酶联免疫双抗原夹心法检测HCV抗体的应用与分析

目的通过对第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂进行系列验证以及与第三代间接法HCV抗体检测试剂的平行比对,分析双抗原夹心试剂的检测性能。方法于2020年10月13日—2021年12月31日在淮安市中心血站用第四代试剂检测室内质控品、参考血清盘等样本,分析其重复性、批内和批间精密度以及敏感性和特异性等;运用第三代和第四代HCV抗体检测试剂平行检测同期无偿献血者标本等,比较其检测特异性和灵敏度。结果第四代试剂阴、阳性对照检测符合率100%;批内检测精密度4.36%,批间检测精密度6.88%;在确证试验结论为阳性的11例标本检测中,第四代试剂检测出9例,第三代试剂检测出3例,差异有统计学意义(χ^(2)=3.342,P<0.05);在确证试验结论为阴性的83237例标本中,第四代试剂检测假阳性12例,第三代试剂检测假阳性95例,差异有统计学意义(χ^(2)=32.238,P<0.05)。结论第四代双抗原夹心法HCV抗体检测试剂的重复性、灵敏度和特异性均明显高于第三代间接法HCV抗体检测试剂。

双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p抗体

目的建立一种检测马尔尼菲青霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法利用毕赤酵母系统表达重组马尔尼菲青霉特异性甘露糖蛋白Mp1p,并利用改良过碘酸钠法标记Mp1p,经棋盘滴定法建立一种可检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并检测100例健康人群对照血清、21例血培养确诊其他真菌感染病人血清和15例血培养确诊马尔尼菲青霉病人血清,联合本实验室前期建立的马尔尼菲青霉抗原检测方法评价其临床应用价值。结果成功建立一种检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,经健康人群对照及其他真菌感染病人血清评价特异度为100%(121/121),检测15例马尔尼菲青霉病人血清,Mp1p特异性抗体2例阳性,Mp1p特异性抗原12例阳性,Mp1p抗体与抗原联合检测可明显提高灵敏度,达到93.3%(14/15)。结论双抗原夹心ELISA法检测马尔尼菲青霉Mp1p特异性抗体具有高度的特异性,联合抗原检测可提高马尔尼菲青霉感染诊断率。

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

目的 建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。

重组人类T淋巴细胞白血病病毒抗原及双抗原夹心法ELISA抗体诊断试剂盒的研制

为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV Ⅰ和HTLV Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性。将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV Ⅰ型血清和19份HTLV Ⅱ型血清均能100%检出,而在5065份各种阴性血清中特异度为99 94%。用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV Ⅰ参比血清、17份HTLV Ⅱ参比血清和1024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV Ⅰ型血清和HTLV Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂。而GeneLabs试剂对HTLV Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检。另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂。这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂。

双抗原夹心ELISA法检测HCV抗体在无偿献血中的应用探讨

目的探讨双抗原夹心ELISA法(简称夹心法)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)在无偿献血中的应用。方法对42份以往一种或两种间接法抗-HCV反应性的献血者标本及2 831份无偿献血者标本同时采用一种夹心法和两种间接法试剂进行抗-HCV检测,对任一试剂检测为反应性的标本通过重组免疫印迹法(RIBA)作进一步确证。3种试剂检测均为阴性或RIBA结果为阴性判为真阴性,计算并对比各方法的特异性。结果 3种试剂检测均为阴性的标本2 816份,均为反应性的标本32份,双试剂反应性标本7份,单试剂反应性标本18份。采用RIBA试剂对57份反应性标本进行检测,确认结果阳性26份、不确定12份、阴性19份。19份RIBA确认阴性的标本中,双抗原夹心法、某国产间接法、某进口间接法分别有1例、8例、15例假阳性结果,特异性分别为99.96%(2 834/2 835)、99.72%(2 827/2 835)和99.47%(2 820/2 835)。结论夹心法诊断试剂的特异性高于间接法诊断试剂,为降低生物学假阳性,建议采用夹心法试剂检测抗-HCV。

双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体

目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。

双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉Afmp1cr/Afmp2cr抗体

目的建立检测烟曲霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。方法用毕赤酵母系统表达重组的烟曲霉特异性甘露聚糖蛋白片段Afmp1cr和Afmp2cr,经棋盘滴定法建立可检测烟曲霉特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法。用Afmp1cr和Afmp2cr分别免疫兔血清评估方法灵敏度,健康人血清、其它微生物感染者血清评估特异性,并检测曲霉感染者血清。结果 Afmp1cr双抗原夹心ELISA法可捕获1∶800稀释兔多抗血清中的抗体,Afmp2cr双抗原夹心ELISA法可捕获1∶3200稀释兔多抗血清中的抗体,两者均与其他真菌及细菌无交叉反应。2例确诊曲霉感染和1例拟诊曲霉感染患者血清中能检测出抗体。结论初步建立了检测anti-Afmp1cr/Afmp2cr抗体的双抗原夹心ELISA方法,可辅助诊断临床烟曲霉感染。

双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用

目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。

双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

目的建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价。方法用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察。用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较。结果双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗原1∶4 000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8%、7.4%和5.9%;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1%、9.6%和12.4%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2%。通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209。检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6%(93/114)和94.4%(356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6%vs 76.1%)。结论建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值。

酶联免疫吸附双抗原夹心法检测人畜布氏菌抗体的研究

目的为人畜布氏菌病血清学诊断、监测及流行病学调查提供实用和简便的一种酶免疫试验技术。方法在制备高滴度布氏菌抗原辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上,应用酶联免疫吸附双抗原夹心法即双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)、试管凝集试验(SAT)及虎红平板凝集试验(RBPT)对从山西省布氏菌病疫区收集的布氏菌病患者、布氏菌感染羊、牛、猪以及健康人、羊、牛、猪共计290份血清进行对比检测。结果上述3种试验对健康人、羊、牛、猪共计140份血清检查均为阴性反应,用DAgS-ELISA对布氏菌感染人、羊、牛、猪共计150份血清检查,其阳性率分别为91.4%、74.6%、66.7%及66.7%,从总体而言,检查的特异性及敏感性,以DAgS-ELISA优于SAT及RBPT。结论双抗原夹心酶联免疫吸附试验检测人畜布氏菌抗体,不仅特异、敏感、简便,而且制备一种布氏菌抗原酶结合物及其冻干制品,可用于人及各种动物布氏菌抗体的检测,值得推广应用。

EDTA-K_2对双抗原夹心ELISA检测HIV抗体的影响

目的探讨乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)对双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的影响。方法用HIV抗体阴性和阳性静脉血分别制备EDTA-K2浓度为1.5、2.5、5、10、15、20、25、30、35、40 mg/mL的抗凝血并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,测定各样本HIV抗体,读取吸光度(A)值,对A值与EDTA-K2浓度进行相关性分析;制备EDTA-K2最终浓度分别为1.5、2.5、5、10 mg/mL的HIV抗体阳性和阴性抗凝血各20份并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,平行测定各样本HIV抗体,血浆与血清样本进行配对t检验。结果 EDTA-K2浓度与HIV抗体阴性样本A值无相关关系(P=0.933),与HIV抗体阳性样本A值呈明显负相关(P<0.01);当EDTA-K2≥5 mg/mL时,HIV抗体阳性血浆样本A值明显低于血清样本(P<0.01),当EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,血浆与血清样本A值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论EDTA-K2对HIV抗体阴性样本测定无干扰;血浆EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定无干扰,EDTA-K2≥5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定呈明显负干扰。

双抗原夹心法检测抗丙型肝炎病毒抗体的应用研究

丙型肝炎病毒（HCV）是血液筛查的重要项目之一。目前主要检测方法为酶联免疫吸附试验（ELISA）,以间接法为主。双抗原夹心法试剂的应用可以减少非特异性的IgG的干扰,具有更好的特异性和灵敏度。本研究采用双抗原夹心法对间接法阳性样本进行检测,并结合核酸检测（NAT）进行确证,对2种方法进行比较分析,现报告如下。

临床应用重组SARS病毒双抗原夹心诊断试剂盒的检测效果评价

It is necessary to establish a rapid and accurate diagnostic method for controlling the epidemic of severe acute respiratory syndrome (SARS). Cooperating with Henan Bioengineering Research Center, we developed a new diagnostic kit for antibodies to SARS virus based on antigen-capturing ELISA. Here we report the clinical detection results obtained from several hospitals which used this diagnostic kit for SARS diagnosing. Comparing with other detection kits now used, the antigen-capturing ELISA has stronger specificity and higher sensitivity, and more fits for rapid confirming and diagnosing of SARS cases, SARS epidemiological investigation and SARS epidemic source research.

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体对比研究

目的:研究双抗原夹心法和间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的临床价值。方法:选取输血前、术前及孕前拟行HCV抗体检测的患者1674例,采用促凝管取患者空腹肘静脉血5ml,以3000r/min离心10min后取上清-20℃保存备用,分别采用间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV抗体,所有操作均严格按照试剂盒内说明书要求完成,采用一致性Kappa检验分析间接法和双抗原夹心法诊断价值。结果:上海科华间接法、英科新创间接法和北京万泰双抗原夹心法对HCV检出率分别为4.30%、4.06%和3.52%(P>0.05),且三种检测试剂吸光度值/临界值(S/CO)差异均无统计学意义(P>0.05);以确证实验结果为“金标准”,间接ELISA法检测HCV灵敏度为94.00%,特异度为98.27%,阳性预测值为62.67%,阴性预测值为99.81%,准确率为98.15%,一致性Kappa为0.743;双抗原夹心法检测HCV灵敏度为97.91%,特异度为99.26%,阳性预测值为79.66%,阴性预测值为99.94%,准确率为99.22%,一致性Kappa为0.875;McNemar检验结果显示,间接法和双抗原夹心法检测HCV结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:双抗原夹心ELISA法用于HCV检测灵敏度和特异度均明显高于间接ELISA法,对控制HCV感染和传播具有较高临床价值和应用前景。

抗HCV抗体双抗原夹心ELISA法试剂的应用

目前常用的第三代抗HCV抗体试剂为间接ELISA试剂，存在一定的假阳性，且检测抗HCV抗体的“窗口期”较长。抗HCV抗体双抗原夹心法ELISA试剂是检测抗HCV总抗体，缩短了“窗口期”。因对抗体进行两次特异性反应，可降低间接ELISA法引起的假阳性。为评价抗HCV抗体双抗原夹心法试剂的性能，我们分别对湖南、南京和苏州等地的样本测定，现将结果报告如下。

猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制

目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型(STLV-1型)抗体的双抗原夹心ELISA(dsELISA)检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型(HTLV-1型)的Env蛋白作为包被用抗原,建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件,并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好,批内重复试验变异系数(CV)<7%,批间重复试验CV<10%。对200份猴血清进行随机检测,与国际公认的诊断试剂盒(美国BioReliance公司)的符合率为97%。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的结果分析

目的比较双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的结果。方法以血站进行无偿献血的人次作为研究对象,其中28982份标本使用双抗原夹心法检测作为实验组,27603份标本使用间接法检测作为对照组。比较两组的阳性检出率、复检率以及复检合格率,分析两种试剂的临床检测结果。结果实验组标本中检测出16份双试剂阳性标本,27份单试剂阳性可疑标本,对27份可疑标本进行复检后,有26份合格,1份不合格;对照组标本中检测出14份双试剂阳性标本,42份单试剂阳性可疑标本,对42份可疑标本进行复检后,有22份合格,20份不合格。实验组复检率为0.09%,复检合格率为96.30%;对照组复检率为0.15%,复检合格率为52.4%。实验组复检率低于对照组,复检合格率高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。实验组双试剂阳性率为0.06%,对照组双试剂阳性率为0.05%,比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在血站对无偿献血人群进行检测时,可以选择双抗原夹心法对丙型肝炎病毒抗体进行检测,检测有效率要高于间接检测方法,降低了假阳性结果的出现几率,避免了血液浪费的现象出现,也减少了献血者淘汰的几率,值得在今后血站进行推广使用。

猴免疫缺陷病毒(SIV)双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

目的研制灵敏、特异的检测血清中猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus,SIV)的双抗原夹心ELISA(dsELISA)诊断试剂盒并进行初步应用。方法采用原核表达系统表达并纯化的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)包膜蛋白(gp41)作为包被用抗原,建立dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,研制ELISA诊断试剂盒,经敏感性、特异性和重复性试验考核试剂盒的质量,并与美国BIORELIANCE公司试剂盒进行比较,将结果经美国VRL验证,判断本试剂盒与美国BIORELIANCE公司试剂盒两者之间的符合率。结果该试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。4℃条件下能保存8个月,与其他血清无交叉反应,与美国BIORELIANCE公司试剂盒检测结果的符合率为96%。结论研制成功的实验猴SIV ELISA检测试剂盒可用于临床检测。

草鱼点状产气单胞菌单克隆抗体的制备与双抗原夹心ELISA法的建立

为了建立一种快速、准确能早期检测草鱼肠炎病原菌的方法,以患病草鱼为材料,制备点状产气单胞菌单克隆抗体(McAb),并鉴定其特异性和抗原表位;采用过碘酸钠方法,以辣根过氧化物酶标记单抗,用试管凝集试验测定其活性;建立点状产气单胞菌McAb的双抗原夹心ELISA检测方法,确定包被单抗和酶标单抗的浓度,并测定其灵敏度和特异性。结果:1)获得了2株特异性强和抗原表位不同的单抗,其ELISA效价为1∶16 000。2)辣根过氧化物酶标记的抗体活性为1∶640。3)建立了包被抗体稀释度为1∶800、酶标抗体稀释度为1∶1 600的双抗原夹心ELISA检测方法,该方法与点状产气单胞菌呈强阳性反应,与近似菌无交叉反应,灵敏性为7×103cfu/mL。结论:制备的点状产气单胞菌McAb的效价高、特异性强;建立的双抗原夹心ELISA方法操作简单、灵敏度高、特异性强,可应用于草鱼肠炎病原体的早期快速检测。