登革热抗原抗体联合检测与双抗体检测效能比较

目的比较抗原抗体联合检测与双抗体快速检测2种方法检测登革热的效能,为登革热快速诊断提供依据。方法收集登革热临床诊断病例血清样本449份(病例组)、流行病学和(或)临床上判断与登革热无关血清样本689份(阴性对照组),分别进行抗原抗体联合检测(IgM、IgG和NS1抗原)及双抗体检测(IgG和IgM),以临床诊断为金标准,对2种方法检测结果进行描述分析和一致性分析。结果纳入研究的449例病例组和689例阴性对照组中,联合检测阳性率(34.1%)高于双抗检测(29.7%),且均低于临床诊断阳性率(39.4%),差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为20.61、7.03和51.33,P值均<0.01)。联合检测结果与实际临床诊断一致性(kappa=0.863)高于双抗检测(kappa=0.745),联合与双抗检测法结果一致性较好(kappa=0.729)。阴性对照组有9份样本经联合和(或)双抗检测法检测为登革热阳性,其中4例(3例发热待排查病例,1例体检人员)2种方法均为阳性,增补为登革热临床诊断病例。结论抗原抗体联合胶体金检测登革热不仅方便、快捷、经济,与临床诊断一致性较高;还可降低漏诊率,可应用于登革热即时现场检测(POCT)、快速临床筛查、大规模流行病学调查等防控工作。

传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。

奶山羊布鲁氏菌病抗原与抗体双检测的效果分析

为了有效检测净化奶山羊布鲁氏菌病群体,加快奶山羊产业健康稳步发展。本文采用布鲁氏菌病抗原与抗体双检测方法对陕西某奶山羊场进行了检测分析。结果表明,在某奶山羊场引入羊时,采用抗体单一检测发现全群228只羊感染了36只,感染率达到15.79%,发现感染后对本群感染羊进行了无害化处理和圈舍清洗消毒,3个月后对剩余的192只羊有进行了一次全群检测,结果检测出18只阳性羊,与上一次的净化方式一样处理后,同样又在3个月后对剩余的174只羊采用抗原与抗体双检测方法,布病抗体检测卡检测出8只羊,布病抗原检测卡检测出10只羊,而且用布病抗体检测卡和布病抗原检测卡检测出来的羊只编号完全不同,3个月后对剩余的156只羊进行同样的方法进行检测,结果仅检查出1只阳性羊,6个月后对剩余的155只羊进行同样的方法进行检测,未发现布病阳性羊只。利用抗原与抗体双检测继续在3个月、6个月进行检测均未发现阳性羊只。本试验得出结论,相比于抗体单一的布鲁氏菌病检测法,抗原抗体共同使用的检测方法布病阳性率明显的降低,且能短期内达到预期净化的效果,说明双抗使用在羊布鲁氏菌病检测中效果更好,更具有推广使用的意义。

应用液相芯片检测空肠弯曲菌

[目的 ]建立空肠弯曲菌液相芯片检测方法。[方法 ]本研究将空肠弯曲菌HIP蛋白单克隆抗体与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立空肠弯曲菌液相芯片检测方法,测定不同浓度的抗体与微球偶联率。通过L9(34)正交设计试验优化方法的反应条件,并进行灵敏度和特异性试验。[结果 ]较优实验条件即多克隆抗体工作浓度为1:100、生物素标记的羊抗兔IgG工作浓度为1:500、SA-PE的工作浓度为10ug/mL、生物素标记的抗体与SA-PE反应时间为90min。该方法灵敏度可达103CFU/mL,与其他常见食源性致病菌无交叉反应。[结论 ]该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可快速检测食品中的空肠弯曲菌。

血清透明质酸HA定量检测的新方法

目的建立一种可用于血清透明质酸HA定量检测的新方法.方法采用透明质酸HA纯品按常规方法免疫兔子,经心脏采血和亲和纯化获得抗HA多抗.采用常规单抗杂交瘤技术免疫小鼠,经细胞融合、阳性细胞株筛选及单克隆化,最终获取阳性HA单抗细胞株.采用腹水法制取HA单抗,蛋白A亲和株纯化抗体.利用上述自制的高质量的抗HA单抗和多抗,建成HA定量检测双抗体夹心酶联免疫检测法:以HA单抗包被酶标板,封闭洗涤后加入HA纯品及待测样品,放置洗涤后加入HA多抗,放置洗涤后再依次加入酶标二抗羊抗免IgG-HRP和底物OPD显色读数.并用此新方法来检测HA纯品及其不同期肝纤维化大鼠血清中HA的浓度.结果经心脏采血和纯化后,获得80mL抗HA多抗血清,其抗体的含量为14.35g/L,亲和常数为1×10-7mol-1,效价达1×10-7.共做了三批细胞融合,三批的融合率分别为:18.5%(71/384),22.1%(85/384),60.2%(231/384),总融合率为33.6%(387/1152).各批的阳性率分别为:21.1%(15/71),23.5%(20/85),12.1%(28/231),总阳性率为16.3%(63/387).从这些阳性杂交瘤细胞株中共选出了6株阳性较高的,克隆了其中两株,2C3F2,2C3B8.并制备了2C3F2的腹水.经纯化后,其含量、效价和亲和常数分别为:7.88%,1×10-5和1.97×10-6mo1-1.以效价为10-3HA单抗包被酶标软板,并以加入10-3浓度的HA多抗来组配建立HA定量检测法时,其光吸收值A492nm最高.用此组配来检测HA纯品时,其检测精度至少在1ng,其灵敏度与以往检测的方法相比相同或相近.用此法来检测大鼠肝硬变病程中血清HA的浓度变化,结果表明在第1,3,6,9及12wk时的血清HA含量分别为0.21μg@L-1,7.98μg@L-1,20.10μg@L-1,229.73μg@L-1和324.74μg@L-1.结论利用只针对HA的高特异高敏感性抗HA单抗和多抗建立起来的双抗体夹心法比起现有的HA放免或酶免试剂盒更为简便、经济、快速和灵敏准确.若经进一步完善,是有可能发展成为一种用于血清HA定量检测的新方法的.

单核细胞增生李斯特菌液相芯片检测方法的建立

建立单核细胞增生李斯特菌液相芯片检测方法。本研究将单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体(mAb930)与聚苯乙烯微球偶联,结合双抗体夹心技术建立单核细胞增生李斯特菌液相芯片检测方法。测定不同浓度的抗体与微球偶联率。通过L25(56)正交设计试验优化方法的反应条件,并进行灵敏度和特异性试验。应用建立的方法及国家标准检测方法同时检测200份食品样品,比较检测结果。结果显示,较优实验条件即多抗工作浓度为1:100、生物素标记的羊抗兔IgG工作浓度为1:500、SA-PE的工作浓度为10μg/mL、生物素标记的抗体与SA-PE反应时间为30 min。该方法灵敏度可达103 CFU/mL;与其他常见食源性致病菌无交叉反应。与国家标准方法检测单核细胞增生李斯特菌的结果基本相符,液相芯片法检测各种样品的假阳性率低于0.77%。该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可快速检测食品中的单核细胞增生李斯特菌,能够应用于实际样品的检测。

冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法的建立及应用

本文研究了冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)的双抗体夹心酶联免疫检测方法(sandwich-ELISA法),以抗MTG兔多抗为包被抗体,抗MTG鼠单抗为检测抗体,再结合HRP标记的抗IgG1二抗,构成sandwich-ELISA检测方法,对冷冻鱼糜中是否添加MTG进行定量检测,防止冷冻鱼糜原料掺假。实验结果表明,包被抗体的最佳工作浓度是2.00μg/mL,检测抗体的最佳工作浓度为0.10μg/mL,酶标二抗的最佳稀释倍数为1:5000。方法的检测限为20 ng/mL,该检测方法在0.6 mg/mL^10 mg/mL范围内OD450值与MTG浓度的log值呈线性关系。建立掺假冷冻鱼糜样品模拟体系,测定其中MTG的添加量:MTG的添加回收率为94%以上,测定过程中回收率结果的板内变异系数为1.12%~4.02%,板间变异系数为5.43%~6.87%。经试验证明该方法灵敏度高,样品前处理简便,适用于冷冻鱼糜中MTG的定量检测。