EUK4010对Presenilin-1/Presenilin-2双基因敲除小鼠神经退行性病变的影响

为了研究本实验室筛选出的单体化合物EUK4010对Presenilin-1/Presenilin-2双基因敲除小鼠神经退行性症状的作用及机制,将EUK4010(10μg/g体重)分别作用于2月龄和6月龄的双基因敲除小鼠(dKO小鼠),通过组织学、实时荧光定量PCR及Western blot、行为学等方法发现该化合物对dKO小鼠的体重下降、脑室扩大、海马萎缩等有一定缓解作用,但对dKO小鼠认知行为的改变尚不明显.进一步分析发现,EUK4010对dKO小鼠神经退行性症状的改善可能是抑制了由Presenilin-1/Presenilin-2双基因敲除导致的GFAP、C1qα与C4等炎症反应相关基因在皮层与海马中的表达上调所致.

Presenilins条件性双基因敲除小鼠海马与皮层超微结构的增龄性变化

为研究Presenilins条件性双基因敲除对于小鼠海马与皮层超微结构的影响,选用3、6及12月龄Presenilins 1/Presenilins 2双敲除小鼠(dKO)和同窝对照小鼠(CON),运用透射电子显微镜技术,分别观察海马与皮层突触、细胞核、线粒体、溶酶体超微结构的改变.结果发现:3月龄dKO小鼠海马与皮层溶酶体已向次级溶酶体转化.6月龄dKO小鼠海马与皮层的突触后致密物厚度显著降低;皮层细胞核膜内陷,核不规则;海马与皮层线粒体出现肿胀、嵴变形或消失;出现高电子密度的次级溶酶体,并伴有脂褐素小体出现.12月龄dKO小鼠海马与皮层突触后致密物厚度显著减小,突触间隙宽度显著增加;海马与皮层核膜内陷,染色质固缩沿核膜分布;线粒体严重受损,嵴大部分溶解;出现较多次级溶酶体和脂褐素小体.Presenilins条件性双基因敲除对小鼠海马与皮层有增龄性的病理影响,这些病理改变将为相关的药物评价和对阿尔茨海默病的深入研究提供形态学依据.

混合性高甘油三酯/高胆固醇血症小鼠模型的培育

目的通过脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)基因敲除极度高甘油三酯血症小鼠LPLO与ApoE基因敲除高胆固醇血症小鼠ApoEO杂交,产生混合性高甘油三酯/高胆固醇血症小鼠模型LPLO/ApoEO。方法采用杂交、回交、互交的方法进行培育,并以重组腺病毒为载体在初生小鼠四肢肌肉内表达LPL基因有益突变体LPL447,救治出生2 d内即死亡LPLO/ApoEO纯合子初生小鼠。采用从LPLO/ApoEO小鼠的个体组织(鼠尾)中提取基因组DNA进行PCR分析和血浆脂质检测个体基因型。结果LPL基因有益突变体在纯合子小鼠体内短暂表达,能够成功救治LPLO/ApoEO双基因敲除小鼠。成年小鼠表现为极度的混合性高脂血症,其血浆甘油三酯和胆固醇水平分别是正常小鼠的76和14倍。结论成功培育了LPLO/ApoEO双基因敲除的遗传性混合性高甘油三酯、高胆固醇血症小鼠模型。