发现显著差别。结论血清基质金属蛋白酶2水平在急性冠状动脉综合征患者中明显升高,提示血清基质金属蛋白酶2增高可作为急性冠状动脉综合症的一个危险信号,但基质金属蛋白酶2与急性冠状动脉综合症危险度并无相关性。

低含量Pb^(2+)对Cd^(2+)污染下冬小麦幼苗根系过氧化物同工酶的影响

【目的】研究Pb2+含量低于国家"土壤环境质量标准(GB 15618-1995)"规定的Ⅱ类土壤环境基准值(300.0mg/kg)时,其对Cd2+污染下冬小麦幼苗根系过氧化物(POD)同工酶表达的影响,为正确评价土壤重金属污染条件下冬小麦生长发育的安全性和稳定性提供科学依据。【方法】采用盆栽试验,在不同含量Cd2+和Pb2+/Cd2+污染条件下培育冬小麦幼苗,待幼苗生长3周、7周和12周时,采集冬小麦幼苗根系,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),分析低含量Pb2+对Cd2+污染下冬小麦幼苗根系POD同工酶的影响。【结果】在幼苗生长的3周、7周和12周3个阶段中,土壤Cd2+污染对冬小麦根系POD同工酶的表达表现出了抑制效应;3周龄时,冬小麦根系POD同工酶表达量受Cd2+抑制影响最强,随着冬小麦生长时间的延长,Cd2+的影响开始减弱,且在冬小麦3周和7周龄时,20.0mg/kg Cd2+对冬小麦根系POD同工酶表达量的抑制作用最强。除3周龄时120.0mg/kg Pb2+可减缓20.0mg/kg Cd2+对冬小麦根系POD同工酶表达的抑制作用外,低含量Pb2+对Cd2+污染条件下冬小麦根系POD同工酶的表达均起协同抑制效应。【结论】冬小麦幼苗生长初期,土壤Cd2+污染对其根系POD同工酶表达表现出较强的抑制作用,随着冬小麦生长时间的延长,Cd2+的抑制作用减弱;当土壤中Pb2+含量低于国家"土壤环境质量标准"规定的Ⅱ类土壤环境基准值(300.0mg/kg)时,其增强了Cd2+污染对冬小麦根系POD同工酶表达的抑制作用。

错配修复基因hMSH2在膀胱癌组织中的表达

目的探讨膀胱癌组织中hMSH2与膀胱癌病理参数的关系。方法以36例新鲜膀胱癌组织和自身外周血细胞为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定技术,观察hMSH2在膀胱癌组织中的表达。结果36例新鲜膀胱癌组织中hMSH2突变≥1个位点以上为10例,≥2个位点以上为7例;hMSH2基因突变在膀胱肿瘤组织中呈现低表达,并且与肿瘤的分期、分级及淋巴结转移无关(P>0.05);复发癌中hMSH2突变率高于原发癌,差异有显著性(P<0.01)。用hMSH2的5个外显子突变分析的检出率为27.78%(10/36)。结论hMSH2基因突变在膀胱肿瘤组织中呈现低表达,并且与肿瘤的分期、分级及淋巴结转移无关。复发癌hMSH2基因突变率高于原发癌。提示hMSH2突变在膀胱癌复发过程中扮演了重要角色。