双夹心化学发光法降钙素原定量检测系统的测定效果分析

目的:评估双夹心化学发光免疫试剂盒检测降钙素原(procalcitonin,PCT)的性能。方法:收集如东县人民医院临床标本,参照美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)文件或行业标准,对夹心化学发光免疫试剂盒检测PCT的精密度、线性、方法学比对、可报告范围、正确度、抗干扰能力进行评估,同时进行参考区间初步验证。结果:精密度验证结果显示,高值、中值和低值标本批内精密度的变异系数分别为1.07%、1.60%和1.93%,批间精密度的变异系数为1.30%、2.97%和4.19%,均符合实验要求;线性验证试验结果显示,线性范围为0.02~95.54 ng/mL,在检测范围内具有良好的线性关系(R2=0.9982);方法学比对结果显示,双夹心化学发光免疫试剂盒(迈瑞)与酶联免疫荧光法分析系统的PCT试剂盒(梅里埃)检测结果一致性良好(R2=0.9919);正确度验证结果显示,检测值相对偏差分别为-2.56%、-0.81%,符合实验要求;可报告范围验证结果显示,回收率为104.41%~111.79%,临床可报告范围为0.02~764.32 ng/mL;20例健康体检者PCT结果均在正常参考区间范围内。结论:双夹心化学发光免疫试剂盒检测PCT的精密度、线性、方法学比对、可报告范围、正确度等分析性能较好,参考区间也符合实验室质量要求,可用于临床标本检测。

人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用

目的探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法化学发光检测的应用。方法利用重组融合HCV抗原分别标记生物素及吖啶酯,建立起双抗原夹心法化学发光检测试剂盒,与间接法同时检测了866例阴性标本,440例阳性标本,3套BBI阳转血清盘。结果双抗原夹心法与间接法灵敏度分别为100%、100%,特异性分别为99.9%、98.7%,特异性差别1.2%（95%可信区间：0.5%-2.1%）,BBI阳转血清相对敏感性系数为-1.33。结论双抗原夹心法特异性及早期感染检测能力优于间接法,将会成为丙型肝炎病毒抗体检测的主要方法。

甲状旁腺激素化学发光免疫分析试剂盒的开发及临床应用

目的用双抗体夹心法建立人血清甲状旁腺激素的化学发光免疫测定方法。方法反应模式为生物素化的甲状旁腺激素抗体和吖啶酯标记的甲状旁腺抗体和样本中的抗原形成“三明治”复合物,通过加入发光底物读取信号值来计算待测物浓度,并且分析解决钩状效应的方法。结果建立了人血清甲状旁腺激素的双抗体夹心化学发光免疫测定方法,所建立的方法具有良好的分析性能和热稳定性。采用四参数方程建立测定甲状旁腺激素的标准曲线。空白限为0.2 pg/mL,批内精密度为4.07%~7.17%,批间精密度为3.30%~8.91%,回收率为91%~109%。加速稳定性试验显示,试剂在37℃表现出良好的稳定性。当甲状旁腺激素浓度为40000 pg/mL时,未观察到钩状效应。用所建立的方法与贝克曼库尔特UniCel DxI 800免疫分析系统同时测试207份血清样本,进行比对分析,线性回归方程为y=0.986x+0.5594,相关系数(r^(2))为0.9739,结果具有很好的一致性。结论本研究的试剂盒检测结果与临床结果符合较好,试剂盒可以应用于临床辅助诊断。

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay,sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒。方法确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价。结果反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20min,酶促反应显色10 min。兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体,1:5000(V:V)稀释。采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5~200.0 ng/mL,检出限为3.5 ng/mL,定量限为8.5 ng/mL。批次内和批次间的变异系数分别为2.31%~4.58%和6.06%~12.23%;鱼糜基质中的回收率为80%~130%;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002%;试剂盒在4℃保存6个月期间,标准品检测结果的变异系数为4.29%~18.91%。结论建立的方法快速、灵敏、准确、稳定性好,可用于鱼糜制品中鸡蛋OVA的定量检测。

抗-HCV双抗原夹心法化学发光检测的效果

目的观察丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)双抗原夹心法化学发光检测的应用效果。方法在2017年3月-2018年7月,采集本院疑似丙型肝炎病毒300例患者血液标本,通过重组融合丙型肝炎病毒抗原分别标记吖啶酯及生物素,建立双抗原夹心法化学发光试剂盒,对院疑似丙型肝炎病毒300例患者血液标本,分析检测结果。结果300份血液标本中,双抗原夹心法化学发光检测阳性112例,阴性183例,灵敏度为97.39%(112/115)特异度为98.92%(183/185)。结论应用双抗原夹心法化学发光检测丙型肝炎病毒抗体,具有较高的灵敏度及特异度,将其应用于临床血液样本筛查检测中,应用优势较大、应用价值较高。

匹拉米洞半定量检测法与双抗体夹心法检测粪便隐血的比较

目的探讨FOBpsm和IFOB两种方法检测粪便隐血的灵敏度和特异性及抗干扰能力。方法分别采用两种方法分别对512例消化科患者标本进行隐血检测,同时测定已知Hemoglobin,Hb的红细胞悬液以及在粪便中加入动物血、菠菜、铁剂、铋剂、维生素C等干扰物质对两种方法检测的灵敏度、特异性、检测上、下限以及抗干扰能力进行分析。结果FOBpsm的阳性率为44.1%,IFOB的阳性率为77.7%,P<0.005,差异具有统计学意义。FOBpsm检测Hb的浓度范围:20μg/mL>100mg/mL。IFOB检测Hb的浓度范围:1μg/mL~10mg/mL。IFOB检测加入各种干扰物质的粪便标本时均能准确排除干扰,FOBpsm则出现假阳性或假阴性结果。结论IFOB的灵敏度、特异性及抗干扰能力均优于FOBpsm。但是,FOBpsm能够避免钩状效应,两种方法应互相应用弥补方法学的不足。

甲型肝炎病毒抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的:建立快速检测甲型肝炎病毒(HAV)抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法:用HAV多克隆抗体和HAV单克隆抗体酶结合物建立双抗体夹心ELISA法,检测HAV抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性(标准曲线)、准确度、精密度、灵敏度验证,对不同生产厂家生产的HAV疫苗(人二倍体细胞)与不同工艺阶段的HAV疫苗(人二倍体细胞)中间产品进行适用性检测。结果:HAV多克隆抗体的最佳包被浓度为8μg/mL,酶标抗体最佳稀释度为1∶10 000,封闭剂为1%BSA。该方法与其他人用疫苗和辅料成分无交叉反应;线性范围0.546 875~17.500 000 IU/mL,R^(2)> 0.99;准确度验证回收率80.1%~123.7%;精密度验证变异系数<8.3%。检测不同厂家的HAV疫苗(人二倍体细胞)和不同工艺阶段的HAV疫苗(人二倍体细胞)中间产品呈良好的剂量依赖效应。结论:建立了适用于HAV抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于不同毒株生产的HAV疫苗(人二倍体细胞)检测,可用于甲肝病毒收获液、浓缩液、纯化液、灭活液及原液等不同工艺阶段样品检测。

双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p抗体

目的建立一种检测马尔尼菲青霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达重组马尔尼菲青霉特异性甘露糖蛋白Mp1p,并利用改良过碘酸钠法标记Mp1p,经棋盘滴定法建立一种可检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并检测100例健康人群对照血清、21例血培养确诊其他真菌感染病人血清和15例血培养确诊马尔尼菲青霉病人血清,联合本实验室前期建立的马尔尼菲青霉抗原检测方法评价其临床应用价值。结果成功建立一种检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,经健康人群对照及其他真菌感染病人血清评价特异度为100%(121/121),检测15例马尔尼菲青霉病人血清,Mp1p特异性抗体2例阳性,Mp1p特异性抗原12例阳性,Mp1p抗体与抗原联合检测可明显提高灵敏度,达到93.3%(14/15)。结论双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体具有高度的特异性,联合抗原检测可提高马尔尼菲青霉感染诊断率。

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化

利用原核表达的禽白血病病毒(ALV)P27蛋白作为抗原制备的单抗作为包被抗体,以制的酶标兔抗P27作为酶标抗体,在国内首次建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对禽白血病P27抗原的最小检出量为5 ng/mL,通过统计学试验证明自制的诊断试剂具有良好的特异性和稳定性。与IDEXX试剂盒的平行实验确定自制诊断试剂S/P>0.17为阳性判定标准。应用此方法对北京附近鸡场对抽样检测687份蛋清样品,检测结果与IDEXX的禽白血病抗原检测试剂盒符合率达到100%。

双抗体夹心ELISA法检测相思子毒素

目的:建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法:采用双抗体夹心ELISA法来检测微量abrin。结果:该法检测abrin线性范围为0.25～125μg/L,线性回归方程为Y=0.51015X+0.4153(r=0.9880,n=10,P<0.0001),检测下限为0.25μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素B(SEB)对检测结果基本无干扰。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为3.52%～4.86%,具有较好的重现性。结论:成功地建立了双抗体夹心ELISA法检测abrin,将多克隆抗体的强富集能力和单克隆抗体(mAb)的特异性结合起来,提高检测的灵敏度和特异性,可适用于各种微量abrin样品的分析。

双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测相思子毒素

目的建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin。结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25μg/L,线性回归方程为Y=0.52369X+0.51632(r=0.9816,P<0.0001,n=9),检测限为0.125μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素(SEB)对检测结果基本无干扰,表明该法检测abrin具有很好的特异性。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为2.35%～4.14%,具有较好的重现性。结论成功建立了夹心BA-ELISA法检测abrin,巧妙地将多克隆抗体的强富集能力、单克隆抗体的特异性以及生物素-亲和素系统的放大作用结合起来,达到了提高检测的灵敏度和特异性的目的,可适用于各种微量abrin样品的分析。

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的 建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。

应用ELISA双抗体夹心法检测猪细小病毒抗原的研究

研究建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。试验方法的最佳工作条件为，抗体浓度１：４００，酶标抗体浓度１：５０。５４份胎猪样品阳性检出率为５９．３％，不同脏器的阳性检出率分别为，心３６．４％、肝脏７２．７％、脾脏５０％、肺脏６６．７％、肾脏６６．７％。

尿液水通道蛋白-2双抗体夹心ELISA测定法的建立

目的建立较为稳定的定量检测尿液水通道蛋白-2(AQP2)的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法人工合成AQP2蛋白C-末端的CELHSPQSLPRGSKA多肽片段,并与KLH联接,制备兔抗AQP2多肽片段的多克隆抗体,用辣根过氧化物酶标记部分抗AQP2抗体IgG。建立检测充血性心力衰竭模型大鼠尿液AQP2的双抗体夹心ELISA法。结果双抗体夹心ELISA法成功建立,灵敏度为15.625 pmol/ml,批内及批间变异系数分别为4.65%和14.05%;用该法定量检测左冠状动脉结扎术后不同梗死面积充血性心力衰竭模型大鼠的尿AQP2浓度,其结果与Western blotting半定量检测结果一致。结论双抗体夹心ELISA法可以较好地定量检测充血性心力衰竭模型大鼠的尿AQP2蛋白浓度且较Western blotting更加简便易行,便于临床推广使用。

用单克隆抗体酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测红内期恶性疟原虫抗原

本文介绍了以兔抗恶性疟原虫（p、f）多克隆抗体包被,用混合的二种单克隆抗体进行反应酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法检测人体红细胞内的恶性疟原虫抗原。恶性疟（镜检确诊）和非疟疾患者的滤纸血样本测定符合率分别为91.5％（43/47）和96％（24/25）。检测敏感度为5个疟原虫/10~6红细胞,对恶性疟原虫的海南和江苏地理株的测定结果显示,两者的符合率无显著差异。但对间日疟样本测定结果不理想。

双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉Afmp1cr/Afmp2cr抗体

目的建立检测烟曲霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法用毕赤酵母系统表达重组的烟曲霉特异性甘露聚糖蛋白片段Afmp1cr和Afmp2cr,经棋盘滴定法建立可检测烟曲霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。用Afmp1cr和Afmp2cr分别免疫兔血清评估方法灵敏度,健康人血清、其它微生物感染者血清评估特异性,并检测曲霉感染者血清。结果 Afmp1cr双抗原夹心ELISA法可捕获1∶800稀释兔多抗血清中的抗体,Afmp2cr双抗原夹心ELISA法可捕获1∶3200稀释兔多抗血清中的抗体,两者均与其他真菌及细菌无交叉反应。2例确诊曲霉感染和1例拟诊曲霉感染患者血清中能检测出抗体。结论初步建立了检测anti-Afmp1cr/Afmp2cr抗体的双抗原夹心ELISA方法,可辅助诊断临床烟曲霉感染。

酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG

〔目的〕建立检测牛初乳素为原料的保健食品中免疫球蛋白IgG的常用酶联免疫双抗体夹心法。〔方法〕分离纯化小牛血清中IgG,以牛IgG免疫新西兰兔,获得抗牛IgG的血清,分离纯化,制备兔抗牛IgG。〔结果〕1000ng/孔兔抗牛IgG饮被酶联板,3倍比稀释牛IgG,夹心法检测。〔结果〕在牛IgG0.031mg/ml-2.50mg/ml范围,浓度与吸光度值线性相关,方程为:y=0.358+0.767x,相关系数为r=0.995,当添加50mmIgG时,回收率为88.4％,变异系数为6.1％。〔结论〕该方法具有特异性强、快速、灵敏和分析成本低等特点。

双抗体夹心法检测胆管癌患者血清中胆管癌相关抗原的临床意义

胆管癌相关抗原（ＣＣＲＡ）是我们从人胆管癌组织中提取的一种新的肿瘤标志物。建立了检测ＣＣＲＡ的ＥＬＩＳＡ方法，检测了４０例正常人及２６８例良恶性疾病病人血清的ＣＣＲＡ浓度，后者包括胆管癌３６例、原发性肝癌４０例、胰腺癌２６例、胃癌３１例、结直肠癌３４例、肺癌１７例、肝硬变２０例、胆石症４０例及胃溃疡２４例。结果显示：４０例正常对照组的血清ＣＣＲＡ浓度为（１４．３８±７．３４）μｇ／ｍｌ（ｘ±ｓ），正常上限为２８．９５μｇ／ｍｌ（ｘ＋２ｓ）；血清ＣＣＲＡ诊断胆管癌的敏感性是７７．７８％，明显高于其它肿瘤组（０～２５）％（Ｐ＜０．００１），特异性是（７５～１００）％。认为对于胆管癌的诊断，ＣＣＲＡ可能是一种较特异的肿瘤相关抗原。