双启动寡核苷酸聚合酶链式反应法检测食品中的沙门氏菌

目的建立检测食品中沙门氏菌的双启动寡核苷酸-聚合酶链式反应(dual priming oligonucleotide-polymerase chain reaction,DPO-PCR)方法。方法以沙门氏菌invA基因为靶基因设计一对DPO引物,优化条件,对180份熟肉样本同时进行DPO-PCR和细菌分离鉴定。结果 DPO-PCR方法退火温度在52、57、62℃均可对靶基因高效扩增。方法特异性好,仅对沙门氏菌为阳性结果,而对金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7、β溶血性链球菌、铜绿假单孢菌无交叉反应。方法灵敏度可达4.3×10~2 CFU/mL。与细菌分离鉴定相比,两者检测结果完全一致。结论该方法快速、精准,可作为食品中沙门氏菌的快速检测方法。

基于双启动寡聚核苷酸引物的PCR技术及其研究应用

引物的设计是决定PCR反应能否特异性及高效地扩增的要素之一。双启动寡聚核苷酸（dual priming oligonucleotide,DPO）引物,是一种包含两个独立的特异性引物区域和寡聚次黄嘌呤（poly I）碱基桥连结构的设计方法。近年来,基于双启动寡聚核苷酸引物的PCR技术被广泛应用于临床医学检验、食源性病原微生物检验及动植物病毒检验检疫等领域,检验结果符合检验检疫行业标准。与常规PCR引物相比较,双启动寡核苷酸引物具有特异性更强,实用性良好等优点。本综述系统地综述了双启动寡聚核苷酸引物的设计原理及DPO-PCR技术在检验检疫方面的研究进展并探讨其应用价值。

HLA-DQB1启动子多态性与原因不明习惯性流产发病的关联研究

目的 :探讨HLA DQB1启动子区域基因多态性是否与原因不明习惯性流产发病存在关联。方法 :采用聚合酶链反应 序列特异性寡核苷酸探针杂交方法 ,对 32例原因不明习惯性流产患者和 5 3例正常妇女 ,分析DQB1启动子区域基因多态性。结果 :发现DQB1启动子等位基因频率在两组中无统计学上差异 ,而QBP6 2 DQB1 0 6 0 4 0 6 0 5单元型在患者组中的表达频率是 12 5 % ,在对照组中频率是 2 83% ,两者相比差异显著 (RR =4 9,P <0 0 5 )。此外 ,还发现了 6种中国人新的QBP DQB1的单元型。结论 :DQB1启动子与原因不明习惯性流产不存在直接关联 ,但与DQB1组成的单元型可能是导致该病易感性的因素。

应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

利用双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法,其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。

PCR-SSP检测RhD阴性献血者的RHCE基因型

目的研究江苏省血清学RhD阴性献血者中,含有RHD基因的献血者和不含RHD基因献血者中的RHCE基因型。方法对江苏省血液中心和无锡市红十字中心血站无偿献血者中337例血清学RhD阴性献血者,DNA离心柱法提取血液中的基因组DNA,采用多重聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法扩增RHD基因特异性内含子4和外显子7;如为阴性,则继续检测是否含有RHD基因启动子和外显子10。并进一步检测这些献血者的RHCE基因型。结果337例血清学RhD阴性无偿献血者中有84例为RHD基因内含子4和外显子7阳性,其余253例中有22例为启动子和外显子10阳性;