RNA双扩增检测技术在手足口病肠道病毒核酸检测中的应用

目的研究新型RNA双扩增检测技术(dual amplification technology,DAT)在手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)肠道病毒感染中的诊断价值。方法选取HFMD临床确诊病例、疑似病例共202例,应用DAT及聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)-荧光探针法对患儿的咽拭子标本进行肠道病毒的核酸检测,对于两种方法检测结果不一致的样本,进行基因测序验证。结果与PCR-荧光探针法相比,DAT阳性检出率更高,阳性符合率、阴性符合率、总符合率都在85%以上,一致性Kappa值0.75以上;20例不一致的样本,DAT和基因测序的检测结果一致性高于PCR-荧光探针法(P<0.05)。结论DAT可同时完成3种肠道病毒RNA检测,灵敏度高,特异性强,为临床HFMD的预防、控制、诊断和治疗提供了合理化建议和理论参考依据。

sARMS-PCR检测非小细胞肺癌肿瘤组织中KRAS、BRAF基因突变研究

目的针对非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织标本鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因(KRAS)和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)驱动基因突变使用特异引物双扩增实时蝎形探针扩增阻滞突变系统(sARMS-PCR)检测的可行性;了解KRAS和BRAF基因突变患者临床病理特征,为NSCLC患者个体化治疗提供理论依据。方法收集89例NSCLC患者肿瘤组织甲醛固定石蜡包埋标本(FFPE),采用FFPE样品DNA分离试剂盒(离心柱型)提取DNA,使用sARMS-PCR同时进行KRAS及BRAF基因突变检测。结果1 KRAS基因突变21例(21/89);其中KRAS基因7种热点突变中,检出6种热点突变,均位于第12、13位密码子,1例同时检出存在G12D及G12V位点突变,1例同时检出存在G12C及G12V位点突变;未发现G12S突变型;2 BRAF基因突变1例(1/89),突变位点为V600E,为女性,黏液腺癌;3未见KRAS和BRAF基因同时突变现象。结论临床使用sARMS-PCR技术检测NSCLC患者KRAS和BRAF基因突变有较强敏感性,且石蜡组织标本取材方便,可以作为两种基因的临床检测方法;KRAS和BRAF基因突变与年龄、吸烟史、病理分型等均无明显相关性,KRAS基因突变与性别相关,男性高于女性;KRAS与BRAF基因是独立存在的。

非小细胞肺癌患者eml4-alk基因检测及eml4-alk阳性患者临床特征分析

目的探讨棘皮动物微管相关蛋白4(eml4)与间变性淋巴瘤激酶(alk)融合基因阳性非小细胞肺癌(NSCLC)患者的检测、临床特征、治疗、预后以及与egfr、kras、braf基因表达情况之间的联系。方法选取190例NSCLC患者石蜡包埋(FFPE)标本,采用免疫组化(IHC)法进行eml4-alk融合基因阳性NSCLC患者(eml4-alk+NSCLC)筛选,对于IHC阳性的标本使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测验证。收集整理eml4-alk+NSCLC的临床资料,并对其随访;对所有患者标本采用RT-PCR法进行egfr、kras、braf突变检测。结果190例NSCLC患者中,经IHC筛查及RT-PCR确证,共检出17例eml4-alk+NSCLC,其中手术标本最多,占47.1%(8/17)(χ~2=25.999,P=0.000),<60岁的占76.5%(13/17)(χ~2=5.813,P=0.016)。未显示eml4-alk融合基因与egfr、kras或braf突变同时出现的患者。在手术患者Ⅰ期未显示eml4-alk阳性肺癌,在Ⅱ~Ⅲa期检出8例eml4-alk阳性肺癌,经术后化疗25%(2/8)复发,2年生存率为100%。9例晚期eml4-alk阳性肺癌患者化疗有效率低(4疗程化疗后仅12.5%缓解),已有5例死亡。一线化疗后病情稳定或缓解的患者维持阶段口服克唑替尼的客观缓解率(ORR)与疾病控制率(DCR)分别达50%、100%。多线治疗后进展患者三线口服克唑替尼2个月ORR与DCR仍可达33.3%、66.7%。结论通过IHC筛查及随后RT-PCR可在各种病理标本中有效检出eml4-alk+NSCLC,其临床特征为<60岁的患者多见,而与性别、吸烟史等其他特征无明显关联。能够手术的较早期(Ⅱ~Ⅲa期)eml4-alk+NSCLC,接受术后辅助化疗预后较好;晚期患者一线化疗后病情稳定或缓解患者口服克唑替尼疗效较好。经多线治疗后使用克唑替尼仍然可提高其ORR及DCR,但获益有限。

呼吸道感染患者病原体核酸检测结果分析

目的分析北京大兴地区呼吸道感染患者常见病原体的检测结果。方法收集2019年间首都医科大学大兴教学医院3 180名急性呼吸道感染患者的咽拭子样本,采用双扩增技术检测7种常见呼吸道病原体,包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、肺炎支原体和肺炎衣原体。结果呼吸道病原体检出率为20.09%,其中甲型流感病毒检出率最高,其次为肺炎支原体,检出率最低的是肺炎衣原体。各年龄组检出率不同,0~10岁及11~20岁年龄组病原体检出率较高,分别为38.89%和40.11%;各年龄组主要病原体构成有差异,21~40岁检出率最高的是肺炎支原体,其他各年龄组检出率最高的均为甲型流感病毒。各季节检出率不同,差异有统计学意义(χ2=85.67,P <0.05),冬季病原体检出率最高,为26.12%;各季节主要病原体构成有差异,春季检出较多的是甲型流感病毒和乙型流感病毒,冬季检出最多的是甲型流感病毒,夏、秋季检出最多的是肺炎支原体。结论北京市大兴区比较常见的呼吸道感染病原体是甲型流感病毒和肺炎支原体,冬春季为感染高峰期。