犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用

目的研究双抗体夹心酶联免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值。方法实验犬12只，分实验组和对照组，实验组用活化绵羊源原头蚴（G1型）作人工感染；感染后0～8周内收集粪便，56d宰杀实验犬，收集成虫；制备成虫抗原和虫体代谢／分泌抗原，蛋白酶K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔；绵羊抗血清用80％饱和硫酸铵沉淀、透析，兔抗血清过IgG亲和层析柱，分别获得纯化抗体；观察犬粪便在PBS液中-80℃冷冻3d或在含1％Formalin的PBS液中70℃～80℃加热8h的处理方法对检出结果的影响。运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测。结果试验系统的敏感性为92．3％，特异性为80％；粪抗原从感染后的第2～3周可检出；两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果；检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断；达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50％下降到2005年的17％。结论检测方法具有较高的特异性和敏感性；推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染；该方法可以在基层推广应用。

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测布氏菌抗原的实验研究

目的 建立检测布氏菌抗原特异、敏感和快速的试验方法。方法 在制备高滴度布氏菌抗体辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上 ,建立检测布氏菌抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (DAbS -ELISA) ,包括常规DAbS -ELISA及快速DAbS -ELISA。用建立的两种DAbS -ELISA法对布氏菌菌体抗原及可溶性抗原进行有关其特异性及敏感性对比观察 ;同时对模拟的这些抗原污染的饮用水标本进行对比观察。结果 常规DAbS -ELISA检测布氏菌 5 44A、16M、13 3OS及 10 4M的菌体抗原以及布氏菌 16M可溶性抗原的敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190万菌 /ml、2万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;用快速DAbS -ELISA法的敏感性分别为 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml;同时用这两种DAbS -ELISA检测上述抗原污染的饮用水标本其敏感性分别为 0 .2 2万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0万菌 /ml和 0 .0 12 μg/ml ;以及 2 2万菌 /ml、12 0万菌 /ml、190 0万菌 /ml、2 0 0万菌 /ml和 1.2 μg/ml。而且这两种DAbS -ELISA法检测不含布氏菌抗原的所有对照均为阴性反应。结论 双抗体夹心酶联免疫吸附试验是检测布氏菌抗原的特异、敏感、快速和适用的试验方法。

酶联免疫吸附双抗原夹心法检测人畜布氏菌抗体的研究

目的为人畜布氏菌病血清学诊断、监测及流行病学调查提供实用和简便的一种酶免疫试验技术。方法在制备高滴度布氏菌抗原辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上,应用酶联免疫吸附双抗原夹心法即双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)、试管凝集试验(SAT)及虎红平板凝集试验(RBPT)对从山西省布氏菌病疫区收集的布氏菌病患者、布氏菌感染羊、牛、猪以及健康人、羊、牛、猪共计290份血清进行对比检测。结果上述3种试验对健康人、羊、牛、猪共计140份血清检查均为阴性反应,用DAgS-ELISA对布氏菌感染人、羊、牛、猪共计150份血清检查,其阳性率分别为91.4%、74.6%、66.7%及66.7%,从总体而言,检查的特异性及敏感性,以DAgS-ELISA优于SAT及RBPT。结论双抗原夹心酶联免疫吸附试验检测人畜布氏菌抗体,不仅特异、敏感、简便,而且制备一种布氏菌抗原酶结合物及其冻干制品,可用于人及各种动物布氏菌抗体的检测,值得推广应用。

双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性的影响

目的:探究双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测灵敏度及特异性的影响。方法:选取2016年5月~2017年4月我院进行手术和血液透析前抗-HCV检测的患者270例,经血液筛查(荧光定量PCR法)抗-HCV阳性12例,抗-HCV阴性258例,采用双抗原夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和间接ELISA分别对270例患者血清进行抗-HCV检测,比较两种检测方法的特异性、灵敏度。结果:双抗原夹心ELISA法灵敏度、特异性均高于间接ELISA法(P<0.05)。结论:双抗原夹心酶联免疫吸附试验可提高丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性,可作为临床血液标本筛查首选方法。

3种酶联免疫吸附试验试剂检测丙型肝炎抗体结果分析

目的：通过对国产3种丙型肝炎病毒（HCV）抗体检测试剂盒间接法和夹心法检测的结果比较，分析评价双抗原夹心法试剂的性能。方法设计不同的试验方法，用3种试剂对收集的阳性和阴性标本进行丙型肝炎病毒抗体检测，对单试剂和双试剂呈阳性反应的标本同时进行第三组重组免疫印迹试验（RIBA）和核酸检测；另外，用已知浓度的质控物倍比稀释后，用3种试剂平行检测。对得到的所有检测结果进行比对，综合分析。结果与确证试剂相比，2种间接法试剂和1种夹心法试剂的假阳率分别为42.2％、57.8％和1.6％，阳性检出率均为100％，但夹心法的分析灵敏度比间接法高1～4倍。结论夹心法 ELISA 检测试剂在灵敏度、特异性方面优于间接法 ELISA 检测试剂。

双抗体夹心斑点金免疫渗滤法检测血吸虫循环抗原的现场应用

目的 探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法 (S- DIGFA)在现场的应用价值。方法 在原已建立的以抗 2 6 k Da GST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的 S- DIGFA的基础上 ,应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清共 1388份 ,并以双抗体夹心EL ISA(S- EL ISA)作对照。结果 用 S- DIGFA和 S- EL ISA平行检测血吸虫病中度流行区人群血清30 0份 ,阳性检出率分别为 15 .7%和 17.3% ;两法检测血吸虫病传播阻断地区人群血清 10 88份 ,阳性检出率分别为 3.9%和 3.7%。结论 S- DIGFA检测循环抗原可在现场扩大应用和作血清流行病学调查。

重组抗原Em18双抗原夹心酶联免疫吸附试验法检测泡球蚴抗体的建立及初步评价

目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18（rEm18）作为包被抗原,以辣根过氧化物酶（HRP）标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92％（46/50）,特异性为94％（47/50）,假阴性率为8％ （4/50）,假阳性率为6％ （3/50）,批内变异≤9.55％,批间变异≤14.79％,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断.

EDTA-K_2对双抗原夹心ELISA检测HIV抗体的影响

目的探讨乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)对双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的影响。方法用HIV抗体阴性和阳性静脉血分别制备EDTA-K2浓度为1.5、2.5、5、10、15、20、25、30、35、40 mg/mL的抗凝血并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,测定各样本HIV抗体,读取吸光度(A)值,对A值与EDTA-K2浓度进行相关性分析;制备EDTA-K2最终浓度分别为1.5、2.5、5、10 mg/mL的HIV抗体阳性和阴性抗凝血各20份并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,平行测定各样本HIV抗体,血浆与血清样本进行配对t检验。结果 EDTA-K2浓度与HIV抗体阴性样本A值无相关关系(P=0.933),与HIV抗体阳性样本A值呈明显负相关(P<0.01);当EDTA-K2≥5 mg/mL时,HIV抗体阳性血浆样本A值明显低于血清样本(P<0.01),当EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,血浆与血清样本A值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论EDTA-K2对HIV抗体阴性样本测定无干扰;血浆EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定无干扰,EDTA-K2≥5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定呈明显负干扰。

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的 建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法 采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果 包被单抗量为20μg/ml,酶标记单抗1∶200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P/N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg/ml,和其他支原体没有交叉反应; 147份临床标本PCR检测阳性率13. 6% (20 /147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12. 2% ( 18 /147 ),两者符合率达95. 9%。结论 建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。

双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体对比研究

目的:研究双抗原夹心法和间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体的临床价值。方法:选取输血前、术前及孕前拟行HCV抗体检测的患者1674例,采用促凝管取患者空腹肘静脉血5ml,以3000r/min离心10min后取上清-20℃保存备用,分别采用间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV抗体,所有操作均严格按照试剂盒内说明书要求完成,采用一致性Kappa检验分析间接法和双抗原夹心法诊断价值。结果:上海科华间接法、英科新创间接法和北京万泰双抗原夹心法对HCV检出率分别为4.30%、4.06%和3.52%(P>0.05),且三种检测试剂吸光度值/临界值(S/CO)差异均无统计学意义(P>0.05);以确证实验结果为“金标准”,间接ELISA法检测HCV灵敏度为94.00%,特异度为98.27%,阳性预测值为62.67%,阴性预测值为99.81%,准确率为98.15%,一致性Kappa为0.743;双抗原夹心法检测HCV灵敏度为97.91%,特异度为99.26%,阳性预测值为79.66%,阴性预测值为99.94%,准确率为99.22%,一致性Kappa为0.875;McNemar检验结果显示,间接法和双抗原夹心法检测HCV结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:双抗原夹心ELISA法用于HCV检测灵敏度和特异度均明显高于间接ELISA法,对控制HCV感染和传播具有较高临床价值和应用前景。

抗HCV抗体双抗原夹心ELISA法试剂的应用

目前常用的第三代抗HCV抗体试剂为间接ELISA试剂，存在一定的假阳性，且检测抗HCV抗体的“窗口期”较长。抗HCV抗体双抗原夹心法ELISA试剂是检测抗HCV总抗体，缩短了“窗口期”。因对抗体进行两次特异性反应，可降低间接ELISA法引起的假阳性。为评价抗HCV抗体双抗原夹心法试剂的性能，我们分别对湖南、南京和苏州等地的样本测定，现将结果报告如下。

双抗原夹心法与间接ELISA法在HCV抗体检测中的应用比较

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心法检测、间接ELISA法检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心法检测及间接ELISA法检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心法检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA法检测(82.09%)、(84.31%),差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心法检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA法检测(75.00%)、(91.49%)、(60.00%),但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心法检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA法检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA法相比,双抗原夹心法检测HCV抗体具有更高的准确度、灵敏度与特异度,可为临床诊断与治疗提供依据,对控制疾病发展具有重大意义,可作为HCV抗体筛查的首选方式,值得临床推广应用。

双抗原夹心法与间接ELISA法在HCV抗体检测中的应用比较

目的探讨双抗原夹心法与间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心法检测、间接ELISA法检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心法检测及间接ELISA法检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心法检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA法检测[(82.09%)、(84.31%)],差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心法检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA法检测[(75.00%)、(91.49%)、(60.00%)],但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心法检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA法检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA法相比,双抗原夹心法检测HCV抗体具有更高的准确度、灵敏度与特异度,可为临床诊断与治疗提供依据,对控制疾病发展具有重大意义,可作为HCV抗体筛查的首选方式,值得临床推广应用。

双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV的临床价值研究

目的研究双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的临床价值。方法选取2018年1月至2019年12月在血站无偿献血的486份标本为研究对象。收集无偿献血筛查标本并均实施间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法检查。观察间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法诊断抗-HCV结果,并以荧光定量聚合酶链式反应(PCR)血液筛查结果为金标准,计算间接ELISA法、双抗体夹心ELISA法诊断抗-HCV特异度、敏感度及准确率。结果经荧光定量PCR血液筛查,486份标本中抗HCV阳性标本19例,抗HCV阴性标本467例;间接ELISA法诊断抗HCV阳性、抗HCV阴性分别为96例、390例;双抗体夹心ELISA法诊断抗HCV阳性、抗HCV阴性分别为28例、458例;双抗体夹心ELISA法诊断抗-HCV敏感度(94.74%)、特异度(97.86%)、准确率(97.74%)高于间接ELISA法(63.16%、82.01%、81.28%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV敏感度、特异度及准确率较高,有利于提升抗HCV阳性检出率,降低由于生物学假阳性所致的血液报废及献血者流失,可作为血液样本抗-HCV筛查优选方法。

应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体的结果比较

目的比较应用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法和间接ELISA法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的检查结果,为临床血液样本抗-HCV的筛查提供参考依据。方法收集2017年6月至2018年2月某院检测的1 300份住院患者传染病丙肝筛查标本作为研究对象,经荧光定量PCR血液筛查,其中抗-HCV阴性标本1 221份,抗-HCV阳性标本79份,所有血液样本均分别采用双抗原夹心ELISA法和间接ELISA法进行检测,记录两种检测方法的结果,并与荧光定量PCR血液筛查结果进行对照,计算两种检测方法的灵敏度、特异度、符合率等指标。结果双抗原夹心ELISA法检测出抗-HCV阳性标本1 174份,其中真阳性1 173份,假阳性1份。间接ELISA法检测出抗-HCV阳性标本1 072份,其中真阳性1 060份,假阳性12份。双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV的灵敏度、特异度以及符合率分别为96.07%(1 173/1 221)、98.73%(78/79)、96.23%(1 251/1 300),间接ELISA法检测抗-HCV的灵敏度、特异度以及符合率分别为86.81%(1 060/1 221)、84.81%(67/79)、86.69%(1 127/1 300),双抗原夹心ELISA法检测的灵敏度、特异度以及符合率均明显高于间接ELISA法,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与间接ELISA法比较,双抗原夹心ELISA法检测抗-HCV的灵敏度和特异性明显提高,能提高临床检测的准确性,降低假阳性,减少血液的浪费,可作为临床血液样本抗-HCV筛查的首选方法。

广西人类免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者合并马尔尼菲篮状菌感染的特征及Mp1p抗原快速筛检的研究

为调查广西人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者/艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)患者合并马尔尼菲篮状菌(Talaromyces marneffei,TM)感染的特征并评价TM Mp1p(一种甘露糖蛋白)抗原试剂盒(酶联免疫吸附试验)的临床检测效果,本研究收集广西壮族自治区柳州市人民医院2018年8月—2019年6月确诊的200例HIV感染者/AIDS患者的信息并采集其血浆和咽拭子,获得血浆样本118份、咽拭子样本111份,用TM抗原试剂盒检测,并与病原学培养结果进行比较。结果显示,200例HIV感染者/AIDS患者中TM总体感染率为10%,且CD4^(+)T细胞计数越低者TM感染率越高,CD4^(+)T细胞≤50/μL时TM感染率高达29%。差异性分析显示,与HIV-1感染者相比,20例HIV-1合并TM感染者的CD4^(+)T细胞、淋巴细胞、血红蛋白、白蛋白、血小板水平下降,差异有统计学意义(P<0.001),门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、AST/丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和D-二聚体升高,差异有统计学意义(P<0.05)。以病原学培养结果为金标准,TM抗原试剂盒检测118份血浆样本的灵敏度为80%(95%CI:51.1~94.7),特异度为97.1%(95%CI:91.1~99.2),检测111例咽拭子样本的灵敏度为41.7%(95%CI:16.5~71.4),特异度为100%(95%CI:0.95~1)。结果表明,TM抗原试剂盒检测血浆样本的灵敏度良好,特异度高,适合临床TM感染的筛检。因此,对CD4^(+)T细胞计数低的HIV感染者/AIDS患者应及早进行Mp1p抗原快速筛检,做到早发现、早治疗,从而降低TM感染的发病率和死亡率。

卵裂期胚胎sHLA-G抗原表达及其与胚胎发育和种植的关系

【目的】通过对卵裂期胚胎培养液可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)的定性和定量分析,了解卵裂期胚胎sHLA-G抗原表达及其与胚胎发育和种植的关系。【方法】应用免疫发光WesternBlot了解卵裂期胚胎sHLA-G和HLA-I类抗原的表达情况;应用双抗体夹心法ELISA了解卵裂期胚胎培养液中sHLA-I类抗原的表达量与胚胎发育和种植的关系。【结果】①胚胎培养液中以sHLA-G抗原为主,其它sHLA-I类抗原量极少或不存在,因此用培养液中sHLA-I类抗原的量来估计培养液中sHLA-G的含量是可行的。②卵裂期胚胎培养液中1级胚胎sHLA-I类抗原的绝对吸光度(A)值为0.077±0.006;2级胚胎为0.064±0.002;3级胚胎为0.043±0.002;3组比较差异有显著性(P=0.014)。胚胎种植率与胚胎sHLA-I类抗原绝对A值的相关系数为0.426,P=0.004。它们的表达量与胚胎发育和种植的有关。【结论】卵裂期胚胎培养液中sHLA-G的表达量与胚胎发育和种植的有关。

3种不同的免疫检验方法检测人类免疫缺陷病毒的可靠性

目的探讨3种不同的免疫检验方法检测人类免疫缺陷病毒的可靠性。方法选择2018年10月至2019年10月医院检验科的50份血清样本,所有样本均使用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、金免疫层析法及化学发光法3种免疫检验方法予以检测,以免疫印迹法的检测结果为金标准,比较3种不同的免疫检验方法检测人类免疫缺陷病毒的灵敏度、特异度及准确度。结果双抗原夹心ELISA检测人类免疫缺陷病毒的灵敏度、特异度及准确度均高于金免疫层析法与化学发光法,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与金免疫层析法及化学发光法比较,双抗原夹心ELISA检测人类免疫缺陷病毒的可靠性较高。