杜氏盐藻两种碳酸酐酶基因启动子的克隆和功能研究

将克隆得到的杜氏盐藻DCA1和CA基因的启动子区与bar基因和NOSpolyA终止子片段融合 ,分别构建成 pMDDC B和pMDC B转基因杜氏盐藻表达载体。用基因枪法将两种表达载体转化入杜氏盐藻细胞 ,通过除草剂草丁膦筛选培养获得转化藻株 ,对转化藻株进行分析。对转化杜氏盐藻藻株的筛选培养结果表明 :pMDDC B和pMDC B载体中的外源bar基因能在杜氏盐藻细胞中稳定或瞬时表达。同时在氦气压力为 6 90kPa条件下 ,微弹轰击 2次比微弹轰击 1次或 3次的效果更好。对 pMDDC B转化杜氏盐藻得到的稳定表达的转化藻株进行的PCR和Southern印迹分析的结果表明 :外源的bar基因确已整合到杜氏盐藻基因组中。Northern印迹分析表明 :DCA1基因启动子驱动bar基因在杜氏盐藻细胞中的表达效率受氯化钠浓度梯度调控。推测首次克隆得到的DCA1基因启动子可能是一种活性高、安全性好的高渗诱导性启动子 ;杜氏盐藻DCA1和CA基因启动子区的GT高度重复序列 。

杜氏盐藻2种碳酸酐酶基因跨内含子DNA序列的克隆和鉴定

目的 :克隆杜氏盐藻双拷贝碳酸酐酶 (DCA1 )和碳酸酐酶 (CA1 )基因跨内含子基因组DNA序列。方法 :利用跨内含子PCR方法 ,从杜氏盐藻基因组中克隆DCA1和CA1基因跨内含子基因组DNA序列。结果 :DCA1基因跨内含子长度为 4 4 0 7bp ,含 7个外显子 ,由此推定的氨基酸序列长度为 5 5 5个氨基酸残基 ;而CA1基因跨内含子长度为 4 4 73bp ,含 8个外显子 ,其推定的氨基酸序列长度为 4 98个氨基酸残基。这 2种基因的所有外显子 -内含子交接点处序列都遵守GT -AG规律。结论