双抗体夹心酶联免疫吸附法检测杏仁过敏原苦杏仁球蛋白

提取中国甜杏仁过敏原蛋白苦杏仁球蛋白,分别制备兔和鼠多克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法。结果表明:对甜杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限为(6.36±1.02)μg/L;对中国苦杏仁及美国大杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限分别为(12.11±1.70)μg/L和(18.95±1.52)μg/L,且与常见的14种植物性蛋白没有交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。将该方法用于法式小面包、饼干和脱脂牛乳中杏仁过敏原的检测,苦杏仁球蛋白的添加回收率为78.94%～125.15%,且相对标准偏差均低于5.81%。

双抗体夹心ELISA法定量检测左旋多巴

目的建立左旋多巴的酶联免疫定量分析方法。方法以左旋多巴与载体蛋白钥孔戚血蓝素偶联,制备免疫抗原Levodopa-KLH。采用杂交瘤技术制备的特异性抗左旋多巴单克隆抗体作为包被抗体,待测左旋多巴为夹心抗原,免疫抗原Levodopa-KLH免疫新西兰兔得到的多克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法。结果左旋多巴浓度在40～2 000 ng/mL范围内呈良好线性关系,Y=0.8367 X+0.3423,相关系数r2=0.993 3,检测限为20 ng/mL。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为9.53%和12.77%,平均回收率为87.86%,与卡比多巴、多巴胺、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺素、维生素C、5-羟色胺、金刚烷胺基本无交叉反应,健全性分析表明,人血清稀释倍数对该方法无影响,8 d连续检测标准曲线表明稳定性良好。结论这种定量检测左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为左旋多巴研究提供了定量检测的方法,并为药代动力学、临床血药浓度监测提供备选方法。

电化学免疫传感器检测人附睾蛋白4的新方法

目的建立一种基于石墨烯和纳米金粒子自组装纳米复合物检测卵巢癌患者血清人附睾蛋白4(HE4)的电化学免疫检测新方法。方法将石墨烯和纳米金粒子复合物组装在丝网印刷电极(SPE)表面,利用纳米金粒子比表面积大和石墨烯电子传导速率快等特点,将大量的HE4一抗吸附在纳米金表面,继而结合大量抗原。根据双抗体夹心法原理,大量的辣根过氧化物酶标记的抗体也与抗原结合,利用辣根过氧化物酶催化过氧化氢(H2O2)产生的电流信号测定HE4水平。结果新建传感器检测HE4的范围是0~400 pmol/L,检出限(LOD)是0.5 pmol/L。结论所建方法可用于早期评估受检者患卵巢癌的风险,是临床早期诊断卵巢癌快速、简便的新方法。

多通道电化学传感器检测人血清总前列腺特异性抗原

目的建立一种简便、灵敏和准确的多通道电化学传感器分析方法（ECISA）,用于人血清总前列腺特异性抗原（tPSA）的检测,并进行性能评价。方法基于抗体真空组装技术,将抗PSA抗体在16通道碳印刷电极阵列表面进行自组装,结合双抗体夹心免疫分析原理和多通道电化学传感技术对185份人血清中的tPSA进行检测,并将结果与电化学发光免疫分析法（ECLIA）进行相关性分析。结果多通道电化学传感技术检测tPSA标准曲线的线性范围为0.05-50 ng/mL;tPSA的最低检测限为10 pg/mL;定量限为61 pg/mL;检测tPSA批内变异系数（CV）为8.00%-8.50%;与ECLIA定量结果相关性良好（r2=0.941,P〈0.01）。结论 ECISA技术检测tPSA的灵敏度和特异性均较高,且与ECLIA结果有较好的相关性,能满足临床对tPSA检测的要求,具有潜在的临床推广应用价值,并具备用于其他肿瘤标志物检测的前景。

幽门螺杆菌粪便抗原检测——一种新的非侵入性检查

目的:了解幽门螺杆菌粪便抗原检测方法(Helicobacter pylori stool Antigen HpSA)的准确性与可靠性。方法:采用酶联免疫分析“双抗体夹心法”对303例因上消化道症状而进行胃镜检查的患者的粪便标本进行幽门螺杆菌检测,以快速尿素酶试验,组织学染色和培养检测Hp,以三项检查中至少两项阳性或Hp培养检测阳性者判定为Hp感染作为“金标准”。结果;“金标准”诊断Hp感染阳性182例,阴性121例。“金标准”阳性的182例中176例HpSA检测阳性,阴性的121例中100例HpSA检测阴性,HpSA敏感度为96.7％(176/182),特异度为82.6％(100/121)。结论:HpSA检测是一种简便易行,准确性高的非侵入性诊断Hp的方法,值得临床进一步推广。

胃癌手术前后血浆PAI-1、t-PA水平及临床价值

目的:探讨胃癌患者手术前后血浆PAI-1、t-PA含量变化及临床价值。方法:采用双抗体夹心酶标免疫分析法,测定胃癌患者手术前后血浆PAI-1、t-PA与肿瘤转移和预后的关系。结果:胃癌术前PAI-1、t-PA均与非肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.05),行胃癌根治术后t-PA水平较术前差异有统计学意义(P<0.05);胃癌患者转移和无转移者PAI-1水平有统计学差异,而t-PA变化不大(P>0.05)。结论:血浆PAI-1、t-PA水平与胃癌的浸润及转移过程密切相关。

不同面积脑梗死患者血清血管内皮生长因子水平比较

探讨脑梗死面积与血清血管内皮生长因子的关系。对50例急性脑梗死患者(发病16 h以内)于入院即时、入院后第1、3、7和14天分别测定血清血管内皮生长因子水平;根据入院后第3天头颅计算机体层摄影术扫描结果,将脑梗死分成大、中、小三种类型梗死面积,比较三种类型梗死面积各时相血清血管内皮生长因子水平。结果发现,三种面积脑梗死患者血清血管内皮生长因子升高的程度在入院即时、病后第1-7天有显著性差异(P<0.05)。结果提示,血清血管内皮生长因子水平与脑梗死面积有关,其水平随面积增大而增高,并在发病早期即可检测出来。

子宫内膜异位症患者血清中EPO及ENA-78的表达及意义

目的研究促红细胞生成素(EPO)及中性粒细胞激活肽-78(ENA-78)在子宫内膜异位症中的意义及相关性。方法采用双抗体夹心酶联免疫分析方法测定34例子宫内膜异位症患者(Ⅰ、Ⅱ期12例,Ⅲ、Ⅳ期22例)和30例非子宫内膜异位症患者血清中EPO及ENA-78的表达,并分析子宫内膜异位症患者血清中E-PO及ENA-78的相关性。结果子宫内膜异位症患者血清中EPO及ENA-78的表达量均明显高于对照组(P<0.05);血清中EPO的表达量Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜异症患者稍高于Ⅲ、Ⅳ期患者,但差异无统计学意义(P>0.05);血清中ENA-78表达量Ⅲ、Ⅳ期子宫内膜异症患者明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜异症患者血清中EPO与ENA-78的表达无明显相关。结论EPO及ENA-78与子宫内膜异位症的发病有关。