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双抗夹心酶联免疫吸附法检测沙门氏菌 被引量:35
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作者 伍燕华 牛瑞江 +4 位作者 赖卫华 山珊 刘道峰 倪小琴 冯荣华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期62-65,共4页
沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门... 沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门氏菌单克隆抗体C1359作为检测抗体,建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法可以检测A、B、C、D、E等五种典型的沙门氏菌,对沙门氏菌纯培养液的最低检测量为1×104CFU/mL,与其他杂菌不存在交叉反应,具有较好的灵敏性和特异性。 展开更多
关键词 沙门氏菌 多克隆抗体 双抗夹心酶联免疫吸附法
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酶联免疫荧光法与双抗夹心酶联免疫吸附法测定屋尘螨组分IgG4的比较
2
作者 彭洁雅 孙宝清 郑佩燕 《广东医学》 CAS 北大核心 2015年第17期2689-2690,共2页
目的运用酶联免疫荧光法(UniCAP法)和双抗夹心酶联免疫吸附法(Fooke法)分别测定经特异性免疫治疗(SIT)的患儿血清sIgG4水平,评价两种免疫定量检测方法的相互关系。方法对45例成功进行皮下SIT的患儿血清分别用UniCAP法和Fooke法检... 目的运用酶联免疫荧光法(UniCAP法)和双抗夹心酶联免疫吸附法(Fooke法)分别测定经特异性免疫治疗(SIT)的患儿血清sIgG4水平,评价两种免疫定量检测方法的相互关系。方法对45例成功进行皮下SIT的患儿血清分别用UniCAP法和Fooke法检测治疗前、治疗6~8个月后、治疗12~14个月后sIgG4水平。结果与治疗前相比较,在治疗6~8个月和治疗12~14个月后,UniCAP法检测45例患儿血清sIgG4水平全部均有不同程度升高,Fooke法在SIT后6~8个月和12~14个月后分别有40和43例患儿sIgG4水平有不同程度升高,但两种方法检测sIgG4结果升高幅度有差异。结论对于sIgG4测定,SIT后,Uni CAP法比Fooke法测定值升高的幅度更明显。 展开更多
关键词 sIgG4 免疫荧光法 双抗夹心酶联免疫吸附法
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转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究 被引量:6
3
作者 王敏 张亮 +4 位作者 张威 曹振 谭桂玉 南铁贵 王保民 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1555-1560,共6页
将克隆到的pat基因构建原核表达载体pET30(+)-pat并在大肠杆菌中进行表达,分离纯化得到高纯度pat蛋白。用所得到的pat蛋白制备了兔多克隆抗体和鼠单抗2F6。多抗效价〉8000,单抗效价为5×10^4;单抗为IgGl类,轻链为,(型。基... 将克隆到的pat基因构建原核表达载体pET30(+)-pat并在大肠杆菌中进行表达,分离纯化得到高纯度pat蛋白。用所得到的pat蛋白制备了兔多克隆抗体和鼠单抗2F6。多抗效价〉8000,单抗效价为5×10^4;单抗为IgGl类,轻链为,(型。基于抗pat蛋白单克隆抗体和兔多克隆抗体建立了双抗夹心酶联免疫分析方法(SandwichELISA)。检测范围为1.6~100μg/L,线性回归方程y=0.6914x-2.572,决定系数为0.9951。用所建立的方法测定了5个转基因抗虫棉和2个非转基因棉花品种叶片中pat蛋白的含量,其中转基因抗虫棉中的3个品种检测出pat蛋白,其余均未检出pat蛋白。 展开更多
关键词 转基因作物 pat基因 pat蛋白 双抗夹心酶联免疫检测法
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金黄色葡萄球菌新型肠毒素I双抗夹心-酶联免疫检测方法的建立 被引量:7
4
作者 朱安妮 唐俊妮 +3 位作者 赵燕英 汤承 陈娟 刘骥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第16期193-198,共6页
目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体... 目的:建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I(staphylococcal enterotoxin I,SEI)的双抗夹心酶联免疫吸附方法(double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)。方法:利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)的最佳稀释度,再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果:抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L,抗SEI兔血清稀释度1∶2 000,酶标二抗稀释度1∶6 000;1×磷酸缓冲盐溶液(p H 7.4)为最佳包被缓冲液;最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x+0.042 9,R2=0.993 3;灵敏度为0.5μg/L,精密度批内变异低于10%,批间变异低于15%,除巴氏杀菌牛乳外,对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论:本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。 展开更多
关键词 双抗夹心酶联免疫吸附 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌肠毒素I 检测方法
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抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立
5
作者 郭景玉 朱紫雯 +2 位作者 王津 杨瑞馥 宋亚军 《生物技术通讯》 CAS 2009年第4期488-490,519,共4页
目的:制备针对嗜肺军团菌血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。方法:用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法... 目的:制备针对嗜肺军团菌血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。方法:用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果:研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM(2株)、IgG3(1株)和IgG1(5株);利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2.6×105cfu/mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心ELISA检测方法。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌血清8型 单克隆抗体 双抗夹心酶联免疫吸附试验
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金黄色葡萄球菌肠毒素P双抗夹心酶联免疫检测方法的建立 被引量:8
6
作者 杜玄 赵燕英 +4 位作者 刘骥 龙虎 王洪志 田万帆 唐俊妮 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2018年第4期264-269,共6页
本研究目的是建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEP的双抗夹心酶联免疫方法。通过对单克隆抗体和抗血清质量浓度、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)最佳稀释度、不同种类包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HR... 本研究目的是建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEP的双抗夹心酶联免疫方法。通过对单克隆抗体和抗血清质量浓度、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔Ig G(Ig G/HRP)最佳稀释度、不同种类包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺(TMB)显色时间等条件进行优化;并采用灵敏度、批内和批间变异和加标回收率等对方法进行评价。结果表明:该方法中抗SEP单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为3.28μg/m L,抗SEI兔血清的质量浓度为3.14μg/m L,酶标二抗稀释度1:3000,1×磷酸缓冲盐溶液(pH 7.4)为最佳包被缓冲液,封闭时间为1 h,抗原孵育时间为90 min,酶标二抗反应时间为30 min,TMB显色时间15 min。该方法回归方程为y=0.0313x+0.0262,R2=0.9946。灵敏度为1.80μg/m L,精密度批内变异低于6%,批间变异低于15%,对LB肉汤、牛肉糜和熟米饭回收率达90%以上。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 新型肠毒素SEP 双抗夹心酶联免疫吸附 优化
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双抗夹心法酶联免疫吸附试验影响因素探析 被引量:5
7
作者 何莉 孙海 +6 位作者 胡松 莫春芬 郭慧杰 赖翼 刘阳 邹强 罗兴燕 《检验医学与临床》 CAS 2016年第7期873-875,共3页
目的探析双抗夹心法酶联免疫吸附试验中牛血清清蛋白封闭,吐温20及浓度,样品与检测抗体的加样方式及孵育温度对酶联免疫吸附试验检测结果的影响。方法双抗夹心法酶联免疫吸附试验检测人白细胞介素(IL)-1Ra细胞因子作为模型,检测封闭条件... 目的探析双抗夹心法酶联免疫吸附试验中牛血清清蛋白封闭,吐温20及浓度,样品与检测抗体的加样方式及孵育温度对酶联免疫吸附试验检测结果的影响。方法双抗夹心法酶联免疫吸附试验检测人白细胞介素(IL)-1Ra细胞因子作为模型,检测封闭条件,吐温20及其不同浓度,样品与检测抗体分开孵育及共同孵育,酶联孵育温度对标准品浓度与OD值关系的影响。结果酶联免疫吸附试验不封闭、洗液吐温浓度为0.05%且孵育温度为37℃的R^2=0.995 7;BSA封闭的R^2=0.981 1;洗液中吐温浓度0.005%时R^2=0.991 5,0.5%时R^2=0.9868;样品和检测抗体一同孵育1h或2h的R^2分别为0.964 5和0.874 2;孵育温度为25℃的R^2=0.996 1。结论BSA封闭步骤对低浓度的样品检测灵敏度不强;样品和检测抗体及酶稀释液中必须含有吐温20且浓度在0.05%条件下最合适;样品和检测抗体共同孵育会影响对高浓度样品的检测;37℃和25℃的孵育温度条件下的酶联免疫吸附试验检测灵敏度没有差异,但25℃孵育可以降低OD值背景。 展开更多
关键词 影响因素 标准操作流程 双抗夹心免疫吸附试验
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酶联免疫吸附分析双抗夹心法检测临床鼻咽抽吸物中呼吸道合胞病毒 被引量:3
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作者 孙永鹏 靳输梅 +5 位作者 詹炉停 温桂平 赵敏 张伟 夏宁邵 郑子峥 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期505-510,共6页
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起5周岁以下儿童下呼吸道感染的主要病原体.目前常用的试剂盒是美国Diagnostic Hybrids公司研发的7项呼吸道病毒检测试剂盒,但其价格昂贵,且需荧光显微镜辅助诊断,不利于在基层医... 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起5周岁以下儿童下呼吸道感染的主要病原体.目前常用的试剂盒是美国Diagnostic Hybrids公司研发的7项呼吸道病毒检测试剂盒,但其价格昂贵,且需荧光显微镜辅助诊断,不利于在基层医疗机构中推广,国内尚无上市的快速诊断试剂用于临床检测.为此建立用于RSV抗原检测的早期快速诊断试剂,并以反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测为参比,同时使用酶联免疫吸附分析(ELISA)双抗夹心法和免疫荧光法对112份临床鼻咽抽吸物(NPA)样本进行检测.ELISA双抗夹心法和免疫荧光法的灵敏度分别为79.31%和74.14%,特异度分别为100%和96.30%,Kappa值分别为0.787 1和0.689 5,两者均与RT-PCR检测结果具有高度一致性.此外,将ELISA双抗夹心法与免疫荧光法比较,两者无显著差异(p>0.05).综上,ELISA双抗夹心法操作简便,特异性高,有望代替进口检测试剂盒完成RSV感染的早期快速诊断. 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 融合蛋白 免疫吸附分析双抗夹心 快速诊断
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酶联免疫吸附试验定量检测血清肝素酶方法的建立及应用 被引量:4
9
作者 田曙光 虞立霞 +3 位作者 李素波 高红伟 王颖丽 宫锋 《生物技术通讯》 CAS 2009年第4期545-547,共3页
目的:建立一种简便、微创的血清肝素酶酶联免疫吸附(ELISA)定量检测方法,并对肿瘤患者和正常人血清肝素酶进行比较,初步探讨血清肝素酶水平与肿瘤发生、发展的关系。方法:选择鼠抗人肝素酶单克隆抗体和兔抗人肝素酶多克隆抗体,建立双抗... 目的:建立一种简便、微创的血清肝素酶酶联免疫吸附(ELISA)定量检测方法,并对肿瘤患者和正常人血清肝素酶进行比较,初步探讨血清肝素酶水平与肿瘤发生、发展的关系。方法:选择鼠抗人肝素酶单克隆抗体和兔抗人肝素酶多克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法,并利用此方法检测健康献血者和肿瘤患者血清中的肝素酶水平。结果:组内数据稳定,可重复;肿瘤患者血清中肝素酶D450nm值高于健康献血者。结论:所建立的血清肝素酶ELISA检测方法灵敏、高效,可用于肿瘤的辅助诊断。 展开更多
关键词 肿瘤 肝素 双抗夹心酶联免疫吸附试验
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牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 刘金 王丽威 岳喜庆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第14期74-79,共6页
将牛免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛Ig G单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛Ig G单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中Ig G质量... 将牛免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛Ig G单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛Ig G单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中Ig G质量浓度,该方法在7.8~1 000 ng/m L范围内有良好的线性关系,最低检出限为7.06 ng/m L,批内变异系数为4.52%,批间变异系数为4.94%,回收率为91.85%~102.45%。此法操作简便、准确度高、稳定性好,可用于实际牛初乳样品的快速检测。 展开更多
关键词 牛初乳 免疫球蛋白G 单克隆抗体 双抗夹心酶联免疫吸附法
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双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆 被引量:9
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作者 李小宇 张春雨 +5 位作者 郭东全 张淋淋 尤晴 董英山 王永志 李启云 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期222-225,共4页
为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大... 为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125μg/m L,包被酶标板,37℃孵育1 h后4℃静置过夜,检测样品37℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25μg/m L,37℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/m L,大豆蛋白体系中为8 ng/m L;重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。 展开更多
关键词 BAR 双抗夹心酶联免疫吸附 大豆 检测
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北京地区设施草莓8种病毒的酶联免疫吸附测定检测 被引量:8
12
作者 王佳 崔高峰 +2 位作者 祝宁 任俊达 尚巧霞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期1048-1056,共9页
【背景】病毒可以随同草莓无性繁殖材料传播扩散,导致产量和品质下降。选育无病毒种苗是草莓病毒病防治的主要措施,高效、灵敏的检测技术可为草莓病毒病防治提供技术保障。【目的】为明确8种能够侵染草莓的病毒在北京地区设施草莓上的... 【背景】病毒可以随同草莓无性繁殖材料传播扩散,导致产量和品质下降。选育无病毒种苗是草莓病毒病防治的主要措施,高效、灵敏的检测技术可为草莓病毒病防治提供技术保障。【目的】为明确8种能够侵染草莓的病毒在北京地区设施草莓上的发生情况,应用酶联免疫吸附测定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)进行检测。【方法】将待检病毒的阳性对照样品分别进行间接法和双抗夹心法(Double-Antibody Sandwich,DAS)ELISA检测,以空白对照和阴性对照作参照比较,确定应用DAS-ELISA检测体系结合田间症状对北京地区采集的草莓样品进行病毒检测,并利用逆转录-聚合酶链式反应和序列测定方法对阳性样品进一步验证,确定检测结果的可靠性。【结果】侵染北京地区设施草莓的病毒为草莓轻型黄边病毒(StrawberryMildYellowEdgeVirus,SMYEV)。‘红颜’品种的病毒检出率为8.1%,‘天香’品种的检出率为2.7%,其他品种均未检出病毒。【结论】研究结果为北京地区设施草莓病毒的检测以及草莓病毒病的科学防治提供理论依据。 展开更多
关键词 草莓病毒 双抗夹心酶联免疫吸附测定 逆转录-聚合链式反应 田间症状 病毒检测
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实时荧光RT-PCR检测辣椒轻斑驳病毒的初步研究 被引量:8
13
作者 郭京泽 李兴红 +3 位作者 廖芳 张文明 刘鹏 刘跃庭 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期117-120,共4页
本研究选取辣椒轻斑驳病毒PMMoV、烟草花叶病毒TMV、黄瓜花叶病毒CMV和马铃薯Y病毒PVY作为试验材料,根据PMMoV衣壳蛋白(CP)RNA的序列特异性位点,设计出Taqman荧光探针及其引物,采用实时荧光RT-PCR技术对PMMoV进行快速检测,同时与ELISA... 本研究选取辣椒轻斑驳病毒PMMoV、烟草花叶病毒TMV、黄瓜花叶病毒CMV和马铃薯Y病毒PVY作为试验材料,根据PMMoV衣壳蛋白(CP)RNA的序列特异性位点,设计出Taqman荧光探针及其引物,采用实时荧光RT-PCR技术对PMMoV进行快速检测,同时与ELISA方法进行了灵敏度比较,结果表明:该方法具有较高的灵敏度及较强的特异性,PMMoV检测结果为阳性,TMV、CMV和PVY均无荧光信号,为阴性,灵敏度是传统的ELISA方法的100倍,而且大大缩短了检测时间。该方法快速、准确、灵敏、简便、安全,具有实际应用价值,适用于植物病毒病害的快速检测。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 实时荧光RT-PCR 双抗夹心酶联免疫吸附法
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白介素-2在分泌性中耳炎中的临床意义 被引量:16
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作者 陈穗俊 梁象逢 +3 位作者 郑亿庆 刘伟 许耀东 刘翔 《中华耳科学杂志》 CSCD 2005年第2期93-96,共4页
目的本实验对分泌性中耳炎患者的中耳积液标本进行白介素-2(IL-2)浓度检测和分析,以探索其在分泌性中耳炎中的临床意义。方法用双抗夹心酶联免疫吸附法检测中耳积液、患者血清及对照血清中IL-2的浓度。结果实验组中耳积液中IL-2的浓度... 目的本实验对分泌性中耳炎患者的中耳积液标本进行白介素-2(IL-2)浓度检测和分析,以探索其在分泌性中耳炎中的临床意义。方法用双抗夹心酶联免疫吸附法检测中耳积液、患者血清及对照血清中IL-2的浓度。结果实验组中耳积液中IL-2的浓度明显高于血清中的浓度;实验组血清中IL-2的浓度较对照组血清高;急性期组IL-2含量较慢性期组高;行首次穿刺及二次穿刺患者之间,中耳积液中IL-2的浓度无明显差异(P>0.05);而行三次或三次以上穿刺者中耳积液中该因子的浓度则明显升高(P<0.01)。结论中耳积液中的IL-2是由中耳腔局部产生的,而非单纯由血液中渗透而来;中耳积液中IL-2的高浓度可作为分泌性中耳炎转为慢性病程或迁延不愈的参考。 展开更多
关键词 分泌性中耳炎 临床意义 白介素-2 双抗夹心酶联免疫吸附法 中耳积液 IL-2 检测和分析 对照血清 迁延不愈 慢性病程 实验组 浓度 患者 对照组 慢性期 急性期 穿刺 中耳腔 三次
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3种方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒的灵敏度对比分析 被引量:8
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作者 李海明 沈建国 +1 位作者 吴祖建 陈启建 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第17期269-272,共4页
以带有黄瓜绿斑驳花叶病毒的黄瓜叶片为材料,应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、核酸斑点杂交(NASH)技术,进行检测灵敏度比较研究。3种方法检测灵敏度试验结果表明:DAS-ELISA、RT-PCR和斑... 以带有黄瓜绿斑驳花叶病毒的黄瓜叶片为材料,应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、核酸斑点杂交(NASH)技术,进行检测灵敏度比较研究。3种方法检测灵敏度试验结果表明:DAS-ELISA、RT-PCR和斑点杂交可以检测出黄瓜病叶的最小量分别是39.6μg、0.25ng和5ng。RT-PCR检测灵敏度高于地高辛标记的核酸斑点杂交技术,DAS-ELISA检测灵敏度最低。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 反转录-聚合链式反应 双抗夹心酶联免疫吸附测定 核酸斑点杂交 检测技术
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类风湿性关节炎患者血清和滑液中血管内皮生长因子与病损程度的相关性 被引量:4
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作者 刘巧红 沈凌汛 +2 位作者 吴清敏 滕云 王慧 《中国临床康复》 CAS CSCD 2004年第21期4242-4243,共2页
目的:研究类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者血清、滑液中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)蛋白水平,探讨其在RA致病中的作用。方法:应用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法分别测定RA患者(n=36)血清、滑液... 目的:研究类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)患者血清、滑液中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)蛋白水平,探讨其在RA致病中的作用。方法:应用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法分别测定RA患者(n=36)血清、滑液中VEGF蛋白水平。以骨关节炎(n=9)及因外伤截肢的正常人(n=13)作对照。结果:RA患者血清、滑液中VEGF水平(ng/L)分别为186±77,262±84;而对照组分别为48±17,63±27。RA患者血清、滑液中VEGF蛋白水平均显著高于对照组(t=1.63,P=0.008;t=1.72,P=0.006),且与关节疼痛数、关节肿胀数、晨僵时间、红细胞沉降率、C反应蛋白、类风湿因子滴度均呈正相关(r=0.73~0.83,P均<0.05)。结论:RA患者VEGF蛋白的过度表达是导致RA发病的重要因素。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 血清 滑液 血管内皮生长因子 病损程度 双抗夹心酶联免疫吸附 测定
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小鼠17β-hsd10的克隆、表达及双抗夹心ELISA方法的建立 被引量:2
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作者 刘传志 牛莹莹 +2 位作者 陈元安 武成 于源华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1774-1780,共7页
原核表达小鼠17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-hsd10),制备抗17β-hsd10多克隆抗体,建立17β-hsd10双抗夹心酶联免疫检测方法 (Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。采用RT-PCR技术克隆得到小鼠肝脏17β-hsd 10基因,构建原核表达体系... 原核表达小鼠17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-hsd10),制备抗17β-hsd10多克隆抗体,建立17β-hsd10双抗夹心酶联免疫检测方法 (Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。采用RT-PCR技术克隆得到小鼠肝脏17β-hsd 10基因,构建原核表达体系p ET15b-17β-hsd10/Escherichia coli BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并优化表达条件;目的蛋白用His融合蛋白纯化柱(His-Binding-resin)纯化并免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,免疫血清总Ig G采用硫酸铵沉淀法纯化,用获得的高效价鼠源和兔源两种多克隆抗体,建立17β-hsd10双抗夹心酶联免疫检测方法。表达蛋白约为29.5 k Da,纯化后浓度为1.5 mg/m L,鼠源和兔源多克隆抗体效价分别为1.25×104和2.5×104,建立的检测方法对于多种羟基类固醇脱氢酶无交叉反应,特异性良好,可检出含量约为0.05-0.1μg/m L的阳性血清。建立的17β-hsd10双抗夹心ELISA方法,简便、快速、敏感,适合实验室研究科研广泛应用。并可能为检测阿尔茨海默病提供新思路和方法。 展开更多
关键词 17β-羟基类固醇脱氢10 双抗夹心酶联免疫方法 多克隆抗体
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屠宰猪血清及肝脏中人乙型肝炎表面抗原的检测 被引量:8
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作者 佘锐萍 郑志伟 +5 位作者 江维文 陈明勇 严晋荣 庞万勇 周岳 李德环 《肉品卫生》 1998年第10期1-3,共3页
采用人乙型肝炎表面抗原HBsAg快速检测试剂盒,对北京某肉联厂的90份屠宰猪血清中乙型肝炎表面抗原进行了检测,同时采用石蜡切片,做地衣红染色对同批129份猪肝进行了染色观察。结果表明:在被检测的90份血清中,有8份呈现阳性反应,检出率8.... 采用人乙型肝炎表面抗原HBsAg快速检测试剂盒,对北京某肉联厂的90份屠宰猪血清中乙型肝炎表面抗原进行了检测,同时采用石蜡切片,做地衣红染色对同批129份猪肝进行了染色观察。结果表明:在被检测的90份血清中,有8份呈现阳性反应,检出率8.9%:129份猪肝中有11份呈现地衣红染色阳性反应,阳性率为8.5%。 展开更多
关键词 屠宰猪血清 人乙型肝炎表面抗原 双抗夹心酶联免疫检测 肝地衣 红染色
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一种豇豆重花叶病毒RT-PCR检测方法的研究 被引量:2
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作者 李彬 吴翠萍 +1 位作者 粟寒 安榆林 《植物检疫》 北大核心 2010年第4期28-32,共5页
对一种豇豆重花叶病毒(Cowpeas evere mosaic virus,CPSMV)反转录PCR分子检测方法进行了研究。利用从美国菌种保藏中心和德国微生物毒株保藏中心引进的CPSMV标准毒株,设计了一对特异性简并引物(CPSMVf/CPSMVr),建立了CPSMVRT-PCR检测方... 对一种豇豆重花叶病毒(Cowpeas evere mosaic virus,CPSMV)反转录PCR分子检测方法进行了研究。利用从美国菌种保藏中心和德国微生物毒株保藏中心引进的CPSMV标准毒株,设计了一对特异性简并引物(CPSMVf/CPSMVr),建立了CPSMVRT-PCR检测方法。该方法具有良好的扩增反应及特异性,灵敏度可达1pg的总病叶组织RNA量。CPSMV双抗夹心酶联免疫法(DAS-ELISA)灵敏度为10μg叶组织。该方法适用于豇豆等豆类蔬菜种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测。 展开更多
关键词 豇豆重花叶病毒 简并引物 反转录PCR 双抗夹心酶联免疫
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慢性肾功能衰竭维持性血液透析患者血清心肌肌钙蛋白的变化 被引量:1
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作者 赵卫红 戎其飞 +3 位作者 王笑云 潭若芸 毛慧娟 沈霞 《中国血液净化》 2003年第5期248-250,共3页
目的观察慢性肾功能衰竭(CPF)维持性血液透析患者心肌肌钙蛋白(cTnI)的异常变化。方法应用双抗夹心酶联免疫吸附法(FLISA)检测115例维持性血液透析患者和64例正常人的cTnI。结果 慢性肾功能衰竭组的血清cTnI水平为(0.20±0.52)ng/ml... 目的观察慢性肾功能衰竭(CPF)维持性血液透析患者心肌肌钙蛋白(cTnI)的异常变化。方法应用双抗夹心酶联免疫吸附法(FLISA)检测115例维持性血液透析患者和64例正常人的cTnI。结果 慢性肾功能衰竭组的血清cTnI水平为(0.20±0.52)ng/ml,显著高于健康对照组(0.03±0.05)ng/ml(P<0.05)。115例慢性肾功能衰竭维持性血液透析患者中31(27.0%)例有不同程度的胸闷、心悸等症状;有症状患者血清cTnI为(0.49±0.93)ng/ml,显著高于无症状患者(0.09±0.11)ng/ml,P<O.05。无症状者中仍有10例(11.9%)血清cT-nI增高。结论 慢性肾功能衰竭血液透析患者cTnI明显高于正常人群,其中部分无临床症状,提示慢性肾功能衰竭患者心肌损伤较为普遍且部分为亚临床损伤。 展开更多
关键词 慢性肾功能衰竭 维持性血液透析 心肌肌钙蛋白 双抗夹心酶联免疫吸附法 心肌损伤
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