血清透明质酸HA定量检测的新方法

目的建立一种可用于血清透明质酸HA定量检测的新方法.方法采用透明质酸HA纯品按常规方法免疫兔子,经心脏采血和亲和纯化获得抗HA多抗.采用常规单抗杂交瘤技术免疫小鼠,经细胞融合、阳性细胞株筛选及单克隆化,最终获取阳性HA单抗细胞株.采用腹水法制取HA单抗,蛋白A亲和株纯化抗体.利用上述自制的高质量的抗HA单抗和多抗,建成HA定量检测双抗体夹心酶联免疫检测法:以HA单抗包被酶标板,封闭洗涤后加入HA纯品及待测样品,放置洗涤后加入HA多抗,放置洗涤后再依次加入酶标二抗羊抗免IgG-HRP和底物OPD显色读数.并用此新方法来检测HA纯品及其不同期肝纤维化大鼠血清中HA的浓度.结果经心脏采血和纯化后,获得80mL抗HA多抗血清,其抗体的含量为14.35g/L,亲和常数为1×10-7mol-1,效价达1×10-7.共做了三批细胞融合,三批的融合率分别为:18.5%(71/384),22.1%(85/384),60.2%(231/384),总融合率为33.6%(387/1152).各批的阳性率分别为:21.1%(15/71),23.5%(20/85),12.1%(28/231),总阳性率为16.3%(63/387).从这些阳性杂交瘤细胞株中共选出了6株阳性较高的,克隆了其中两株,2C3F2,2C3B8.并制备了2C3F2的腹水.经纯化后,其含量、效价和亲和常数分别为:7.88%,1×10-5和1.97×10-6mo1-1.以效价为10-3HA单抗包被酶标软板,并以加入10-3浓度的HA多抗来组配建立HA定量检测法时,其光吸收值A492nm最高.用此组配来检测HA纯品时,其检测精度至少在1ng,其灵敏度与以往检测的方法相比相同或相近.用此法来检测大鼠肝硬变病程中血清HA的浓度变化,结果表明在第1,3,6,9及12wk时的血清HA含量分别为0.21μg@L-1,7.98μg@L-1,20.10μg@L-1,229.73μg@L-1和324.74μg@L-1.结论利用只针对HA的高特异高敏感性抗HA单抗和多抗建立起来的双抗体夹心法比起现有的HA放免或酶免试剂盒更为简便、经济、快速和灵敏准确.若经进一步完善,是有可能发展成为一种用于血清HA定量检测的新方法的.

红细胞生成素在急性肾功能衰竭中的变化

该研究经较严密的设计，采用敏感及特异的检测方法——双抗体酶联免疫法测定血清EPO水平。选择原发病不引起贫血，呼吸功能正常的病例作研究，并对中毒性ARF作了专门研究。结果显示，ARF能引起血清EPO下降，随后产生明显的贫血。从而提示，ARF本身的贫血与EPO下降有关，并为EPO治疗ARF贫血提供理论依据。

绝经妇女应用激素替代治疗后血浆内皮素水平的变化

目的 观察激素替代治疗 (HRT)对绝经妇女血浆内皮素 (ET -1)水平的影响。方法 应用双抗体酶联免疫吸附法 (ELISA)对 3 2例绝经妇女分别在应用HRT前及应用HRT 3个月、6个月和 1年时的血浆ET -1的水平进行检测。结果 绝经后妇女应用HRT 3个月后 ,血浆ET -1水平 [(3 5 72± 6 5 9)pg/mL]极显著下降 (P <0 0 0 1) ,此后在应用HRT 6个月和 1年时分别维持在 (3 6 0 3± 9 17)pg/mL和 (3 6 78± 8 0 8)pg/mL的水平 ,与应用HRT前相比差异均具有极显著性 (P <0 0 0 1)。结论 绝经后妇女应用HRT可能是通过调节血管内皮细胞释放细胞因子功能 ,即降低ET

马铃薯种薯生产中的病毒检测

病毒检测是马铃薯种薯生产中不可或缺的一环,双抗体酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)是一种简单、灵敏度高、特异性强、安全、快速、结果容易观察、适于商业化大量样品的检测方法。介绍了此方法的操作程序及其相配套的采样方法,并对多年实践中马铃薯组培苗和种薯生产中的检测数据进行了简要的统计分析。

血管内皮生长因子在胎儿生长受限患者及胎儿脐血中的表达

目的检测胎儿生长受限(FGR)患者外周血中血管内皮生长因子(VEGF)的水平,并探讨其与FGR的关系。方法2002年1月至2004年1月汕头大学医学院第二附属医院应用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测晚期正常妊娠妇女(妊娠组,30例)以及FGR(FGR组,37例)母体外周血中VEGF的水平和脐血中的VEGF水平。结果(1)正常孕晚期母体外周血VEGF为(753±157)ng/L,新生儿脐血VEGF为(1074±343)ng/L;(2)FGR组母体外周血VEGF水平(424±137)ng/L,新生儿脐血VEGF水平为(745±243)ng/L。FGR组母体外周血和新生儿脐带血中VEGF均明显低于妊娠组孕晚期水平(P<0001)。结论妊娠晚期VEGF水平显著下降可能是FGR发病机制中的一个重要因素。